Completo 1°Clonagem - Strain: Flórida

Boa Noite. Há um tempo estou querendo fazer uma clonagem, ja tinha lido sobre e fiquei enrolando, até q resolvi arrumar uns materiais pra tentar fazer pela 1°vez.

Estou com um Casing de Flórida a um tempo no terrário e esta dando o 4°Flush, escolhi o cogu maior e mais bonito e iniciei o processo... coloquei os materiais na glovebox: Bisturi, papel encharcado com alcool 70%, e os vidros de cl esterilizados na panela de pressão, as tampas de borracha injetável tbm foram esterilizadas na PP... todos eles embrulhados em papel alumínio e retirado apenas dentro da Glove.

Abri o cogu grande com a mão seguindo a assepsia correta, com o bisturi tirei pequenos pedaços do interior. Uns potes tiveram pedaços menores que o outro. Eu fiz 6 potes pra aumentar as chances de sucesso, cada pote cabem 50ml. A cl foi feita com 250ml de água e 5g de Dextrose dessas sem sabor comprada em lojas de suplemento... Quero agradecer ao @kinney pela ajuda em arrumar os potes. E agradecer ao @Amaral que deu algumas dicas....


O Cogumelo escolhido.


Trabalho feito na Glove(não tirei foto no meio do processo pra não aumentar as chances de erro).


pote 2 e 3, tem mais 4.


O cogumelo tinha uma biomassa bonita por dentro, não era oco e ficou BEM azul na hora.


Guardado esperando a colonização.

Logo volto com atualizações....

 

[cubensisdedread]

Boa Dia CM, Acho que realmente valeu a pena quebrar os Bolos e montar Casing. Acordei e tive uma surpresa ao olhar pro Casing, e ver essa Beleza...
Achei os cogumelos bonitos, e uns até mais carnudos do q o normal pros Flóridas.... Isso já pode começar a ser o Resultado da Clonagem ? Abortos tiveram praticamente 0.


O time Lapse ficou bem pqno, apenas da abertura dos chapéis... vou passar pro pc dps atualizo aqui

 

[User03]

Que coisa doida esses frutos mano!

Parabéns!

 

[Amaral]

Isso é uma flush de clonagem
Parabéns hermano, mando muito

 

[cubensisdedread]

Boa Noite Galera... Fiquei muito feliz com esse resultado da Clonagem, e então selecionei os 3 maiores cogus, e clonei pra outras placas de BDA.
O Maior desse cluster foi clonado
O maior desse cluster tbm foi clonado
O 3° Cogu nao tirei foto pq resolvi clonar depois, na placa q tinha sobrado.
Processo de Clonagem, Usando de ferramenta um Extrator de Tártaro, um Bisturi e uma Pinça, todos esterilizados na PP


Fiz um total de 5 placas. 2 placas com o cogu maior da 1°foto. 2 placas com o cogu da 2° foto, e uma placa com o cogu q ñ tirei foto


Bom, O Casing que frutificou eu tirei do recipiente, cobri bem com vermiculita em cima e na lateral e deixei bem úmido, vou aproveitar q tenho umidificador e creio q não vai faltar umidade.


Agora, o Time-Lapse que eu fiquei devendo... Mas como eu disse, fiz apenas dos chapéis se abrindo... Meu celular apagou depois do 3° dia seguido na tomada, deu sinal de bateria com um X.. consegui ligar algumas horas depois mas o vídeo não estava Salvo.. Com certeza seria um Time-Lapse ótimo. Mas o jeito que ficou eu achei bem bonito. Quem sabe o Próximo não sai 100%.



Logo atualizo... amanha devo estar montando os casing e bulks.

 

[Cosmik]

Eventualmente todas as coisas boas um dia chegam ao fim. Nos seres vivos esse processo é conhecido como "senescência celular". Ou seja, clonagem após clonagem inevitavelmente chegará ao envelhecimento ou enfraquecimento celular. Causando deformações/mutações nos frutos.

Acredito que a melhor maneira para "driblar" a senescência celular perante as sucessivas clonagens, é carimbar um clone, frutificá-los a partir dos esporos e então clonar novamente, e então carimbá-los e assim por diante. Não lembro exatamente as razões científicas, o que citei é fruto de memórias remotas.

 

[cubensisdedread]

Eventualmente todas as coisas boas um dia chegam ao fim. Nos seres vivos esse processo é conhecido como "senescência celular". Ou seja, clonagem após clonagem inevitavelmente chegará ao envelhecimento ou enfraquecimento celular. Causando deformações/mutações nos frutos.

Acredito que a melhor maneira para "driblar" a senescência celular perante as sucessivas clonagens, é carimbar um clone, frutificá-los a partir dos esporos e então clonar novamente, e então carimbá-los e assim por diante. Não lembro exatamente as razões científicas, o que citei é fruto de memórias remotas.

Obrigado, Cosmik. Eu não sabia desse lance não, muito bom saber. Bom que eu ainda tenho uns copos aqui prontos dessa Primeira Clonagem, ai quando nascer vou fazer da maneira que vc citou, tirar um print e partir pra Clonagem do fruto q nascer. Obrigado

 

[Ecuador]

Acredito que a melhor maneira para "driblar" a senescência celular perante as sucessivas clonagens, é carimbar um clone, frutificá-los a partir dos esporos

Tudo indica que fazer um cultivo multiesporos a partir de um carimbo de clone só serve para induzir de vez a perda de diversidade genética e da robustez da strain.

Se alguém faz um isolamento e após algum tempo ele perde as características desejáveis o caminho é tentar novamente a partir do pool gênico original da strain. Isolamentos parecem bonitos, mas o que mantêm a strain robusta, com bastante diversidade genética e saudável são sucessivos cultivos multiesporos.

E quanto mais diversidade melhor. Esporos vindos de diversos cogumelos da strain, grandes, pequenos, bonitos, feios seria um mundo ideal.

 

[cubensisdedread]

Nos cultivos de cogumelos comestíveis, é feito de qual maneira ? Pensei q eles mantinham a qualidade da produção dessa maneira, quando nascia um cogumelo bonito clonava ele e assim seguia... cultivava e quando nascia um bonito clonava de novo e assim por diante...
E se pegar o clone, jogar no PDA e selecionar as partes mais Rizo, e usalas pra fazer o spawn ? ou repassar pra outras placas... Seria uma maneira de manter a qualidade ?
Minha intenção é aprender a sempre manter a qualidade da ''semente'' (spawn), no caso pra passar isso pros comestíveis, por isso estou treinando nos Cubensis. (ja q os shimejis ainda não colonizaram o milho)

 

[User03]

cultivava e quando nascia um bonito clonava de novo e assim por diante...

@cubensisdedread , você tem que entender o conceito de clone melhor! Clone é um cogumelo geneticamente idêntico ao seu "pai". Isso faz com que todos os cogumelos que nasceram do micélio do "pai" tenham a mesma genética que ele. Se o cogumelo pai foi bonito, vistoso e saudável, os clones também serão, por terem a mesma genética.

Ocorre que, sem a troca de material genético entre cromossomos homólogos (tome como exemplo o crossing over na reprodução humana), os frutos vão perdendo força para o ambiente por causa da pouca mudança genética. Em vez de se ADAPTAREM, eles vão continuar os mesmos, perdendo vitalidade conforme as gerações.

 

[cubensisdedread]

Agora acho q entendi, eu tava dando uma lida no wikipédia mas relacionado a célula humana, mas deu pra entender certo o do cogumelo. Agora entendi pq é melhor Clonar Clonar Carimbar Clonar e assim por diante. . . Vou aproveitar que tenho uns copos prontos, logo que nascer um cogu eu Carimbo, e A partir desse carimbo eu faço outra Clonagem.
Logo chega meu PDA, ai vou poder fazer dessa maneira. Obrigado pela ajuda, essa explicação foi com ctza muito importante

 

[Ecuador]

Nos cultivos de cogumelos comestíveis, é feito de qual maneira ? Pensei q eles mantinham a qualidade da produção dessa maneira, quando nascia um cogumelo bonito clonava ele e assim seguia... cultivava e quando nascia um bonito clonava de novo e assim por diante...

Se você conseguir clonar indefinidamente sem que haja perda do vigor das células pode funcionar. Não sei como é feito nas espécies de cogumelos comestíveis, e pode variar bem de espécie para espécie. Algumas espécies podem ser mais resistentes a clonagens sucessivas, ou mesmo à perda da variabilidade genética. Tem que examinar bem a literatura a respeito, e suspeito que há muita reserva de informações nesse segmento, afinal os detalhes técnicos valem dinheiro.

Quanto à perda da variabilidade nos comestíveis e efeitos prejudiciais da mesma achei em uma rápida pesquisa esse artigo, sobre Agaricus bisporus, mas ainda não li todo: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1206712/

Agora entendi pq é melhor Clonar Clonar Carimbar Clonar e assim por diante. . .

Eu é que não entendi de onde veio essa conclusão
Repetindo:

Tudo indica que fazer um cultivo multiesporos a partir de um carimbo de clone só serve para induzir de vez a perda de diversidade genética e da robustez da strain.

Se alguém faz um isolamento e após algum tempo ele perde as características desejáveis o caminho é tentar novamente a partir do pool gênico original da strain. Isolamentos parecem bonitos, mas o que mantêm a strain robusta, com bastante diversidade genética e saudável são sucessivos cultivos multiesporos.

E quanto mais diversidade melhor. Esporos vindos de diversos cogumelos da strain, grandes, pequenos, bonitos, feios seria um mundo ideal.

E quando eu escrevi pool gênico original quis dizer um cultivo multiesporos da strain que não tenha passado por clonagem ou outro gargalo genético que leve à redução da diversidade.

 

[Amaral]

Agora senti firmeza nessa discussão técnica, orgulho desses meus meninos

 

[cubensisdedread]

Se alguém faz um isolamento e após algum tempo ele perde as características desejáveis o caminho é tentar novamente a partir do pool gênico original da strain. .

Então vamos supor, esse Flórida, eu fiz uma CL de 100ml´s.... Essa Cl guardada seria o ''pool gênico'' original da Strain ? ... Caso as próximas clonagens comece aparecer esse lance de "senescência celular", eu deveria voltar a usar essa CL ''original'' ?
Se for isso, o jeito seria manter guardado uma certa quantidade de CL.. Assim daria pra aumentar a CL sempre passando pra outro pote com mais água e dextrose, mantendo sempre essa 1° clonagem...
mais ou menos isso ?

 

[Ecuador]

Então vamos supor, esse Flórida, eu fiz uma CL de 100ml´s.... Essa Cl guardada seria o ''pool gênico'' original da Strain ? ... Caso as próximas clonagens comece aparecer esse lance de "senescência celular", eu deveria voltar a usar essa CL ''original'' ?

Isso mesmo. Só não sei se dá para conservar a CL conforme você perguntou.

Tem outras técnicas para conservar uma strain em estado de dormência, como as descritas aqui: http://www.cogumelohobby.com/agar conservacao.htm

 

[tupy]

meu @cubensisdedread não consigo te entregar reputação de novo, tá merecendo hein! trabalho de primeira, pessoal anda estudando.

 

[Barcellonn]

Bom Dia. Ontem a noite eu preparei 6 copos feitos com Pó de coco, arroz integral grãos inteiros e um pouco de arroz integral batido no liquidificador acrescentando um pouquinho de calcário de conchas. Vou inocular eles com a CL-1 e CL-3 que foram as mais saudáveis.
Esterilizei os 6 copos com 2 seringas de 10ml

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E hoje de manhã fiz as inoculações

Lado esquerdo CL-1 e lado direito CL-3
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Por enquanto estou com 3 bolos no terrário, que foram inoculados com a CL-1 do clone.
View attachment 62034 Bichos bonitos! @cubensisdedread !

E estou com 4 potes de 700ml na incubadora, inoculados com a CL-3 do Clone. Que terá que ser feito Casing, pois os potes tem a boca menor.
View attachment 62035 View attachment 62036 View attachment 62037 View attachment 62038 Aqui uns dias farei uns furos pra troca de Co2, que já percebi que a colonização está dando uma diminuída na velocidade.
Paz e bem

Boa Dia CM, Acho que realmente valeu a pena quebrar os Bolos e montar Casing. Acordei e tive uma surpresa ao olhar pro Casing, e ver essa Beleza...
Achei os cogumelos bonitos, e uns até mais carnudos do q o normal pros Flóridas.... Isso já pode começar a ser o Resultado da Clonagem ? Abortos tiveram praticamente 0.
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O time Lapse ficou bem pqno, apenas da abertura dos chapéis... vou passar pro pc dps atualizo aqui

Pense em um show!!! Que bonitões! @cubensisdedread Parabéns mais uma vez!

 

[cubensisdedread]

Boa Tarde. Estou montando um Bulk com os clones de flórida.
O Bulk é de esterco Bovino com esterco de Frango um pouco de mato seco e uma porção de vermiculita misturada com pó de coco e calcário de conchas.

O Bulk vai ter perto de 7 litros, ao todo, contando com Spawn e Bulk.

______________________________
O Casing que frutificou bem eu dei um Dunk, retirei do recipiente plástico e fiz um roll em vermiculita esterilizada e coloquei de volta no terrário.
Coloco gelo pra temperatura cair, e logo em seguida deixo o umidificador ligado um pouco, assim evita q a umidade caia rápido/bastante.

 

[cubensisdedread]

Ontem peguei 3 bolos feitos em copos americanos 100% com Clone de Flórida e coloquei em Dunk e Coldshock até hj. Logo que acordei resolvi montar o Casing.
Vou dar vida ao Crânio novamente... O outro cultivo no cRânio eu nao tinha dunkado e tbm n era clonagem, acho q esse vai ficar mais bonito pra tirar umas fotos. Pretendo fazer um Time-Lapse se tudo der certo.
A, e dessa vez coloquei Spawn nos olhos e nariz tbm, vamos ver se nasce ali


Terminando a Pasteurização do Substrato Bulk q será montado hoje, também com os clones de flórida.
15 copos de esterco bovino/caprino
7 copos de esterco de frango
5 copos de mato seco
5 copos de pó de coco
5 copos de vermiculita
Calcário de conchas

será usado spawn feito com pó de coco e Arroz integral e 1 pote de spawn de Milho, de acordo com a foto da última postagem.
ótimo 2014 a todos.

 

[Uru-Eu-Wã-Wã]

Belo cultivo, dread!! Confesso que ainda não li todos os posts, pq realmente o seu esquema tá massivo, mas dei uma flanadinha pelas 8 páginas. Mas os cogus estão lindos, parabéns pela clonagem (muito) bem sucedida, dá gosto ver as fotos!

Só uma coisa, no time lapse me pareceu que tem dois cogus com o chapéu rachado, mas pode ser impressão, já que eles estão de perfil e não dá pra ver direito... mas se realmente for isso (uns "cortes" em X ou linha no chapéu), pode ser um sinal de baixa umidade. Nunca tentei usar uma bomba de aquário sem nenhum outro umidificador (perlita ou argila expandida), vc chegou a medir pra ver se a umidade na câmara fica alta?

Outra coisa que eu percebi ultimamente é que, mesmo se o ambiente estiver bem úmido, sempre compensa borrifar água nos casings umas 2-3 vezes por dia. Li por aí que isso ajuda a reidratar o substrato, que é uma coisa que não vai acontecer sozinha mesmo se vc estiver com um rh de mais de 90%

Abraços e boas energias pros novos bulks

 

[Cosmik]

Outra coisa que eu percebi ultimamente é que, mesmo se o ambiente estiver bem úmido, sempre compensa borrifar água nos casings umas 2-3 vezes por dia. Li por aí que isso ajuda a reidratar o substrato, que é uma coisa que não vai acontecer sozinha mesmo se vc estiver com um rh de mais de 90%

Leu aonde exatamente? Seria bom citar as fontes.
Na minha opinião, borrifar tudo isso de água perde todo o propósito do casing e dunk. E também pode danificar os nó hifais, prejudicando a pinagem.