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Preparação de Agar - Meios em Placas de Petri

Segue mais um dos bons tutoriais da MRCA, desta vez tentei fazer algumas pequenas modificações no tutorial pra incluir algumas praticidades da biblioteca. O que estiver escrito de marrom são as modificações feitas por mim. Me corrijam se tiver algo errado nas minhas adaptações para a biblioteca.

Pode ser que existam erros ortográficos ainda, me corrijam se assim for!

Abraços


Introdução:


Sugestão de receita para 1,5 litro de agar (apropriado para a maioria das espécies de cogumelo):
  • 20 g de agar-agar
  • 20 g de Extrato de malte
  • 2 g de Levadura seca
  • 1 g de Peptídeo
  • 1 litro de água de potável
Glovebox ou Filtro HEPA (ambiente estéril).

Nota 1:
Existem inúmeras receitas de meio agar que podem ser utilizada alternativamente. Para uma lista com varias receitas clique aqui.
  • Frasco Erlenmeyer de 250 ml ou 500 ml (garrafas de uísque também servem)
  • Placas de Petri descartáveis pre-esterilizadas ou Placas de Petri de vidro
  • Jarra graduada
  • Balança digital
  • Parafilm
  • Luvas de látex
  • Mascara protetora e touca
  • Meio desinfetante
  • Desinfetante de mão
Para esterilização é recomendável uma panela de pressão com indicador de pressão.

Procedimento geral:


Misture os ingredientes (de acordo com a receita usada) com água quente. Um frasco Erlenmeyer será o mais apropriado para este procedimento (enrosque bem a tampa e misture). É recomendável encher apenas 2/3 do recipiente com o meio. Para evitar condensação de água, coloque papel alumínio envolta do pescoço do recipiente. (Molde um tubo de alumínio envolta do recipiente e dobre a ponta do alumínio para o lado - deixe o alumínio frouxo para permitir a ventilação).

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Frasco Erlenmeyer com meio agar e papel alumínio.​

Nota 2: Se você estiver usando uma garrafa de whisky, tampe a boca com um pouco de algodão, enrosque a tampa da garrafa com um furo no meio para permitir a ventilação e depois envolver com alumínio. O algodão vai evitar que o meio saia pra fora do recipiente durante a esterilização.

É recomendável esterilizar o meio agar a 121°C/250°F / 15 psi/1,05 bar por 45 minutos. Favor, ler as instruções de sua panela de pressão! O tempo conta quando a pressão requerida é alcançada.

Nota 3: Algumas receitas incluem dextrose, caso você usar uma dessas receitas é recomendável diminuir o tempo de pressão para 20-25 minutos para evitar o risco de caramelização.

Depois que a panela esfriar e a pressão tiver chegado ao ponto 0, você pode abrir a panela. É importante que você ponha a panela para esfriar em um quarto limpo que será também usado para trabalhos posteriores. O uso de um filtro HEPA é altamente recomendável.

Agora você deve trabalhar rápido ou o agar vai coagular enquanto você dispensa ele nas placas de Petri. É recomendável 20 ml de agar para cada placa de Petri (diâmetro 90 mm). Assim você confecciona 50 placas Petri de um litro de meio agar. Deixe as placas de Petri cheias dentro de uma glovebox ou coloque-as em frente a um filtro HEPA para esfriarem.

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O frasco Erlenmeyer estará muito quente após a esterilização - use papel de cozinha para evitar queimar os dedos! Encha as placas de Petri e feche-as imediatamente - encha apenas 1/3 da placa com meio agar.

Nota 4:
Se você usar uma garrafa de uísque use um pano limpo de cozinha ou luvas de forno. Garrafas de vidro estarão mais quentes que frascos de plastico sendo necessário o uso de algo mais gordo
para segurá-la.

Outro método é misturar os ingredientes do meio agar com água muito quente (misture bem para solubilizar os ingredientes). Agora encha as placas de Petri de vidro com o meio agar e coloque-as na panela de pressão para a esterilização. :teo_atencao: Importante: Use placas de Petri de vidro - placas de plastico poderão derreter.

Assim que o meio agar estiver coagulado e tiver resfriado a temperatura ambiente, eles poderão ser usados. Se você não usar todas as placas de uma vez, você pode armazená-las por poucos dias na geladeira (+4°C até +6°C). Para evitar contaminações, é recomendável selar as placas com Parafilm.
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