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Germinando Esporos em Meio de Agar.

Estou traduzindo alguns tutoriais de um banco de cogumelos austríaco. Evidentemente os tutoriais não são os melhores para o padrão brasileiro devido aos materiais de laboratório serem difíceis de encontrar.

Sugestões para adaptá-lo a um padrão brasileiro serão aceitas. Um exemplo para adaptação é por exemplo em vez de usar o anel de inoculação, que seria muito difícil encontrar no brasil, poderia usar uma colher de chá esterilizada.

De qualquer maneira acho que vai ser uma ótima complementação pra biblioteca, para que o pessoal veja como é feito os procedimentos a um nível profissional.




Você pode facilmente germinar esporos em meio de agar. O micélio proveniente é chamado de "Multi-Cultura" em oposição a clone. Com esse método de germinação de esporos você não vai conseguir cópias de genótipos idênticos em uma cultura de cogumelos - de esporos se desenvolvem novos organismos de uma mesma espécie. A maioria dos carimbos confeccionados em condições caseiras podem estar contaminados com algum tipo de bactéria, então é recomendável (ainda que não necessário) usar meios de agar com antibiótico para germinação de esporos. É possível também desenvolver micélio a partir de seringas de esporos, seguindo as instruções deste tutorial.

Materiais Recomendados:

  • Esporos (Seringa de esporos ou Carimbo de esporos)
  • Meio de Agar em Placas de Petri.
  • Anel de inoculação
  • Parafilm para selar as Placas Petri.
  • Lampião de álcool
  • Máscara protetora e Touca
  • Luvas de Látex
  • Desinfetante para mãos
  • Desinfetante para ambiente
  • Ambiente estéril (Glovebox, Filtro HEPA)

Procedimento:


Para manter outros micro-organismos (bactérias, mofos, etc.) longe do meio de agar, é recomendado o uso de uma glovebox ou Filtro HEPA. Borrife e limpe o ambiente e as suas mãos com o desinfetante. Para redução de riscos de contaminação é recomendável o uso de luvas, máscara protetora e touca.

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Pegue o anel de inoculação e esfregue-o sobre o carimbo de esporos para coletar esporos (esfregue até conseguir uma mancha preta de esporos no anel). Se você está usando um anel de inoculação re-utilizável de metal, você deve antes esquentá-lo na chama do lampião (passe o anel no fogo até o metal ficar vermelho). Deixe esfriar uns segundos em temperatura ambiente antes de introduzir o anel no carimbo de esporos. Não toque no anel de inoculação, carimbo de esporos ou no meio de agar com os dedos e nem permita o contato de qualquer outra fonte de contaminação!

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Agora deposite os esporos coletado com o anel no meio de agar. Desenhe com o anel um "S" no meio de agar. Para reduzir o risco de contaminação trabalhe rápido e abra a placa de Petri somente o tempo suficiente pra proceder com a inoculação dos esporos. Sele a placa de Petri imediatamente com parafilm após ter depositado os esporos. Se você usar seringa de esporos, deposite uma poucas gotas (1-2 ml) de solução aquosa de esporos em cada placa de Petri.
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É recomendável fazer 5 placas de Petri por carimbo de esporos, porque nem todos os esporos vão germinar iguais. Durante o crescimento do micélio a partir de esporos, guarde as placas na temperatura ideal de acordo com as condições de crescimento da espécie de cogumelos que você estiver cultivando. Depois de alguns dias, a germinação de esporos e o consequente crescimento do micélio vai ficar suficientemente forte para ser observado a olho nu.

Para um ótimo crescimento é recomendado selecionar genótipos de micélio rizomórfico antes de inocular grãos ou substratos.
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