- 2º DIÁRIO -
STRAIN: MDK
SUBSTRATO DE CULTIVO: ARROZ + VERMICULITA
MÉTODO DE CULTIVO: -A definir-
PROPORÇÃO: 2:1:1
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ETAPA 1 (ESTERILIZAÇÃO E CONFECÇÃO DA SERINGA):
STRAIN: MDK
SUBSTRATO DE CULTIVO: ARROZ + VERMICULITA
MÉTODO DE CULTIVO: -A definir-
PROPORÇÃO: 2:1:1
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ETAPA 1 (ESTERILIZAÇÃO E CONFECÇÃO DA SERINGA):
Materiais utilizados:
-Espátula dupla de manicure INOX
-Álcool 70º
-7 copos de vidro de requeijão
-Folha de Alumínio
-Vermiculita
-Arroz integral
-Água Potável (Sem/Menos cloro)
-Seringa ESTÉRIL de 10mL com agulha
-2 Panelas de pressão
-Panela pequena
-Pote para microondas
-Carimbo de MDK (fornecido por @Malahov)
-3 Velas
-2 Panos para a panela de pressão
-Espátula dupla de manicure INOX
-Álcool 70º
-7 copos de vidro de requeijão
-Folha de Alumínio
-Vermiculita
-Arroz integral
-Água Potável (Sem/Menos cloro)
-Seringa ESTÉRIL de 10mL com agulha
-2 Panelas de pressão
-Panela pequena
-Pote para microondas
-Carimbo de MDK (fornecido por @Malahov)
-3 Velas
-2 Panos para a panela de pressão
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Iniciei esterilizando a vermiculita, pois acho que ela foi a fonte dos meus problemas no meu primeiro diário.
Hidratei bem a vermiculita e escorri o excesso de água e levei ao microondas dentro de um pote específico por 5 minutos. Enquanto isso limpei os copos com álcool 70º e triturei 1/5 do arroz por vez durante 3~5s. Acabei errando na proporção de água por conta de já ter hidratado a vermiculita, porém retirei o excesso, limpei as bordas dos copos e os cobri com duas folhas de papel alumínio, retirando as rebarbas da primeira folha.
Coloquei os panos dobrados e os copos dentro das panelas, colocando uns 3 dedos de água no fundo, levei-as em seguida ao fogo alto, quando começaram a liberar vapor contínuo abaixei o fogo e iniciei a contagem de 1h. Uma das panelas apresentou bolhas saindo por cima durante o processo, mas essa panela era emprestada e não me preocupei tanto (provável que encharcou todo o substrato).
Para preparar a seringa fervi 1 Litro de água por mais de 30min (esqueci no fogo). Acendi 3 velas formando um triângulo na área de confecção, abri a carta e deixei o carimbo semi-desdobrado para evitar problemas.
NO INICÍO EU TENTEI ESTERILIZAR A ESPÁTULA COM UMA DAS VELAS, MAS FORMOU-SE UMA CAMADA PRETA DE FULIGEM NA ESPÁTULA, LIMPEI COM ÁLCOOL 70º NOVAMENTE E UTILIZEI O GÁS DO FOGÃO PARA ESTERILIZAR ELA.
Realizei várias purgas (~5) com a seringa, sempre esterilizando a agulha, para esfriar a água até poder encostar no exterior da xícara e sentir nada mais do que uma leve quentura (temperatura entre 30~50ºC), então retirei a espátula do fogo (já estava quase derretendo) e a esfriei até conseguir colocar a mão (lavada e higienizada com álcool) perto da ponta, esperei mais um pouco para garantir e raspei 1/5 do carimbo. Mais 3 purgas para misturar bem.
ETAPA 2 (INOCULAÇÃO E INCUBAÇÃO):
Materiais utilizados:
-Seringa de Esporos
-Micropore
-Fita isolante
-Folha de Alumínio
Inoculei os 7 copos sem problemas, dois furos em cada encostando na lateral do vidro, mas não no substrato, utilizei cerca de 0,5mL em cada furo. Vedei o furo com micropore após injetar, esterilizando a agulha antes de injetar o próximo.
Os coloquei na incubadora com temperatura programada de 27ºC (Apesar de meu relógio marcar 30ºC durante o dia a temperatura no interior do isopor nunca ultrapassou 28ºC.
Algumas fotos:
Os copos na incubadora:
Primeira leva de Inoculação:
Seringa de esporos:
Close in de alguns copos (Cozinhou muito?):
Final da Inoculação:
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