Buenas Pessoal,
Depois de um tempo sem cultivar, resolvi fazer mais um, desta vez testando um carimbo próprio.
Strain: South American
Técnica: PFTek
Substrato: 1/4 farelo de arroz integral e farelo de Centeio (em proporção 50/50), 2/4 vermiculita, 1/4 água mineral (valor aperoximado pois coloquei um pouquinho menos pois o bolo já estava no ponto antes)
Inoculação: 23/03
Método:
Seringas:
As seringas foram preparadas 3 dias antes da inoculação e foram feitos com carimbos que eu mesmo tirei no meu último cultivo para "testar" e ver se eu tinha feito o carimbo corretamente sem contaminar.
Como das outras vezes todas eu tive bolos contaminados, desta vez tive cuidado máximo com assepsia em todos os passos.
Utilizei uma glove box de fabricação própria que eu ajustei e ficou bem melhor de usar, substituindo as luvas de borracha por luvas veterinárias, que deram maior mobilidade.
Limpei bem a caixa com Álcool 70º, coloquei Lysoform spray e deixei tampada um dia. No dia seguinte repeti o procedimento e depois refiz o processo mais uma vez, mas dessa vez eu coloquei todo o material a ser utilizado (Agua mineral em copinho, copinho estilo "martelinho" seringas de 5ml esterilizada descartável, bisturi com lamina esterilizada, carimbo, garrafinha pet com álcool, papel toalha e ziplock) na caixa, depois de limpar tudo com alcool 70. Esperei até o final do dia porque não queria abrir o carimbo logo em seguida de colocar o lysoform por medo de que isso pudesse afetar os esporos.
Ao abrir o carimbo para despejar no copinho de martelinho, notei que ele estava muuuito fraquinho, quase não dava pra ver. Por receio de não ser suficiente, principalmente pelos bolos serem grandes, preferi pegar outro carimbo, limpá-lo bem com alcool (por fora) e coloquei rapidamente na Glovebox. Confesso que fiquei com receio de ter contaminado, mas não tinha tempo para repetir todo o processo outra vez (que tem filho me entende) e segui os seguintes passos:
1 - Limpei novamente a tampa do copinho de agua mineral.
2 - Suguei água com uma seringa até enchê-la
3 - Despejei a água no copinho.
4 - Repeti os passos 2 e 3
5 - Raspei meio carimbo (era bem pequeno do tamanho de uma moeda de 5 centavos) no copinho
6 - Enchi e esvaziei a seringa algumas vezes pra misurar bem a água e os esporos.
7 - Enchi as dias seringas
8 - Limpei as agulhas com álcool, tampei as agulhas e coloquei as duas seringas num ziplock.
Bolos:
Fiz dois bolos em potes grandes de aproximadamente 500ml , coloquei uma camada fininha de vermiculita no fundo (para evitar que o bolo grude no fundo), o substrato já misturado, coloquei mais um pouco de vermiculita por cima (para evitar entrada de contaminantes) e tampei com duas camadas de papel alumínio. Coloquei um "descansa panela" de silicone no fundo da panela e pano de prato molado ao redor fazendo um circulo para evitar que os potes tocassem a lateral da panela de pressão. Enchi com água até um pouco mais da metade dos potes e levei ao fogo. Depois de começada a pressão, baixei o fogo e deixei por 1h30 e deixei tampada esfriando de um dia pro outro.
Inoculação:
Limpei bem a caixa com Álcool 70º, coloquei Lysoform spray e deixei tampada um dia. No dia seguinte repeti o procedimento e depois refiz o processo mais uma vez, mas dessa vez eu coloquei todo o material a ser utilizado ( seringas com esporos, garrafinha pet com álcool, papel toalha, bolos) na caixa, depois de limpar tudo com alcool 70 e secar bem o pote dos bolos com papel toalha e esperei uns 30 minutos antes de seguir os seguintes passos:
1 - Limpei bem os potes com os bolos já dentro da glovebox mais uma vez com álcool.
2 - retirei a primeira camada de papel alumínio
3 - agitei a seringa inoculei com 6 furos em cada bolo, tentando despejar o liquido de forma a escorrer pelas paredes. Aqui tive dificuldade pois o pote era grande e, com o selo de vermiculita e o papel alumínio, eu não conseguia ver onde estava a agulha nas laterais, assim que foi meio no instinto pois não via o liquido escorrendo.
4 - recoloquei a segunda camada de papel alumínio
5 - lacrei os potes com fita isolante.
Desenvolvimento do micélio.
O micélio demorou muito a dar os primeiros sinais de vida. Foram 10 dias até ver o primeiro sinal, tvz por causa da fita isolante e aluminio tapando o local inicial da inoculação.
Como os potes eram grandes o resto do copo tb demorou a colonizar. Isso me causou um contratempo pois eu tive de viajar e fiquei mais de uma semana fora, justamente quando o bolo estava terminando de colonizar. Eu imaginei que não teria maiores problemas pois normalmente se deixa o copo por mais uma semana depois de aparentemente colonizado para garantir que estará colonizado por dentro tb, mas quando eu votei de viagem um dos bolos ainda estava terminando de colonizar a parte de baixo e o outro já tinha vários pins e até mesmo cogumelos se formando, conforme as fotos abaixo.
Como meu terrário novo ainda não estava pronto, não tive opção se não deixar o pote mais uns dias até eu conseguir terminar o terrário. Ontem à noite terminei (depois eu coloco mais fotos, ficou bem legal) e deixei de teste. Hoje vi que está tudo OK, umidade de 99%, assim que hoje à noite vai ser dia de preparar o bolo que já ta com pins. Tem uma parte um pouco mais escura que me preocupa um pouco, mas não me parece ser contaminação. Se alguém puder me dizer algo agradeço.
Pretendo tirar os pins já grandes para evitar que apodreçam e contaminem. dunk and roll e era isso. Eu queria colocá-los diretamente no terrário, mas como vou ter de viajar este fim de semana e volto só na terça, vou fazer o dunk pra ganhar um dia.
Segue as fotos:
A mancha a que me refiro são as das fotos numero 560, 562 e 563
Depois de um tempo sem cultivar, resolvi fazer mais um, desta vez testando um carimbo próprio.
Strain: South American
Técnica: PFTek
Substrato: 1/4 farelo de arroz integral e farelo de Centeio (em proporção 50/50), 2/4 vermiculita, 1/4 água mineral (valor aperoximado pois coloquei um pouquinho menos pois o bolo já estava no ponto antes)
Inoculação: 23/03
Método:
Seringas:
As seringas foram preparadas 3 dias antes da inoculação e foram feitos com carimbos que eu mesmo tirei no meu último cultivo para "testar" e ver se eu tinha feito o carimbo corretamente sem contaminar.
Como das outras vezes todas eu tive bolos contaminados, desta vez tive cuidado máximo com assepsia em todos os passos.
Utilizei uma glove box de fabricação própria que eu ajustei e ficou bem melhor de usar, substituindo as luvas de borracha por luvas veterinárias, que deram maior mobilidade.
Limpei bem a caixa com Álcool 70º, coloquei Lysoform spray e deixei tampada um dia. No dia seguinte repeti o procedimento e depois refiz o processo mais uma vez, mas dessa vez eu coloquei todo o material a ser utilizado (Agua mineral em copinho, copinho estilo "martelinho" seringas de 5ml esterilizada descartável, bisturi com lamina esterilizada, carimbo, garrafinha pet com álcool, papel toalha e ziplock) na caixa, depois de limpar tudo com alcool 70. Esperei até o final do dia porque não queria abrir o carimbo logo em seguida de colocar o lysoform por medo de que isso pudesse afetar os esporos.
Ao abrir o carimbo para despejar no copinho de martelinho, notei que ele estava muuuito fraquinho, quase não dava pra ver. Por receio de não ser suficiente, principalmente pelos bolos serem grandes, preferi pegar outro carimbo, limpá-lo bem com alcool (por fora) e coloquei rapidamente na Glovebox. Confesso que fiquei com receio de ter contaminado, mas não tinha tempo para repetir todo o processo outra vez (que tem filho me entende) e segui os seguintes passos:
1 - Limpei novamente a tampa do copinho de agua mineral.
2 - Suguei água com uma seringa até enchê-la
3 - Despejei a água no copinho.
4 - Repeti os passos 2 e 3
5 - Raspei meio carimbo (era bem pequeno do tamanho de uma moeda de 5 centavos) no copinho
6 - Enchi e esvaziei a seringa algumas vezes pra misurar bem a água e os esporos.
7 - Enchi as dias seringas
8 - Limpei as agulhas com álcool, tampei as agulhas e coloquei as duas seringas num ziplock.
Bolos:
Fiz dois bolos em potes grandes de aproximadamente 500ml , coloquei uma camada fininha de vermiculita no fundo (para evitar que o bolo grude no fundo), o substrato já misturado, coloquei mais um pouco de vermiculita por cima (para evitar entrada de contaminantes) e tampei com duas camadas de papel alumínio. Coloquei um "descansa panela" de silicone no fundo da panela e pano de prato molado ao redor fazendo um circulo para evitar que os potes tocassem a lateral da panela de pressão. Enchi com água até um pouco mais da metade dos potes e levei ao fogo. Depois de começada a pressão, baixei o fogo e deixei por 1h30 e deixei tampada esfriando de um dia pro outro.
Inoculação:
Limpei bem a caixa com Álcool 70º, coloquei Lysoform spray e deixei tampada um dia. No dia seguinte repeti o procedimento e depois refiz o processo mais uma vez, mas dessa vez eu coloquei todo o material a ser utilizado ( seringas com esporos, garrafinha pet com álcool, papel toalha, bolos) na caixa, depois de limpar tudo com alcool 70 e secar bem o pote dos bolos com papel toalha e esperei uns 30 minutos antes de seguir os seguintes passos:
1 - Limpei bem os potes com os bolos já dentro da glovebox mais uma vez com álcool.
2 - retirei a primeira camada de papel alumínio
3 - agitei a seringa inoculei com 6 furos em cada bolo, tentando despejar o liquido de forma a escorrer pelas paredes. Aqui tive dificuldade pois o pote era grande e, com o selo de vermiculita e o papel alumínio, eu não conseguia ver onde estava a agulha nas laterais, assim que foi meio no instinto pois não via o liquido escorrendo.
4 - recoloquei a segunda camada de papel alumínio
5 - lacrei os potes com fita isolante.
Desenvolvimento do micélio.
O micélio demorou muito a dar os primeiros sinais de vida. Foram 10 dias até ver o primeiro sinal, tvz por causa da fita isolante e aluminio tapando o local inicial da inoculação.
Como os potes eram grandes o resto do copo tb demorou a colonizar. Isso me causou um contratempo pois eu tive de viajar e fiquei mais de uma semana fora, justamente quando o bolo estava terminando de colonizar. Eu imaginei que não teria maiores problemas pois normalmente se deixa o copo por mais uma semana depois de aparentemente colonizado para garantir que estará colonizado por dentro tb, mas quando eu votei de viagem um dos bolos ainda estava terminando de colonizar a parte de baixo e o outro já tinha vários pins e até mesmo cogumelos se formando, conforme as fotos abaixo.
Como meu terrário novo ainda não estava pronto, não tive opção se não deixar o pote mais uns dias até eu conseguir terminar o terrário. Ontem à noite terminei (depois eu coloco mais fotos, ficou bem legal) e deixei de teste. Hoje vi que está tudo OK, umidade de 99%, assim que hoje à noite vai ser dia de preparar o bolo que já ta com pins. Tem uma parte um pouco mais escura que me preocupa um pouco, mas não me parece ser contaminação. Se alguém puder me dizer algo agradeço.
Pretendo tirar os pins já grandes para evitar que apodreçam e contaminem. dunk and roll e era isso. Eu queria colocá-los diretamente no terrário, mas como vou ter de viajar este fim de semana e volto só na terça, vou fazer o dunk pra ganhar um dia.
Segue as fotos:
A mancha a que me refiro são as das fotos numero 560, 562 e 563
