Inoculação em AGAR by SUSU

[Ix Chel]

Esterilizei papel por 45 minutos no forno á 120° C.
Esterilizei 10 facas sem cabo e 10 placas petri por 10 min á 120° C , passado 10 min aumentei o forno para 180°C e deixei esterilizando por mais 25 min.

Adcionei no tubo ERLENMEYER

2 gr de agar
2 gr de extrato de malte
E um pouquinho de levedure ( Não sei exatamente quantom menos que o agar e o malte ).
130 ml de aguá da torneira ( a agua da Suíça é muito limpa ).

Agitei o erlenmeyer e tampei com papel toalha amarrando com um barbante de algodão.
Coloquei papel toalha por cima e esterilizei na panela esterilizadora com1 litro de agua por 30 minutos em fogo brando.

Passado os 30 min retirei o erlenmeyer da panela de pressão e coloquei todo material necessario dentro do glovebox novo feito por SHANTI.

Limpei tudo com alcool, sequei todo o glovebox por dentro para que não caisse nenhum pingo de alcool nas placas. ( com o papel esterilizado ).

Abri as placas uma por uma adcionando um pouco do liquido do erlenmyer sem deixar escorrer , tampando logo em seguida as placas.

Deixei as placas esfriarem por 15/20 min e raspei os esporos ( precisei de 2 carimbos)
Colocando as placas de cabeça pra baixo em uma caixinha plastica, ( muito limpa com alcool e bem seca, importante ), lacrei com folha plastica.
Levei a caixa para a incubadora que é meu lindo armario da cozinha..

Pronto, foi..os:

Se não tiver certo da maneira que escrevi , me ajudem aí porfavor..
Já falei que com palavras tecnica ( odeio essa parte ) sou pessima.

Vamos ver agora como ficarão..os::luz:

 

[MicelioCarioca]

Mtoo bom Swelen, gostei mto da glovebox, simples, criativa e eficiente. Procedimento certinho, só acho q seria melhor se vc tivesse feito uma seringa de esporos e tivesse pingado gotas equidistantes ao invez de raspar o print nas placas. Assim vc teria uma melhor seleção. Mas fica a dica ai pra proxima vez. os:

 

[Spitzenkörper]

Era a mesma coisa q eu ia falar.

E da próxima vez, tenta batata dextro-se ágar. A dextrose é a própria glicose e pode ser encontrada facilmente em lojas de academias de fisiculturismo e produtos naturais! Sendo um carboidrato na sua mais simples forma, é bem mais rápida a absorção e consequentemente o crescimento do micélio.

Ah, detalhe para a glovebox R0X do shanti, mto massa!

Você esterilizou as placas de petri?

Me diga, swelen, vc tem o livro The Mushroom Cultivator, do Paul Stamets? É muito massa! Tem boas informações sobre inoculação em ágar!

 

[Fred Muscaria]

morena QUE BELO TRABALHO , VEJO QUE OS COGUNS TEM SE TORNADO SUA
PAIXAO, VC E UNICA ,E AOS POUCOS ESTA ESTABELECENDO UM NOVO MARCO NO FORUM...PARABENS...
VEJO QUE EXISTE UM GRANDE PROPOSITO DESTINADO A VC...

 

[MuiLok]

morena QUE BELO TRABALHO , VEJO QUE OS COGUNS TEM SE TORNADO SUA
PAIXAO, VC E UNICA ,E AOS POUCOS ESTA ESTABELECENDO UM NOVO MARCO NO FORUM...PARABENS...
VEJO QUE EXISTE UM GRANDE PROPOSITO DESTINADO A VC...

Muito bom Swelen!!!
expandindo nas experiências micológicas!!! Parabéns

Com seu trabalho o fórum tem muito a ganhar!!!!!

Good vibes garota!!!!!os:os:os:

 

[Ix Chel]

Mtoo bom Swelen, gostei mto da glovebox, simples, criativa e eficiente. Procedimento certinho, só acho q seria melhor se vc tivesse feito uma seringa de esporos e tivesse pingado gotas equidistantes ao invez de raspar o print nas placas. Assim vc teria uma melhor seleção. Mas fica a dica ai pra proxima vez. os:

Valeu carioca, farei da proxima vez então..os:

 

[SILVIOX]

MANINHA , TO IMPRESSIONADO COM VOCE!!!os:os:osARABENS!!!

 

[Ix Chel]

Era a mesma coisa q eu ia falar.

E da próxima vez, tenta batata dextro-se ágar. A dextrose é a própria glicose e pode ser encontrada facilmente em lojas de academias de fisiculturismo e produtos naturais! Sendo um carboidrato na sua mais simples forma, é bem mais rápida a absorção e consequentemente o crescimento do micélio.

Ah, detalhe para a glovebox R0X do shanti, mto massa!

Você esterilizou as placas de petri?

Me diga, swelen, vc tem o livro The Mushroom Cultivator, do Paul Stamets? É muito massa! Tem boas informações sobre inoculação em ágar!

Sim, esterilizei as placas de petri,.
Os primeiros 10 min á 120° C para que vá esquentando lentamente , passado os 10 min aumentar para 180° C po mais 25 min.
Deixei esfriar por 1 hora.
A glovebox ROX que o shanti fez é mesmo de tirar o chapeu né..
Eu tb adorei..
Não tenho esse livro que vc citou aí em cima não.
Eu infelizmente estou esperando uns livros que encomendei que até agora não chegaram..
Vc tem o e-book desse livro aí?
Se tiver passa ele aí se possivel.os:
SaudaçÕES..

 

[Ix Chel]

FRED:
Fala fredão Musacaria.. Sim os cogumelos se tornarão minha grande paixão..:


MUILOK:
Obrigado muilok..
Cada dia aprendendo mais e mais...


SILVOX:
Fala manito..
Pois é..
Ninguém botava fé...
Agora vamos esperar pra ver como inocularão essas placas aí..
Posto fotos assim que tiver uma mudança aqui..

 

[Spitzenkörper]

Hum, então pelo que eu vejo vc nao esterilozou a placa já com o agar... pq? Para garantir a esterilização?

Outra nota sobre a seringa para ágar, que não é uma seringa de dispensão qualquer. Como no ágar aumentam violentamente as chances de colonização quando se tem boas condições de higiene, o ideal é que você use realmente apenas umas gotas de uma suspensão de esporos altamente diluída. Só pra constar...

Como uma variação, os esporos podem ser raspados diretamente para um tubo com cerca de 10 ml de água esterilizada, depois agitando-se em círculo vigorosamente e diluindo-se até 100 ml por adição de mais água esterilizada, e utilizando-se uma pipeta também esterilizada, fazendo-se inoculação em pontos com 2 a 3 ml da diluição no nutriente. (Usos, bioquímica e atividade biológica do Psilocybe spp. - Omar Geraldo Lopes Diniz)

Se tiver passa ele aí se possível

ok!

 

[VICTOR]

130 ml de aguá da torneira ( a agua da Suíça é muito limpa ).

gostei muito do trabalho, chegou chegando!!!rsrs
Mas por mais que a agua seja limpinha é capaz de conter alguma quimica por causa do tratamento, bom não posso afirmar, mas é provavel algo que faça a agua ficar limpa mas que de uma pequena "atrapalhada" no micélio, aqui eu sei que não se pode confiar na agua da torneira!!!
Otimo trabalho!!!

se alguem tiver informação do tratamento de agua nos paises de primeiro mundo favor postar ai!!

Emanando positive vibrations pra ti e suas experiencias!
Abraço

 

[bufoalvarius]

Parabens pelo trabalho.
Eu adoro palcas de petri e agar. Sempre inicio um cultivo inoculando placas com agar.

Como alguns já comentaram, eu teria feito uma seringa e colocado apenas uma gotinha em cada placa e depois teria espalhado a gota uniformemente na placa com auxilio de uma alça de platina.

Teria tbm esterelizado as placas da mesma forma que vc esterelizou o meio de agar.

Quando fores por o meio (agar) nas placas, evite abrir muito as placas de petri, mesmo estando trabalhando em uma glovebox. Abra apenas o suficiente para o meio entrar nas placas.

Esse agar maltado que vc preparou é o melhor meio de cultura para cogumelos. Nao fique presa ao BDA (batata, dextrose e agar). A menos que voce queria replicar esse micelio, é aconselhavel que voce mude o meio de cultura. Voce ta no caminho certo!
PARABENS e SUCESSO

 

[bufoalvarius]

Para quem deseja ter uma copia da Biblia do cultivador (TMC), escrita pelo Papa Paul Stamets é só baixar no link:
http://scribbles.spiritplants.org/TMC.pdf

Tenho certeza que isso já tem aqui no CM em algum lugar.
Entretanto, para facilitar mais ainda as coisas... tá ai denovo.

ou pelo site: http://pensologosou.no.sapo.pt/micologia.htm
que tem muitas outras coisas

 

[Spitzenkörper]

Nao fique presa ao BDA (batata, dextrose e agar). A menos que voce queria replicar esse micelio, é aconselhavel que voce mude o meio de cultura. Voce ta no caminho certo!
PARABENS e SUCESSO

tem razão, tinha me esquecido desse detalhe...

Estes meios de cultura podem ser utilizados misturados, ou

alternadamente entre as culturas, para que o fungo não fique acostumado com um
meio só e seja forçado a usar partes diferentes do seu genoma para se adaptar aos
diferentes meios, evitando que as cepas percam vigor. (Usos, bioquímica e atividade biológica do Psilocybe spp. - Omar Geraldo Lopes Diniz)​

​

 

[Ix Chel]

FOTOS DE HOJE

 

[Mr.Bluesman]

Muito legal a técnica, estou aprendendo, vamos lá, hehehhe

 

[NeuroFX]

Swelen, vejo que o espírito micológico despontou de vez em você.

Já pensou em montar uma câmara de fluxo laminar em vez de usar glovebox? Me parece que vc teria acesso fácil (e pouco custoso) a um filtro HEPA, ou ULPA.

Seringa de esporos é mais recomendável sim, evita muito tempo de exposição do meio. Com a seringa vc desenha um S no ágar-ágar e pronto. Rapidez é a chave pra se trabalhar com ágar-ágar.

Não sei onde vc comprou as placas, mas aqui já costumam vir esterilizadas.

Mas estou curioso: pra que vc está fazendo essa cultura em ágar-ágar?

Sorte!

 

[Ix Chel]

Swelen, vejo que o espírito micológico despontou de vez em você.

Já pensou em montar uma câmara de fluxo laminar em vez de usar glovebox? Me parece que vc teria acesso fácil (e pouco custoso) a um filtro HEPA, ou ULPA.

Seringa de esporos é mais recomendável sim, evita muito tempo de exposição do meio. Com a seringa vc desenha um S no ágar-ágar e pronto. Rapidez é a chave pra se trabalhar com ágar-ágar.

Não sei onde vc comprou as placas, mas aqui já costumam vir esterilizadas.

Mas estou curioso: pra que vc está fazendo essa cultura em ágar-ágar?

Sorte!

Bom, já pensei em comprar um filtro HEPA sim mas isso vou deixar um pouco pra mais tarde...
Eu mesma esterilizei as placas porque acho que elas não vieram esterilizadas não.
Estou aprendendo isso com o shanti , ainda não sei qual o objetivo que temos com isso..
Em breve saberei...: Obrigado NEURO.

 

[shanti]

Swelen, vejo que o espírito micológico despontou de vez em você.

Não sei onde vc comprou as placas, mas aqui já costumam vir esterilizadas.

Mas estou curioso: pra que vc está fazendo essa cultura em ágar-ágar?

Há também na Suíça petris preesterilizado feito de plástico. Eles são para uma vez utilização e alguém esterilizado os em algum lugares esperançosamente.

Os que nós compramos são feitos de vidro, e não são preesterilizados, mas nós podemos usá-los cento vezes e sabemos com certeza como eles foram esterilizados..... acho que isto é muito melhor e mais barato naturalmente.

Há pelo menos dois maneiras para esterilizar placas de vidro. (1) Antes esterilizar no forno como nós fazemos e então pôs líquido de agar quente neles embaixo de esterilizou atmosfera, ou (2) esterilize-os no autoclave já continente o agar líquido . O segundo seria mais fácil de fazer, mas quando eu o tentei, eu achei que o primeiro método desse petris muito melhor. Eles são não assim a umidade e o agar faz uma superfície mais agradável


Algumas das vantagens da cultivação placas são:

1.) Cultive uma sub-strain pura, visível sem contaminação.
.....Permita talves os placeas de contaminar... de acordo.... como pode
acontecer com carimbos ruim ..... mas evite para perder centeio e
cereais.

2) O longo depósito de tempo de mycel no refrigerador em lugar de carimbos,
permite de armazenar mycel/ cogumelos geneticamente conhecidos, o que é
útil para strubstrains boas

3) Seleção de sub-strains fortes sobre petris, rhizinomorph, aumento
rápido

4) Vacinação segura com carimbos raro e caro

5) Cultivação de clones com strains boas

6) Cultivação de mycel líquido para a inoculação de quantias grandes
de centeio e cereais

 

[Mortandello]

Algumas das vantagens da cultivação placas são:

1.) Cultive uma sub-strain pura, visível sem contaminação.
.....Permita talves os placeas de contaminar... de acordo.... como pode
acontecer com carimbos ruim ..... mas evite para perder centeio e
cereais.

2) O longo depósito de tempo de mycel no refrigerador em lugar de carimbos,
permite de armazenar mycel/ cogumelos geneticamente conhecidos, o que é
útil para strubstrains boas

3) Seleção de sub-strains fortes sobre petris, rhizinomorph, aumento
rápido

4) Vacinação segura com carimbos raro e caro

5) Cultivação de clones com strains boas

6) Cultivação de mycel líquido para a inoculação de quantias grandes
de centeio e cereais

Para Dar uma Complementada, temos dois artigos Otimos que sao a continuaçao lógica do processo de isolamento e seleçao:

Apostando na genética por @Cygnus X 1

e Por EU
Isolamento de Sub-strains: Os cubensis tiram alguma vantagem real de isolamentos?
(traduçao de um artigo do mycotopia)

e se ficar alguma duvida quanto a morfologia dos cubensis, ainda temos:
Usos, Bioquímica E Atividade Biológica Do Psilocybe Spp.