Com seringas prontas posso trabalhar em várias aplicações de microscopia. Observar o processo germinativo dos fungos. Servem também como prática para inoculação de variedades de espécies comestíveis. Escolhi o P. Cubensis por ser um dos o mais resistentes do gênero.
Confecção das seringas com esporos
Na confecção das seringas trabalhei com as mãos dentro de uma glovebox limpa e desinfetada. Uso excessivo de água sanitária no isopor, secagem, muito álcool.
Seringas foram compradas novas, logo, dispensam o processo de esterilização, somente foi passado um guardanapo com álcool na parte externa das embalagens.
A água utilizada para a confecção das seringas, encontrada em qualquer farmácia.
Retirada a tampa da embalagem e posto um esparadrapo, facilitando assim, a retirada de água com a agulha da seringa.
Antes de iniciar a confecção da seringa dentro da "glovebox" observe se todos os materias já se encontram dentro da caixa, evitando assim a sua abertura a todo momento. A partir do momento em que a caixa é esterilizada com álcool e todos os materias que ali entram também estão esterilizados, não se deve mais abrir a caixa.
Recorte e abra a embalagem
Embalagem da agulha
Retirando o copo (onde será feita a mistura água+esporos) dentro de embalagem estéril.
Passando mais um algodão com álcool no copo
Abrindo o carimbo de esporos
Algodão com álcool no carimbo de esporos (parte externa)
Mais um álcool na tesouro de procedimentos
Um belo exemplar!
Recortei o carimbo de esporos no meio, para render mais seringas
Com a colherzinha de procedimentos devidamente esterilizada, raspe suavemente os esporos dentro do copo
Até não sobrar mais nada
Sugue a água com a seringa do vasilhame
Injete no copo
Sugue novamente a água, jogue novamente no copo, fazendo isso, estarás misturando bem a água com os esporos
A mistura ficou bem homogenea
Feche a seringa
O carimbo de esporos foi confeccionado em 2007, já tendo mais de ano, é possível que os esporos possam estar um pouco desidratados. Deixei as seringas 48horas em repouso na geladeira, assepticamente lacradas, para reidratarem.
Preparei quatro seringas de 20ml cada.
..................................................................................................
Preparo do substrato
Primeiramente, os copos que serão usados, foram esterilizados por 15min em fogo alto
Feche a tampa para ter melhores resultados
Pano dobrado no fundo da panela, encha os vidros com água.
Deixar secar os copos ao natural, para evitar fiapos de algodão.
Não apoiar os copos em superfície fria, vai trincar.
Vermiculita (média) + Água mineral + Farinha de Arroz Integral (moída no liquidificar para despedaçar-se) + copo, bacia de porcelana e luvas para procedimento.
Coloca-se 02 copos de vermiculita na bacia e acrescenta-se 01 copo de água
Misture
Só então acrescentei 01 copo de FAI, percebi que assim, nessa ordem: vermiculita+água e depois FAI, o composto fica mais aerado.
Pegando na mão, dessa forma, você percebe que o composto está no ponto.
Um zoom no composto
Um substrato encharcado é dificil de colonizar e propício a contaminações.
Passe um pano com álcool nos copos
Com uma colher, coloque o composto dentro do copo limpo
Deixe um espaço, é onde será acrescentada a vermiculita
Acrescente a vermiculita
Ainda assim, deixe um pequeno espaço livre em cima do copo
Amasse, bem de leve, a vermiculita nas bordas e no meio, firmando assim o composto.
Percebe-se na foto, que alguns fragmentos do composto ficam grudados na borda do copo.
Um guardanapo com álcool e limpe vigorosamente essas bordas
Faça em todos os copos
Passe um álcool em todos os recortes do papel alumínio
Feche bem com papel alumínio os copos que irão para a panela de pressão
Fiz 02 furos em cada copo, e coloquei + uma camada de folha de papel alumínio por cima
Na panela de pressão, observe bem a integridade da panela, pino de emergência (vermelho), borracha de lacre.
Coloque um pano de copo no fundo, evitando assim o contato dos copos direto com o fundo da panela, e que estes batam muito um no outro, podendo eventualmente rachar.
Coloquei água fervida e previamente resfriada, foi 1Litro
1Litro foi o suficiente de água para a panela de pressão trabalhar:
- 10 minutos em fogo alto
- 60 minutos em fogo baixo
- 30 minutos (finais) em fogo alto
Minha panela é de 7,5 litros, 1 Litro de água foi o suficiente para não faltar água e queimar o pano ou acontecer algum acidente.
A panela ficou em repouso por 12 horas, esfriando.
....................................................................................................
Inoculação
Quanto a retirada dos copos de dentro da panela de pressão para irem dentro da "glovebox". Utilizei-me de touca cirúrgica, luvas e máscara, o quarto fechado para não haver circulação de ar. Um ambiente estéril.
Álcool na panela antes de abrir e nas mãos com luvas.
Retirando a primeira camada do papel, já dentro da glovebox.
Abrindo o invólucro das seringas que estavam na geladeira
Passe um álcool
Mergulho a seringa em um copo com álcool antes de cada inoculação, dou uma batidinha na seringa com os dedos para o álcool cair.
Esprema a seringa devagar, fiz 02 furos equidistantes em cada copo, 2,5ml em cada furo, 05ml por copo
Feita a inoculação, coloque uma camada de papel alumínio por sobre o copo e feche-o, não esquecendo de passar um álcool na folha antes de agregá-la ao copo
Muito importante se retirar as rebarbas de papel alumínio
Com os copos fora da glovebox, faça a vedação com fita
.........................................................................................
MONTANDO A "GLOVEBOX" (passo-a-passo)
https://teonanacatl.org/threads/mexican-palenque.3704/
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Confecção das seringas com esporos
Na confecção das seringas trabalhei com as mãos dentro de uma glovebox limpa e desinfetada. Uso excessivo de água sanitária no isopor, secagem, muito álcool.
Seringas foram compradas novas, logo, dispensam o processo de esterilização, somente foi passado um guardanapo com álcool na parte externa das embalagens.
A água utilizada para a confecção das seringas, encontrada em qualquer farmácia.
Retirada a tampa da embalagem e posto um esparadrapo, facilitando assim, a retirada de água com a agulha da seringa.
Antes de iniciar a confecção da seringa dentro da "glovebox" observe se todos os materias já se encontram dentro da caixa, evitando assim a sua abertura a todo momento. A partir do momento em que a caixa é esterilizada com álcool e todos os materias que ali entram também estão esterilizados, não se deve mais abrir a caixa.
Recorte e abra a embalagem
Embalagem da agulha
Retirando o copo (onde será feita a mistura água+esporos) dentro de embalagem estéril.
Passando mais um algodão com álcool no copo
Abrindo o carimbo de esporos
Algodão com álcool no carimbo de esporos (parte externa)
Mais um álcool na tesouro de procedimentos
Um belo exemplar!
Recortei o carimbo de esporos no meio, para render mais seringas
Com a colherzinha de procedimentos devidamente esterilizada, raspe suavemente os esporos dentro do copo
Até não sobrar mais nada
Sugue a água com a seringa do vasilhame
Injete no copo
Sugue novamente a água, jogue novamente no copo, fazendo isso, estarás misturando bem a água com os esporos
A mistura ficou bem homogenea
Feche a seringa
O carimbo de esporos foi confeccionado em 2007, já tendo mais de ano, é possível que os esporos possam estar um pouco desidratados. Deixei as seringas 48horas em repouso na geladeira, assepticamente lacradas, para reidratarem.
Preparei quatro seringas de 20ml cada.
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Preparo do substrato
Primeiramente, os copos que serão usados, foram esterilizados por 15min em fogo alto
Feche a tampa para ter melhores resultados
Pano dobrado no fundo da panela, encha os vidros com água.
Deixar secar os copos ao natural, para evitar fiapos de algodão.
Não apoiar os copos em superfície fria, vai trincar.
Vermiculita (média) + Água mineral + Farinha de Arroz Integral (moída no liquidificar para despedaçar-se) + copo, bacia de porcelana e luvas para procedimento.
Coloca-se 02 copos de vermiculita na bacia e acrescenta-se 01 copo de água
Misture
Só então acrescentei 01 copo de FAI, percebi que assim, nessa ordem: vermiculita+água e depois FAI, o composto fica mais aerado.
Pegando na mão, dessa forma, você percebe que o composto está no ponto.
Um zoom no composto
Um substrato encharcado é dificil de colonizar e propício a contaminações.
Passe um pano com álcool nos copos
Com uma colher, coloque o composto dentro do copo limpo
Deixe um espaço, é onde será acrescentada a vermiculita
Acrescente a vermiculita
Ainda assim, deixe um pequeno espaço livre em cima do copo
Amasse, bem de leve, a vermiculita nas bordas e no meio, firmando assim o composto.
Percebe-se na foto, que alguns fragmentos do composto ficam grudados na borda do copo.
Um guardanapo com álcool e limpe vigorosamente essas bordas
Faça em todos os copos
Passe um álcool em todos os recortes do papel alumínio
Feche bem com papel alumínio os copos que irão para a panela de pressão
Fiz 02 furos em cada copo, e coloquei + uma camada de folha de papel alumínio por cima
Na panela de pressão, observe bem a integridade da panela, pino de emergência (vermelho), borracha de lacre.
Coloque um pano de copo no fundo, evitando assim o contato dos copos direto com o fundo da panela, e que estes batam muito um no outro, podendo eventualmente rachar.
Coloquei água fervida e previamente resfriada, foi 1Litro
1Litro foi o suficiente de água para a panela de pressão trabalhar:
- 10 minutos em fogo alto
- 60 minutos em fogo baixo
- 30 minutos (finais) em fogo alto
Minha panela é de 7,5 litros, 1 Litro de água foi o suficiente para não faltar água e queimar o pano ou acontecer algum acidente.
A panela ficou em repouso por 12 horas, esfriando.
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Inoculação
Quanto a retirada dos copos de dentro da panela de pressão para irem dentro da "glovebox". Utilizei-me de touca cirúrgica, luvas e máscara, o quarto fechado para não haver circulação de ar. Um ambiente estéril.
Álcool na panela antes de abrir e nas mãos com luvas.
Retirando a primeira camada do papel, já dentro da glovebox.
Abrindo o invólucro das seringas que estavam na geladeira
Passe um álcool
Mergulho a seringa em um copo com álcool antes de cada inoculação, dou uma batidinha na seringa com os dedos para o álcool cair.
Esprema a seringa devagar, fiz 02 furos equidistantes em cada copo, 2,5ml em cada furo, 05ml por copo
Feita a inoculação, coloque uma camada de papel alumínio por sobre o copo e feche-o, não esquecendo de passar um álcool na folha antes de agregá-la ao copo
Muito importante se retirar as rebarbas de papel alumínio
Com os copos fora da glovebox, faça a vedação com fita
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MONTANDO A "GLOVEBOX" (passo-a-passo)
https://teonanacatl.org/threads/mexican-palenque.3704/
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