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Tutorial Cultura líquida rápida com soro glicosado

Parabéns irmão @Poeiraviva pela iniciativa e didática da sua TEK!! Muito massa!
Estou querendo voltar aos cultivos de forma a ter uma cultura mais garantida quanto aos contaminantes e sua TEK vem bem a acalhar!!
Obrigado pelas informações!
Paz e Luz!!
 
Parabéns irmão @Poeiraviva pela iniciativa e didática da sua TEK!! Muito massa!
Estou querendo voltar aos cultivos de forma a ter uma cultura mais garantida quanto aos contaminantes e sua TEK vem bem a acalhar!!
Obrigado pelas informações!
Paz e Luz!!
Poo mano fico feliz em ajudar sempre! Abração. PAAAZ!
 
Po cara, do kct essa tecnica! Facilita pra caralho pra quem não quer ficar fazendo potinhos de CL e sim direto as seringas. Curti bastante. Com esse tamanho ela precisa de quantos dias pra colonizar a seringa? 5 dias mesmo ou menos? Acabei de fazer alguns copos de CL de GT a partir de uns esporos. Acho que 1 deu certo, mas é difícil de ver porque fiz com açúcar mascavo. Vamo ver.
 
Última edição:
Po cara, do kct essa tecnica! Facilita pra caralho pra quem não quer ficar fazendo potinhos de CL e sim direto as seringas. Curti bastante. Com esse tamanho ela precisa de quantos dias pra colonizar a seringa? 5 dias mesmo ou menos? Acabei de fazer alguns copos de CL de GT a partir de uns esporos. Acho que 1 deu certo, mas é difícil de ver porque fiz com açúcar mascavo. Vamo ver.
Dale irmão. Obrigado pelos elogios. Se vc fizer as seringas direto e com os esporos demora mais, algo em torno de 21 dias para ver algum micélio. Mas se vc tiver mais pressa, tente fazer em outro recipiente com mais espaço com ar, tipo um pote de papinha daqueles de 30 a 50 ml. Preencha 50% do pote com a solução e deixe na incubadora. Ou use uma cultura líquida já pronta para multiplicar, isso também agiliza muito o processo. Outra coisa, eu já utilizei seringas feitas com esporos que não tinham micélio visível e elas funcionaram também, mas aí como seringa multiesporos. Eu não tenho muita pressa nas minhas culturas, então eu faço umas 20, deixo colonizar e, conforme vou precisando, seleciono a mais desenvolvida. Abração.
 
Oi Poeiraviva, tranquilo?

Estou começando a cultivar agora, estou com alguns carimbos aqui de Ecuador e acabei de preparar uma SAB para fazer tudo com mais segurança.
Penso em fazer algumas culturas líquidas com um dos carimbos e depois só usar elas para inocular o substrato, e achei bem interessante esse teu método.

Algumas dúvidas:

Eu consigo fazer esse processo direto em um pote daqueles com pepino em conserva (500g mais ou menos)?

A minha ideia é esterilizar tudo direitinho com álcool, levar para dentro da SAB e depois fazer esse processo que tu descreveu. Não sei se eu teria que esterilizar o pote de vidro na panela de pressão antes, se eu uso água mineral de garrafa para soltar os esporos do carimbo (ou se preciso ferver a água antes) ou se dá para só raspar ele e botar no pote.

Valeu.
 
Oi Poeiraviva, tranquilo?

Estou começando a cultivar agora, estou com alguns carimbos aqui de Ecuador e acabei de preparar uma SAB para fazer tudo com mais segurança.
Penso em fazer algumas culturas líquidas com um dos carimbos e depois só usar elas para inocular o substrato, e achei bem interessante esse teu método.

Algumas dúvidas:

Eu consigo fazer esse processo direto em um pote daqueles com pepino em conserva (500g mais ou menos)?

A minha ideia é esterilizar tudo direitinho com álcool, levar para dentro da SAB e depois fazer esse processo que tu descreveu. Não sei se eu teria que esterilizar o pote de vidro na panela de pressão antes, se eu uso água mineral de garrafa para soltar os esporos do carimbo (ou se preciso ferver a água antes) ou se dá para só raspar ele e botar no pote.

Valeu.
Boa tarde irmão! Eu tenho feito minhas culturas com potes de vidro mesmo. Uso uns de 50 ml mas podem ser maiores com certeza.Porém, usar os esporos direto na cultura pode não ser a melhor ideia. Funcionar até funciona mas a cultura muitas vezes demora muito pra ficar pronta e talvez necessite de uma transferência pra selecionar um micelio mais saudável (o que é mais fácil de fazer com ágar. Ideal mesmo é usar uma CL já pronta pra multiplicar ela. Abração mano!
 
Não sei se eu teria que esterilizar o pote de vidro na panela de pressão antes, se eu uso água mineral de garrafa para soltar os esporos do carimbo (ou se preciso ferver a água antes) ou se dá para só raspar ele e botar no pote.
Então, como não é em uma seringa estéril tem que esterilizar sim. Eu fiz alguns potes com borrachas pra inoculação na tampa:

IMG-20200808-WA0026.jpeg
Coloco só a água, seja ela mineral ou destilada, nos potes e vão pra panela de pressão por 40 min. Ai dentro da SAB vc faz uma seringa com uma cultura em ágar, papelão ou uma CL já pronta ou com os esporos que, como eu já disse, não é a melhor opção.
 
Hmm, entendi.
Já estou com o soro e a água para injeção na mão, consegui achar na segunda farmácia que procurei. Na embalagem dizia que a venda era só com prescrição médica, mas o atendente não me pediu nada.
Vou fazer uma primeira tentativa direto com os esporos. Vou tentar transformar 1 carimbo em pelo menos 2 seringas de cultura líquida usando o teu método, ai posto os resultados aqui.

Muito obrigado pelas dicas, irmãozinho.

Abração
 
Então, acabei esquecendo de postar aqui o primeiro teste...

Na primeira vez eu fiz duas seringas, uma de 10ml e outra de 20ml, direto dos esporos. No início o micélio foi crescendo bem; um pouco demorado, mas bem. A de 20ml se desenvolveu mais rápido, e eu acho que foi porque tinha mais espaço com ar (mas não tenho certeza).

Mais tarde, a de 10ml acabou contaminando. Uma coisa verde começou a aparecer e a tomar conta de tudo. Eu tinha percebido umas gotas de água na incubadora, e acho que aquela seringa estava vazando (acho que a proteção da agulha estava meio solta).

Tentei inocular um bolo com a seringa de 20ml, que parecia estar boa, mas o micélio demorou muito mais para se formar do que nos outros bolos (que foram inoculados com esporos). Mais tarde todos eles contaminaram (haha), então provavelmente foi alguma besteira que eu mesmo fiz.

Agora da última vez eu fiz mais duas seringas de 10ml (também direto do esporo). Cresceram mais rápido do que as primeiras que eu fiz, e pareciam estar bem saudáveis. Coloquei as fotos ali embaixo, mas não sei se dá pra ver direito.

Usei as duas para fazer dois potes grandes de CL, que parecem estar se desenvolvendo bem (fotos ali embaixo também). Nesses potes grandes eu usei Água mineral e dextrose.

Valeu!
 

Anexos

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Então, acabei esquecendo de postar aqui o primeiro teste...

Na primeira vez eu fiz duas seringas, uma de 10ml e outra de 20ml, direto dos esporos. No início o micélio foi crescendo bem; um pouco demorado, mas bem. A de 20ml se desenvolveu mais rápido, e eu acho que foi porque tinha mais espaço com ar (mas não tenho certeza).

Mais tarde, a de 10ml acabou contaminando. Uma coisa verde começou a aparecer e a tomar conta de tudo. Eu tinha percebido umas gotas de água na incubadora, e acho que aquela seringa estava vazando (acho que a proteção da agulha estava meio solta).

Tentei inocular um bolo com a seringa de 20ml, que parecia estar boa, mas o micélio demorou muito mais para se formar do que nos outros bolos (que foram inoculados com esporos). Mais tarde todos eles contaminaram (haha), então provavelmente foi alguma besteira que eu mesmo fiz.

Agora da última vez eu fiz mais duas seringas de 10ml (também direto do esporo). Cresceram mais rápido do que as primeiras que eu fiz, e pareciam estar bem saudáveis. Coloquei as fotos ali embaixo, mas não sei se dá pra ver direito.

Usei as duas para fazer dois potes grandes de CL, que parecem estar se desenvolvendo bem (fotos ali embaixo também). Nesses potes grandes eu usei Água mineral e dextrose.

Valeu!
Dale mano! Nas primeiras fotos parece que os esporos eclodiram mas não chegaram a formar uma nuvem. Dê uma chance para a clonagem de culturas já prontas, funciona muito melhor! Abração!
 
Fala @Poeiraviva tudo bem irmao?? Eu vou fazer umas CL usando a sua tecnica, porem so tenho carimbos, seria melhor fazer usando um pedaco do cogu como clone?
Qual seria o porque de nao fazer com esporos?

Depois de feito a primeira cultura a ai sim poderia replicar de CL a CL sem problemas correto?

Quanto tempo pode estar guardarda uma CL?

Desde ja agradeco irmao!!
 
Fala @Poeiraviva tudo bem irmao?? Eu vou fazer umas CL usando a sua tecnica, porem so tenho carimbos, seria melhor fazer usando um pedaco do cogu como clone?
Qual seria o porque de nao fazer com esporos?

Depois de feito a primeira cultura a ai sim poderia replicar de CL a CL sem problemas correto?

Quanto tempo pode estar guardarda uma CL?

Desde ja agradeco irmao!!
Dale mano, bom dia! Então, eu não sei dizer com toda certeza o por quê de os esporos em meio líquido não formam uma rede de hifas tão bem quanto meios sólidos. Os esporos primeiro devem eclodir e depois formar uma rede de micélio e talvez isso não aconteça da melhor forma nesse meio. No entanto, a partir do momento que você tem uma "nuvem de micélio" saudável ela pode facilmente ser clonada em meio líquido. Outra opção, como vc disse, é clonar com um pedaço do cogu mesmo. Eu tentei uma vez mas acabei nunca usando a CL e tenho receio de dizer que ela estava saudável rsrs. Mas com certeza algum micelio se desenvolveu nela. O que eu consigo dizer é que, em ágar ou papelão o clone com um pedaço do cogu funciona. Grande abraço irmão.
 
Boooa mano. Se vc for fazer só 1 cultura não precisa limpar não. Agora, se vc for fazer mais de uma, troque de agulha pois vc vai ter que aspirar mais soro e vc não quer usar a agulha que teve contato com os esporos. Tenta usar 1 agulha exclusivamente pro soro aí não tem erro. A água destilada geralmente vem em flaconetes descartáveis de 10ml mas se vc estiver usando frascos maiores e que vc vai usar mais em outro momento, utilize agulhas separadas tanto pro soro quanto pra água. Aguardo pra ver a sua CL manoo. Se vc fizer tudo correto em 7 dias o micélio já vai ter dado sinal. Quando isso acontecer tente sacudir delicadamente a CL pra dar uma oxigenada. Em 14 dias geralmente as minhas já estão prontas mas feitas com micélio. As com esporos podem demorar uns dias a mais. Boa sorte ae!
Poeiraviva, rolou uma dúvida.

Se eu deixar uma agulha exclusivamente para aspirar o soro glicosado e outra pra aspirar a agua destilada com os esporos do carimbo misturados, levando em consideração que eu quero fazer mais de uma seringa, eu simplesmente troco as agulhas na hora de sugar cada substância? (Utilizo uma SAB) Preciso colocar a agulha no fogo pra aspirar o soro glicosado pela segunda vez, por exemplo? Pode ser boba a pergunta, mas a gente fica neurado com assepsia e tudo mais, daí veio a dúvida rs. E outra coisa, comprei o SG de 250ml, você primeiro coloca ele em algum recipiente estéril e ai depois que aspira com a agulha dentro da SAB ou glovebox? Imagino que aspirar sempre o SG da "bolsinha" (forma que ele vem da farmácia) possa ser perigoso né? Mesmo que eu vá usar micropore na saída do líquido e borrifar álcool 70% antes de tocar nela. Abração e valeu pela força!
 
Poeiraviva, rolou uma dúvida.

Se eu deixar uma agulha exclusivamente para aspirar o soro glicosado e outra pra aspirar a agua destilada com os esporos do carimbo misturados, levando em consideração que eu quero fazer mais de uma seringa, eu simplesmente troco as agulhas na hora de sugar cada substância? (Utilizo uma SAB) Preciso colocar a agulha no fogo pra aspirar o soro glicosado pela segunda vez, por exemplo? Pode ser boba a pergunta, mas a gente fica neurado com assepsia e tudo mais, daí veio a dúvida rs. E outra coisa, comprei o SG de 250ml, você primeiro coloca ele em algum recipiente estéril e ai depois que aspira com a agulha dentro da SAB ou glovebox? Imagino que aspirar sempre o SG da "bolsinha" (forma que ele vem da farmácia) possa ser perigoso né? Mesmo que eu vá usar micropore na saída do líquido e borrifar álcool 70% antes de tocar nela. Abração e valeu pela força!
Dale mano, boa tarde. Não sei se entendi bem suas duvidas mas vamos lá. Quando eu preparo uma seringa de CL eu uso a própria agulha que usei para sugar a agua destilada como tampa para a seringa. Até na hora da inoculação procuro usar outra agulha. Você não precisa ter medo de usar a própria embalagem do soro por que ele é estéril de fábrica. O grande problema é se você errar nos processos e acabar contaminando seu soro por acidente, o que não deve acontecer se vc usar uma agulha exclusiva para o soro. Agora, se vc quiser fazer em outro recipiente sugiro que vc faça a diluição do soro e depois leve para a panela de pressão por 40 min.
As agulhas que vc compra na farmácia já vem estéril então não precisa de nenhum processo antes de usa-las, nem fogo, muito menos álcool.
Preciso colocar a agulha no fogo pra aspirar o soro glicosado pela segunda vez, por exemplo?
Se vc deixar a agulha todo momento cravada na borracha do soro, com toda a agulha para dentro da embalagem e não retirar em momento nenhum não tem pq vc realizar novos processos de esterilização. Fica mais fácil até, agulha do soro deve ficar sempre presa ao soro, vc só vai destacar a seringa e deixar a agulha.
A grande vantagem dessa tek é nao precisar esterilizar nada. O soro glicosado é estéril, a agua destilada também, seringas tbm, agulhas tbm. O único problema vai ser a sua manipulação desses produtos. Grande abraço irmão. Espero ter ajudado.
 
Dale mano, boa tarde. Não sei se entendi bem suas duvidas mas vamos lá. Quando eu preparo uma seringa de CL eu uso a própria agulha que usei para sugar a agua destilada como tampa para a seringa. Até na hora da inoculação procuro usar outra agulha. Você não precisa ter medo de usar a própria embalagem do soro por que ele é estéril de fábrica. O grande problema é se você errar nos processos e acabar contaminando seu soro por acidente, o que não deve acontecer se vc usar uma agulha exclusiva para o soro. Agora, se vc quiser fazer em outro recipiente sugiro que vc faça a diluição do soro e depois leve para a panela de pressão por 40 min.
As agulhas que vc compra na farmácia já vem estéril então não precisa de nenhum processo antes de usa-las, nem fogo, muito menos álcool.

Se vc deixar a agulha todo momento cravada na borracha do soro, com toda a agulha para dentro da embalagem e não retirar em momento nenhum não tem pq vc realizar novos processos de esterilização. Fica mais fácil até, agulha do soro deve ficar sempre presa ao soro, vc só vai destacar a seringa e deixar a agulha.
A grande vantagem dessa tek é nao precisar esterilizar nada. O soro glicosado é estéril, a agua destilada também, seringas tbm, agulhas tbm. O único problema vai ser a sua manipulação desses produtos. Grande abraço irmão. Espero ter ajudado.

Opa, e ae! Boa tarde mano!

Ah sim, ficou muito bem esclarecido, e é uma excelente ideia deixar a agulha direto no soro glicosado de forma permanente. Não sei se o local onde vou inserir a seringa pode se contaminar dentro do frigobar e isso contaminar a CL, mas pelo que explicou isso deve ser difícil (as vezes um micropore na base da agulha ajudaria nesse sentido). Muito bom! Valeu pela ajuda e atenção, abração!!
 
Opa, e ae! Boa tarde mano!

Ah sim, ficou muito bem esclarecido, e é uma excelente ideia deixar a agulha direto no soro glicosado de forma permanente. Não sei se o local onde vou inserir a seringa pode se contaminar dentro do frigobar e isso contaminar a CL, mas pelo que explicou isso deve ser difícil (as vezes um micropore na base da agulha ajudaria nesse sentido). Muito bom! Valeu pela ajuda e atenção, abração!!
Então, vc deixa a agulha no soro só enquanto estiver na SAB. Assim que vc acabar de usar o soro pra fazer suas cls, retira a agulha e descarta para guardar o soro no frigobar. Na próxima vez usa uma nova.
 
Então, vc deixa a agulha no soro só enquanto estiver na SAB. Assim que vc acabar de usar o soro pra fazer suas cls, retira a agulha e descarta para guardar o soro no frigobar. Na próxima vez usa uma nova.

Hum, entendi agora! Muito bom, vou fazer isso! Ou brigadão pela moral! valeuuuu
 
Fala @Poeiraviva

Ou, fiz exatamente como disse no seu tutorial. O micélio começou a aparecer mas parece que estagnou, ou então nem é o micélio né, isso eu não tenho certeza. Anexei uma foto pra você ver. Eu fiz a partir de uma seringa multi esporo. Sabe me dizer porque não desenvolveu? Eu fiz ela no dia 22/01 e essa foto foi tirada hoje.

E outra coisa, se puder me ajudar numa coisa aqui. Quero iniciar um monotube, utilizando em torno de 600g de spawn e 1.200g de substrato (fibra de coco + vermiculita). Só que o que está me preocupando é o tempo disponível que tenho pra fazer os 3 flushes pelo menos. Vou mudar de cidade daqui um mês, e ai não sei se consigo fazer todo o processo. Eu tenho o spawn já totalmente colonizado, falta basicamente esterilizar o substrato e misturá-lo com o spawn e colocar pra colonizar e depois aniversariar. Tem algum conselho pra me dar? Até pensei em armazenar no freego bar e fazer esse cultivo na nova cidade, pq não quero fazer ele sem ter certeza que dá pra ter os flushes certinho. Abração
 

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Cara, esses dias atras fiz uma tentativa meio maluca, fiz com agua das batatas cozidas, tipo pro BDA, mas coloquei 50% desse caldo da batata + 45% de soro5% + 5% de agua mineral. Apesar de ficar uma cor opaca a CL ficou muito forte, eclodiu praticamente todos os esporos ( eu acho) coloquei mais ou menos 0.5cm2 do carimbo.
Agora fiz uma incoculacao em substrato de milho de pipoca e estou esperandoo resultado, nao sei se ja existe essa tecnica... nao achei nada por aqui, se ja ouver prfvr memandem o link.
 
Salve, @Poeiraviva

Cara, passando pra falar que estou usando sua técnica com sucesso, inclusive em quantidades maiores.
Eu tinha 2 seringas de CL compradas em e-shop, de 20 ml cada, tava com medo de usar.
Primeiro separei 10 ml de cada pra inoculações e guardei a outra metade.

Com essas metades, segui sua receita, multiplicando as medidas por 10, e deu certo. (10 ml de CL, 40 ml de soro, 40 ml de destilada.
Inoculei 14 potinhos de 140 ml, estão quase 100% colonizados, perfeitos, zero contaminação)

Dessa sobra, fiz 3 potinhos coletores com 50 ml.
Consegui inocular 20 potinhos de 140 ml. Estão começando a colonizar.

Essa semana inoculei mais 24 substratos, entre potinhos de 220 ml, 250 ml e sacos com milho.
AInda sobrou.

Hoje peguei 20 ml dessa CL replicada e já deu 170 ml de CL! Acabei de colocar na incubadora!

Graças à sua técnica, hoje tenho CL infinita!

Muito obrigado!
 
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