Olá amigos do fórum. Estou voltando às atividades depois de um tempo parado e decidi que seria uma boa fazer um tutorial de uma CL mais que especial. Já apresentei o método em outra área do fórum, mas achei prudente oficializar essa experiência que venho utilizando, desde então,
para confeccionar minhas culturas.
Os materiais que vc vai precisar:
1 -Carimbo de
esporos ou cultura líquida já pronta;
2- Água destilada estéril para injeção;
3 - Soro glicosado ( de preferência o 5%);
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4- Agulhas ;
5- Seringas de 10 ml;
A água destilada e o soro glicosado são materiais hospitalares e podem ser encontrados em farmácias familiares pequenas. Nas redes grandes nunca encontrei.
Tendo esses materiais em mãos o processo é muito simples e asséptico se feito sob condições adequadas. Uso uma gloverbox para essas manipulações.
Com os materiais dentro da glover, aspiro 4 ml de soro glicosado 5% ( para dentro de uma seringa de 10ml ) + 4 ml de água destilada e, por último, acrescento 1ml de uma CL ou
seringa de esporos já pronta. Total 9/10 ml, sempre deixando 1 ml de ar dentro da seringa.
*Uma dica é usar uma agulha só para o soro glicosado, pois qqr
contaminante que entrar no soro vai se multiplicar dentro dele*
Com isso sua CL terá uma concentração de cerca de 2,5% . eu tenho tido boas experiências com essa concentração. Acima de 4% a cultura demora muito pra se desenvolver.
Está pronta!
Agora é só armazenar em uma
incubadora por alguns dias é quando o
micélio estiver bem desenvolvido pode ser usada ou armazenada na geladeira. Tenho culturas que usei de 6 meses e estavam funcionando perfeitamente.
Esse método é muito prático para replicar uma
strain quantas vezes vc quiser e com alto grau de assepsia.1 seringa de CL eu multipliquei em 20 da última vez que fiz e NENHUMA, 0%, NADA de contaminação até agora.
Espero que o tutorial ajude quem quiser ser mais prático na produção da sua CL. Abraço amigos!! PAAAAAZ.
vai entender. Será que faltou soro? Faltou oxigênio?
