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Tutorial Cultura líquida rápida com soro glicosado

Poeiraviva

Hifa
Contribuidor
20/03/2019
401
15
Olá amigos do fórum. Estou voltando às atividades depois de um tempo parado e decidi que seria uma boa fazer um tutorial de uma CL mais que especial. Já apresentei o método em outra área do fórum, mas achei prudente oficializar essa experiência que venho utilizando, desde então,
para confeccionar minhas culturas.

Os materiais que vc vai precisar:
1 -Carimbo de esporos ou cultura líquida já pronta;
2- Água destilada estéril para injeção;
3 - Soro glicosado ( de preferência o 5%);
20200507_184148.jpg
4- Agulhas ;
5- Seringas de 10 ml;

A água destilada e o soro glicosado são materiais hospitalares e podem ser encontrados em farmácias familiares pequenas. Nas redes grandes nunca encontrei.
Tendo esses materiais em mãos o processo é muito simples e asséptico se feito sob condições adequadas. Uso uma gloverbox para essas manipulações.
Com os materiais dentro da glover, aspiro 4 ml de soro glicosado 5% ( para dentro de uma seringa de 10ml ) + 4 ml de água destilada e, por último, acrescento 1ml de uma CL ou seringa de esporos já pronta. Total 9/10 ml, sempre deixando 1 ml de ar dentro da seringa.

*Uma dica é usar uma agulha só para o soro glicosado, pois qqr contaminante que entrar no soro vai se multiplicar dentro dele*

Com isso sua CL terá uma concentração de cerca de 2,5% . eu tenho tido boas experiências com essa concentração. Acima de 4% a cultura demora muito pra se desenvolver.

Está pronta!
Agora é só armazenar em uma incubadora por alguns dias é quando o micélio estiver bem desenvolvido pode ser usada ou armazenada na geladeira. Tenho culturas que usei de 6 meses e estavam funcionando perfeitamente.
Esse método é muito prático para replicar uma strain quantas vezes vc quiser e com alto grau de assepsia.1 seringa de CL eu multipliquei em 20 da última vez que fiz e NENHUMA, 0%, NADA de contaminação até agora.

Espero que o tutorial ajude quem quiser ser mais prático na produção da sua CL. Abraço amigos!! PAAAAAZ.
 
Parece ser bem bacana essa Tek. Tem foto da seringa não? Tô querendo iniciar essas pesquisas.

Qual é a diferença de inocular um substrato com CL? Tem alguma vantagem?
 
Dale mano. Então tenho essa foto das primeiras que eu fiz. As últimas eu usei pra inocular os 12 copos que estão há 1 semana na incubadora. Assim que aniversariar esses bolos, vou fazer mais culturas com carimbos retirados dos próprios cogus que frutificarem, aí posso postar mais fotos ou até um passo a passo.
As vantagens da CL pra mim:
1- se seu carimbo estiver contaminado a CL vai mostrar e vc evita de inocular bolos por nada.
2- Usando o SG o trabalho é praticamente o mesmo de fazer uma seringa de esporos.
3- Meus cultivos com CL colonizaram mto mais rápido do que a seringa multiesporos.
E
4- O SG gera uma solução mais límpida que facilita a visualização de contaminantes.

É incrível cara. O índice de contaminação desde que eu aprimorei esse método é 0%! Estou falando de cerca de 50 copos inoculados.
 

Anexos

  • 20190416_111506.jpg
    20190416_111506.jpg
    1 MB · Visualizações: 145
Ae @Poeiraviva , só mais uma pergunta. O calibre da agulha é essas normal mesmo, ou mais grossa? Porque sempre tem essa situação quando se trata de CL's. Recomenda-se que a agulha seja mais grossa, pra conseguir puxar o micélio. E nesse caso aí?

Por quanto vc comprou esse soro?
 
Última edição:
Ae @Poeiraviva , só mais uma pergunta. O calibre da agulha é essas normal mesmo, ou mais grossa? Porque sempre tem essa situação quando se trata de CL's. Recomenda-se que a agulha seja mais grossa, pra conseguir puxar o micélio. E nesse caso aí?

Por quanto vc comprou esse soro?
Eu sempre uso agulhas 40x12 que são as cor de rosa, calibre grosso mesmo.
O soro eu consegui com o meu chefe onde eu trabalho então ele nem me cobrou. Nas farmácia não deve passar de 10 reais 250 ml de soro. Se vc fizer as contas de quantas cls vc consegue preparar com isso é absurdo. Eu venho usando o mesmo soro até hj.
 
Muito legal, eu ainda não fiz nenhuma CL, seu tutorial ficou muito legal, gostei das explicações. Sobre os benefícios de se saber antecipadamente se havia algum contaminante no carimbo ou não.
A foto da seringa está muito boa pra se ter ideia de como tem que ficar.

Vou treinar logo CL também. Obrigado pela orientação.
 
Olá amigos do fórum. Estou voltando às atividades depois de um tempo parado e decidi que seria uma boa fazer um tutorial de uma CL mais que especial. Já apresentei o método em outra área do fórum, mas achei prudente oficializar essa experiência que venho utilizando, desde então,
para confeccionar minhas culturas.

Os materiais que vc vai precisar:
1 -Carimbo de esporos ou cultura líquida já pronta;
2- Água destilada estéril para injeção;
3 - Soro glicosado ( de preferência o 5%);
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4- Agulhas ;
5- Seringas de 10 ml;

A água destilada e o soro glicosado são materiais hospitalares e podem ser encontrados em farmácias familiares pequenas. Nas redes grandes nunca encontrei.
Tendo esses materiais em mãos o processo é muito simples e asséptico se feito sob condições adequadas. Uso uma gloverbox para essas manipulações.
Com os materiais dentro da glover, aspiro 4 ml de soro glicosado 5% ( para dentro de uma seringa de 10ml ) + 4 ml de água destilada e, por último, acrescento 1ml de uma CL ou seringa de esporos já pronta. Total 9/10 ml, sempre deixando 1 ml de ar dentro da seringa.

*Uma dica é usar uma agulha só para o soro glicosado, pois qqr contaminante que entrar no soro vai se multiplicar dentro dele*

Com isso sua CL terá uma concentração de cerca de 2,5% . eu tenho tido boas experiências com essa concentração. Acima de 4% a cultura demora muito pra se desenvolver.

Está pronta!
Agora é só armazenar em uma incubadora por alguns dias é quando o micélio estiver bem desenvolvido pode ser usada ou armazenada na geladeira. Tenho culturas que usei de 6 meses e estavam funcionando perfeitamente.
Esse método é muito prático para replicar uma strain quantas vezes vc quiser e com alto grau de assepsia.1 seringa de CL eu multipliquei em 20 da última vez que fiz e NENHUMA, 0%, NADA de contaminação até agora.

Espero que o tutorial ajude quem quiser ser mais prático na produção da sua CL. Abraço amigos!! PAAAAAZ.
Eaew @Poeiraviva viva blz? Achei interessante seu tutorial, provavelmente vou tentar minha primeira CL seguindo essas dicas.

Uma dúvida, normalmente eu uso uma seringa para diluir os esporos na água destilada, eu posso preparar a parte da água destilada ( 5ml ) já com esporos e depois aspirar para a outra seringa com a glicose ( 4ml ) ?
 
Eaew @Poeiraviva viva blz? Achei interessante seu tutorial, provavelmente vou tentar minha primeira CL seguindo essas dicas.

Uma dúvida, normalmente eu uso uma seringa para diluir os esporos na água destilada, eu posso preparar a parte da água destilada ( 5ml ) já com esporos e depois aspirar para a outra seringa com a glicose ( 4ml ) ?
Dale meu querido @Nordermine. Cara que bom que vc perguntou isso. Eu até devia ter colocado isso no início de tudo. Eu aconselho SEMPRE deixar o passo da diluição dos esporos ou q adição do micélio por último para não correr o risco de qqr esporo ( ou micelio) entrar no soro. Outra coisa, não indico usar o soro glicosado para diluição dos esporos direto no carimbo! Use água destilada para isso. Então, 1° o SG, depois a água destilada e o micélio ou esporos. Espero ter ajudado mano.
 
Dale meu querido @Nordermine. Cara que bom que vc perguntou isso. Eu até devia ter colocado isso no início de tudo. Eu aconselho SEMPRE deixar o passo da diluição dos esporos ou q adição do micélio por último para não correr o risco de qqr esporo ( ou micelio) entrar no soro. Outra coisa, não indico usar o soro glicosado para diluição dos esporos direto no carimbo! Use água destilada para isso. Então, 1° o SG, depois a água destilada e o micélio ou esporos. Espero ter ajudado mano.
Valeu pelo esclarecimento jow. Só pra confirmar,esse método dispensa esterilização certo?
 
Eeaw @Poeiraviva blz? Cara deixa te perguntar, após aspirar a glicose e a água destilada com esporos na seringa, cê armazena a seringa com a agulha?

Outra pergunta, o soro glicosado cê armazena na geladeira?
 
Então mano, eu coloco um oclusor onde vai a agulha. Mas se vc não tiver pode deixar a agulha mesmo com a tampa, mas aí na hora de inocular use outra agulha. O soro eu guardo no armário mesmo, não precisa de geladeira. 👍👍
 
@Poeiraviva , depois que suga a glicose, tem que limpar a agulha pra sugar a água destilada?

(Fiz a minha, agora vamos ver se vai dar certo hehe) Qnts dias pra aparecer algum sinal?
 
@Poeiraviva , depois que suga a glicose, tem que limpar a agulha pra sugar a água destilada?

(Fiz a minha, agora vamos ver se vai dar certo hehe) Qnts dias pra aparecer algum sinal?
Boooa mano. Se vc for fazer só 1 cultura não precisa limpar não. Agora, se vc for fazer mais de uma, troque de agulha pois vc vai ter que aspirar mais soro e vc não quer usar a agulha que teve contato com os esporos. Tenta usar 1 agulha exclusivamente pro soro aí não tem erro. A água destilada geralmente vem em flaconetes descartáveis de 10ml mas se vc estiver usando frascos maiores e que vc vai usar mais em outro momento, utilize agulhas separadas tanto pro soro quanto pra água. Aguardo pra ver a sua CL manoo. Se vc fizer tudo correto em 7 dias o micélio já vai ter dado sinal. Quando isso acontecer tente sacudir delicadamente a CL pra dar uma oxigenada. Em 14 dias geralmente as minhas já estão prontas mas feitas com micélio. As com esporos podem demorar uns dias a mais. Boa sorte ae!
 
Eaew @Poeiraviva, fiz hoje a CL seguindo teu tutorial, agora é só esperar.
IMG_20200511_181838.jpg
Teve uma seringa que ficou apenas com 8ml e 2ml sobrando de ar, cê acha que pode dá problema?

Sobre a inoculação, quantos ml se aconselha injetar para 1 copo americano de substrato?
 
Muito top mano. Não tem problema os 2 ml de ar não.
Sobre a inoculação, quantos ml se aconselha injetar para 1 copo americano de substrato?
Eu tento injetar a menor quantidade que eu conseguir. Em média dá uns 0,3ml por furo pq o micélio as vezes da uma trancada na agulha aí tenho que fazer uma forcinha. Antes de inocular tenta sacudir bem a seringa pra o micélio ficar bem disperso na solução. Valeu mano. Abração.
 
Aparentemente existe o soro glicosado a 2,5%, o que seria um meio de cultivo líquido pronto para uso, já esterilizado e numa proporção adequada: Soro Glicosado – Fresenius Kabi | Maues Lobato

Penso que facilitaria muitíssimo o processo e as chances de contaminação, usando uma seringa nova estéril, seria perto de zero (única chance de dar zebra seria se os esporos estivessem contaminados).

Mas ao menos na internet não encontrei à venda. :(
 
Aparentemente existe o soro glicosado a 2,5%, o que seria um meio de cultivo líquido pronto para uso, já esterilizado e numa proporção adequada: Soro Glicosado – Fresenius Kabi | Maues Lobato

Penso que facilitaria muitíssimo o processo e as chances de contaminação, usando uma seringa nova estéril, seria perto de zero (única chance de dar zebra seria se os esporos estivessem contaminados).

Mas ao menos na internet não encontrei à venda. :(
Bom dia mano. Realmente eu não tenho conhecimento desse soro 2,5%.
Porém, se vc encontrar, não coloque o soro em contato com seu carimbo! Tente raspar os esporos para outro recipiente antes de aspirar. Se o soro entrar em contato com os esporos do carimbo ele vão eclodir. Abraço irmão.
 
@Poeiraviva achei muito interessante e pretendo começar fazendo várias seringas partir de esporos.
Sou bem iniciante mas já achei uma ampola de 10ml de soro glicosado em 50% vou fazer a devida diluição.

A dúvida é, como ver se a CL está saudável?
2% é o ótimo?
 
Ótimo! Fico muito feliz meeesmo. A título de conhecimento: sua glicose não é considerada um soro pois sua concentração de 50% a torna hipertônica. Isso não atrapalha em nada, mas vc vai precisar fazer uma diluição mais intensa. Vou dar uma dica: para cada 0,3 ml ( veja que não são 3ml, são 0,3ml) você vai precisar de 7,2 ml de água destilada para obter os 2%.
Perceba que nesse caso a diluição é muito mais meticulosa e 0,1 ml a mais da glicose pode alterar completamente a concentração final. Então, mantenha a mão firme durante o processo rsrsrs.
Quase esqueci, sobre saber se está saudável, tem uma foto de uma que eu fiz ali em cima. Mas assim, com esporos pode demorar mais, você tem que botar uma "nuvem", se estiverem apenas como se fossem "flocos de neve" muito separados uns dos outros ela ainda não está pronta. As contaminações vão apresentar aspecto turvo em toda a solução, cores diferentes micélio disperso. Vale conferir outros tutorias de cultura líquida que tem fotos com exemplos de contaminações
Abração querida!
 
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