Clonagem/Isolamento em BDA
Meio de cultura BDA é um meio mais profissional e eficiente do que o papelão.
O meio BDA (batata, Dextrose, Agar) é um dos meios mais utilizados para cultura de cogumelos em Placa de Petri, tubos ou potes.
A batata é usada como fonte dos nutrientes, e a Dextrose como fonte de açúcar simples. O Agar serve para solidificar o meio. Uma formulação comum, abaixo, suficiente para se produzir 500 ml de meio de cultura é:
Para outros volumes menores ou maiores, preparar os ingredientes proporcionalmente.
Assim como em outros meios de cultura podem ser acrescentados outros ingredientes, como levedura e gentamicina (Antibiótico, para controlar Bactérias).
Procedimento:
Lavar e escovar bem as batatas, retirando todos os resíduos de terra. Cortar em fatias finas sem retirar as cascas e ferver em 250 ml de água mineral até que fique bem macia.
Filtrar o líquido reservando-o e descartar as batatas cozidas. Adicionar ao filtrado a glucose de milho e o Agar-Agar. Acertar o volume final para 500 ml com água mineral.
Obs: Caso queira usar uma menor quantidade, coza 50 g de batatas em 200 ml de água mineral e acerte o volume final para 250 ml. Retire o tanto que for usar dos 250 ml e acrescente o Agar e a dextrose PROPORCIONALMENTE.
Exemplo: 50 g de batatas foram cozidas, volume final de 250 ml. Irei utilizar somente 50 ml, então:
Distribuir nos recipientes que serão usados e esterilizar por 30 minutos. No resfriamento após a esterilização o meio se solidifica. Placas petri são difíceis de encontrar, utilize tampas de vidros ou cinzeiros.
Faça dois a três repiques do micélio ou para novas placas, até obter um bom isolamento: micélio rizomórfico. Outra vantagem deste meio, e que se surgirem contaminates, certamente você os reconhecerá.
Você pode germinar os esporos previamente em placas petri também, permitindo-se assim selecionar o que resultar mais rizomórfico.
O meio BDA (batata, Dextrose, Agar) é um dos meios mais utilizados para cultura de cogumelos em Placa de Petri, tubos ou potes.
A batata é usada como fonte dos nutrientes, e a Dextrose como fonte de açúcar simples. O Agar serve para solidificar o meio. Uma formulação comum, abaixo, suficiente para se produzir 500 ml de meio de cultura é:
- Batatas cruas – 100 g
- Glucose de milho – 10 g
- Ágar – 10 g
- Água mineral – 500 ml
Para outros volumes menores ou maiores, preparar os ingredientes proporcionalmente.
Assim como em outros meios de cultura podem ser acrescentados outros ingredientes, como levedura e gentamicina (Antibiótico, para controlar Bactérias).
Procedimento:
Lavar e escovar bem as batatas, retirando todos os resíduos de terra. Cortar em fatias finas sem retirar as cascas e ferver em 250 ml de água mineral até que fique bem macia.
Filtrar o líquido reservando-o e descartar as batatas cozidas. Adicionar ao filtrado a glucose de milho e o Agar-Agar. Acertar o volume final para 500 ml com água mineral.
Obs: Caso queira usar uma menor quantidade, coza 50 g de batatas em 200 ml de água mineral e acerte o volume final para 250 ml. Retire o tanto que for usar dos 250 ml e acrescente o Agar e a dextrose PROPORCIONALMENTE.
Exemplo: 50 g de batatas foram cozidas, volume final de 250 ml. Irei utilizar somente 50 ml, então:
- 10 g – 500 ml
- X g – 50 ml Devo usar, então, 1 g de dextrose e 1 g de Agar.
Distribuir nos recipientes que serão usados e esterilizar por 30 minutos. No resfriamento após a esterilização o meio se solidifica. Placas petri são difíceis de encontrar, utilize tampas de vidros ou cinzeiros.
Faça dois a três repiques do micélio ou para novas placas, até obter um bom isolamento: micélio rizomórfico. Outra vantagem deste meio, e que se surgirem contaminates, certamente você os reconhecerá.
Você pode germinar os esporos previamente em placas petri também, permitindo-se assim selecionar o que resultar mais rizomórfico.
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Este artigo apresenta o mesmo tutorial deste outro com a adição de algumas...
