Procedimento Geral
1) Colocar o suporte metálico furado (vem junto com algumas panelas de pressão) no fundo da panela para evitar contato o contato direto do fundo dos vidros com o fundo quente da panela. Colocar uma camada de água fria no fundo da panela de acordo com as instruções do fabricante. A camada de água deve ter em torno de 4,0 a 5,0 cm de altura acima do suporte (cerca de 1,5 litros para uma panela de 7,0 litros e cerca de 3,5 litros para uma panela de 20 litros). O importante é que permaneça sempre uma camada de água no fundo da panela durante todo o processo de esterilização.
2) Colocar os frascos com o material que vai ser esterilizado dentro da panela, devidamente apoiados para que não tombem.
3) Fechar a panela de pressão com a tampa, porém não colocar o peso que controla a saída do vapor no pino central da tampa da panela.
4) Acender o fogo e deixar ferver em fogo alto. Quando iniciar a saída de vapor pelo pino central da tampa, marcar cerca de 3 a 5 minutos para que todo o ar existente na panela seja eliminado e o jato de vapor saia de forma contínua. A presença de ar misturado ao vapor d’água dentro da panela faz com que a temperatura de ebulição da água seja menor do que quando se tem somente vapor d’água, prejudicando a eficiência da esterilização.
5) Colocar o peso no pino da tampa da panela, com o auxílio de uma luva grossa de PVC de cano longo para evitar queimaduras com o vapor que está saindo.
6) Quando o vapor recomeçar a sair e começar a agitar o peso, baixar a intensidade da chama para manter-se apenas uma saída de vapor constante porém sem muita agitação interna. Começa aqui a contagem do tempo de esterilização.
7) Quando chegar ao término do tempo de esterilização, apagar o fogo e deixar a panela esfriar até a temperatura ambiente antes de abri-la para retirar os frascos (geralmente devemos abrir a panela só no dia seguinte). Se for aberta quando os frascos estiverem ainda quentes, podem ocorrer quebras por choque térmico.
8) Para o caso do preparo de tubos de ágar inclinado, os tubos devem ser retirados ainda quentes assim que a pressão interna for eliminada totalmente. Deve-se deixar resfriar a panela por mais 15 minutos após a pressão ter-se igualado com a pressão ambiente para se retirar os tubos de ensaio (com o auxílio das luvas de cano longo). Se a temperatura do meio de cultura baixar para menos de 45 ºC, este endurecerá antes que possamos posicionar os tubos para resfriarem inclinados.
