Em meu primeiro cultivo (Em Andamento - Diário PF Tek B+: 1º inoculação e cultivo em meio alternativo.) o micélio estagnou... não apresenta sinal de contaminação e não desenvolve, por esse motivo resolvi iniciar um cultivo paralelo que descrevo abaixo.
O forno e o fogão foram limpos interno/externo com solução de água sanitária (deixei agindo por 10 min.) que foi aplicada com um pincel (sem borrifar) e após foi removido com guardanapo de papel. O mesmo processo foi usado para aplicar lysoform. No final foi borrifado álcool 70 deixando que o mesmo evaporasse sozinho. Antes de usar/acender o forno foi instalada uma lâmpada UV no interior do mesmo que foi usado como câmara de armazenamento/esterilização de substratos, cultura liquida e utensílios diversos.
Procedimentos padrão como vedação de portas e janelas, banho com germicida, uso de álcool 70 iodado (8 ppm), luvas, máscara, touca, flambagem de equipamentos, etc. também estiveram presentes.
250 ml alpiste (1 xícara)
70 ml niger (1/4 xícara)
1000 ml vermiculita ( 4 xícara)
1000 ml água mineral ( 3 a 4 xícara)
Preparo do substrato sementes de pássaros:
As sementes foram lavadas e escorridas por duas vezes, após foi deixada de molho por 4 horas em água comum sendo descartada a água do molho. Após secas/escorridas foram colocadas na panela com 4 xícaras de água mineral e cozidas por 40 minutos em panela tampada sem pressão. Sobrou pouca água que foi reservada para ser usada quando da adição da vermiculita.
Preenchimento dos copos sementes de pássaros e esterilização:
Em uma bacia foi homogeneizado a semente de pássaros, a vermiculita e por último a pouca água remanescente do cozimento com mais 3 a 4 xícaras de água mineral. Os copos foram preenchidos e lacrados apenas com as tampas (sem papel alumínio) obtendo rendimento de 05 copos de 336 ml, deixando 1 cm de espaço até a tampa (do total de substrato houve sobra de aproximadamente 3/4 de um copo, não utilizado), sendo esterilizados por 1h20min sob pressão. Os copos foram resfriados normalmente (12h), sem abrir a panela de pressão. Após aberto a panela de pressão, um dos copos havia tombado e e se encheu de água, os copos em bom estado (04) foram borrifados com álcool 70 e transferidos/armazenados em recipiente fechado sob luz UV (por aproximadamente 2h) até a inoculação.
Método de inoculação dos copos sementes de pássaros:
Após resfriamento e banho de luz UV, na boca do forno os 04 copos foram inoculados com micélio de 02 placas de petri 60x15 e tampados, sendo envoltos em plástico para proteger de contaminantes e imediatamente transferidos para incubadora em temperatura de 28~29C. Como o micélio foi colocado sobre o substrato os copos serão armazenados de ponta cabeça (micélio ficará embaixo do substrato)
1000 ml ( 4 xícara) vermiculita
1000 ml ( 3 a 4 xícara) água mineral
Preparo do substrato arroz integral:
O arroz integral foi moído até alcançar consistência de farinha fina. Em uma bacia foi homogeneizado a farinha de arroz, vermiculita e por último a água mineral.
Preenchimento dos copos arroz integral e esterilização:
Os copos foram preenchidos e lacrados apenas com as tampas (sem papel alumínio) obtendo rendimento de 05 copos de 336 de ml, deixando 1 cm de espaço até a tampa (do total de substrato houve sobra de aproximadamente 3/4 de um copo, não utilizado), sendo esterilizados por 1h20min sob pressão. Os copos foram resfriados normalmente (12h), sem abrir a panela de pressão. Após aberto a panela de pressão os copos foram borrifados com álcool 70 e transferidos/armazenados em recipiente fechado sob luz UV (por aproximadamente 2h) até a inoculação.
Método de inoculação dos copos arroz integral:
Após resfriamento e banho de luz UV, na boca do forno, os 5 copos foram inoculados com micélio de 02 placas de petri 60x15 e tampados, sendo envoltos em plástico para proteger de contaminantes e imediatamente transferidos para incubadora em temperatura de 28~29ºC. Como o micélio foi colocado sobre o substrato os copos serão armazenados de ponta cabeça (micélio ficará embaixo do substrato)
As sobras do substrato de sementes (3/4 xícara)
As sobras do substrato de arroz integral (3/4 xícara)
250 ml (1 xícara) de trigo para kibe (marca Yoki)
800 ml ( 2 a 3 xícara) vermiculita
700 ml ( 2 a 3 xícara) água mineral
Preparo do substrato kibe+arroz+sementes pássaros+vermiculita:
Em uma bacia foi despejado 250 ml de água fervente sobre o trigo de kibe deixando em repouso até que toda água fosse absorvida. Em seguida foi acrescentado a vermiculita, as sobras dos dois primeiro substratos (copo sementes tombado durante esterilização+3/4 xícara sementes+3/4 xícara arroz integral), os ingredientes foram homogeneizado e por último a água mineral.
Preenchimento dos potes de substrato kibe+arroz+sementes pássaros+vermiculita e esterilização:
Os copos foram preenchidos e lacrados apenas com as tampas (sem papel alumínio) obtendo rendimento de 05 copos de 336 de ml, deixando 1 cm de espaço até a tampa, sendo esterilizados por 1h20min sob pressão. Os copos foram resfriados normalmente (10h), sem abrir a panela de pressão. Após aberto a panela de pressão os copos foram borrifados com álcool 70 e transferidos/armazenados em recipiente fechado sob luz UV (por aproximadamente 2h) até a inoculação.
Método de inoculação dos copos kibe+arroz+sementes pássaros+vermiculita:
Após resfriamento e banho de luz UV, na boca do forno, 03 copos foram inoculados com micélio de 02 placas de petri 60x15 e tampados, sendo envoltos em plástico para proteger de contaminantes e imediatamente transferidos para incubadora em temperatura de 28~29ºC. Como o micélio foi colocado sobre o substrato os copos serão armazenados de ponta cabeça (micélio ficará embaixo do substrato). Por falta de espaço 02 copos desse substrato não foram inoculados, estão protegidos envoltos em plástico e sob refrigeração.
Foi preparado 720 ml de de cultura liquida com a seguinte composição:
500 ml de água de coco (rótulo informa que é esterilizada e contém 1% de sacarose)
220 ml de água mineral
3 g. de mel
720 ml de cultura liquida foi disposta em 07 potes de 336 ml (100 ml em cada copo), esterilizada em panela de pressão por 01 hora e resfriada. Após resfriamento foi exposto a luz UV por 2h. Na boca do forno 07 potes foram inoculadas com micélio de 02 placas de petri 60x15, tampados e envoltos em plástico para proteger de contaminantes, posteriormente armazenados em temperatura ambiente 17~23ºC.
Tenho uma dúvida: O fato de colocar os copos/bolos de ponta cabeça pode atrapalhar o desenvolvimento do micelio? Fiz desse modo por acreditar que ocorreria maior contato do substrato com o micélio.
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CONSIDERAÇÕES SOBRE ESTERILIZAÇÃO
O local do procedimento (cozinha) teve o ar esterilizado com uma lâmpada UV 15w que ficou ativa durante 02 horas. O piso que considero o maior depósito de contaminantes foi molhado com solução de 01 litro de agua sanitária diluído em 09 partes de água (espalhado com vassoura), sendo que esta solução permaneceu no piso durante todo procedimento (cerca 03 horas)... o piso ficou limpinho.O forno e o fogão foram limpos interno/externo com solução de água sanitária (deixei agindo por 10 min.) que foi aplicada com um pincel (sem borrifar) e após foi removido com guardanapo de papel. O mesmo processo foi usado para aplicar lysoform. No final foi borrifado álcool 70 deixando que o mesmo evaporasse sozinho. Antes de usar/acender o forno foi instalada uma lâmpada UV no interior do mesmo que foi usado como câmara de armazenamento/esterilização de substratos, cultura liquida e utensílios diversos.
Procedimentos padrão como vedação de portas e janelas, banho com germicida, uso de álcool 70 iodado (8 ppm), luvas, máscara, touca, flambagem de equipamentos, etc. também estiveram presentes.
MATERIAL USADO PARA INOCULAÇÃO
Em 27/07/2018 usei 01 seringa multi esporos MDK para inocular 10 placas petri 60x15 (EPS) que, embora não apresentasse micélio rizomorfo, apresentou/teve desenvolvimento satisfatório em BDA. O método de inoculação utilizado para todo material relacionado neste post tem origem na transferência do micélio das placas de petri, assim distribuídas: - O micélio de 06 placas 60x15 foi transferido para os copos de substrato (total inicial 14 copos e final 12 copos de 336 ml);
- O micélio de 02 placas 60x15 foi usado para inocular 07 placas petri (BDA) 90x15;
- O micélio de 02 placas 60x15 foi usado para inocular 06 potes de cultura liquida (água de coco+mel+água mineral).
MUDANÇAS NA PROPORÇÃO DE VERMICULITA NO SUBSTRATO
Considerando que boa parte dos cultivadores iniciantes encontram dificuldade para manter a umidade do terrário/bolos, acreditando que não serei exceção a essa regra, decidi dobrar o volume de vermiculita nos substratos; acreditando que dessa forma manterei o bolo aerado facilitando a manutenção da umidade.--------------------------------------------------
CRIAÇÃO DOS BOLOS
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CRIAÇÃO DOS BOLOS
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SUBSTRATO SEMENTES DE PÁSSAROS +VERMICULITA:
250 ml painço (1 xícara)
250 ml alpiste (1 xícara)
70 ml niger (1/4 xícara)
1000 ml vermiculita ( 4 xícara)
1000 ml água mineral ( 3 a 4 xícara)
Preparo do substrato sementes de pássaros:
As sementes foram lavadas e escorridas por duas vezes, após foi deixada de molho por 4 horas em água comum sendo descartada a água do molho. Após secas/escorridas foram colocadas na panela com 4 xícaras de água mineral e cozidas por 40 minutos em panela tampada sem pressão. Sobrou pouca água que foi reservada para ser usada quando da adição da vermiculita.
Preenchimento dos copos sementes de pássaros e esterilização:
Em uma bacia foi homogeneizado a semente de pássaros, a vermiculita e por último a pouca água remanescente do cozimento com mais 3 a 4 xícaras de água mineral. Os copos foram preenchidos e lacrados apenas com as tampas (sem papel alumínio) obtendo rendimento de 05 copos de 336 ml, deixando 1 cm de espaço até a tampa (do total de substrato houve sobra de aproximadamente 3/4 de um copo, não utilizado), sendo esterilizados por 1h20min sob pressão. Os copos foram resfriados normalmente (12h), sem abrir a panela de pressão. Após aberto a panela de pressão, um dos copos havia tombado e e se encheu de água, os copos em bom estado (04) foram borrifados com álcool 70 e transferidos/armazenados em recipiente fechado sob luz UV (por aproximadamente 2h) até a inoculação.
Método de inoculação dos copos sementes de pássaros:
Após resfriamento e banho de luz UV, na boca do forno os 04 copos foram inoculados com micélio de 02 placas de petri 60x15 e tampados, sendo envoltos em plástico para proteger de contaminantes e imediatamente transferidos para incubadora em temperatura de 28~29C. Como o micélio foi colocado sobre o substrato os copos serão armazenados de ponta cabeça (micélio ficará embaixo do substrato)
SUBSTRATO ARROZ INTEGRAL +VERMICULITA:
500 ml (2 xícara) de arroz integral
1000 ml ( 4 xícara) vermiculita
1000 ml ( 3 a 4 xícara) água mineral
Preparo do substrato arroz integral:
O arroz integral foi moído até alcançar consistência de farinha fina. Em uma bacia foi homogeneizado a farinha de arroz, vermiculita e por último a água mineral.
Preenchimento dos copos arroz integral e esterilização:
Os copos foram preenchidos e lacrados apenas com as tampas (sem papel alumínio) obtendo rendimento de 05 copos de 336 de ml, deixando 1 cm de espaço até a tampa (do total de substrato houve sobra de aproximadamente 3/4 de um copo, não utilizado), sendo esterilizados por 1h20min sob pressão. Os copos foram resfriados normalmente (12h), sem abrir a panela de pressão. Após aberto a panela de pressão os copos foram borrifados com álcool 70 e transferidos/armazenados em recipiente fechado sob luz UV (por aproximadamente 2h) até a inoculação.
Método de inoculação dos copos arroz integral:
Após resfriamento e banho de luz UV, na boca do forno, os 5 copos foram inoculados com micélio de 02 placas de petri 60x15 e tampados, sendo envoltos em plástico para proteger de contaminantes e imediatamente transferidos para incubadora em temperatura de 28~29ºC. Como o micélio foi colocado sobre o substrato os copos serão armazenados de ponta cabeça (micélio ficará embaixo do substrato)
SUBSTRATO SEMENTES DE PÁSSAROS + ARROZ INTEGRAL + TRIGO + VERMICULITA:
01 copo do substrato de sementes que havia tombado durante a esterilização
As sobras do substrato de sementes (3/4 xícara)
As sobras do substrato de arroz integral (3/4 xícara)
250 ml (1 xícara) de trigo para kibe (marca Yoki)
800 ml ( 2 a 3 xícara) vermiculita
700 ml ( 2 a 3 xícara) água mineral
Preparo do substrato kibe+arroz+sementes pássaros+vermiculita:
Em uma bacia foi despejado 250 ml de água fervente sobre o trigo de kibe deixando em repouso até que toda água fosse absorvida. Em seguida foi acrescentado a vermiculita, as sobras dos dois primeiro substratos (copo sementes tombado durante esterilização+3/4 xícara sementes+3/4 xícara arroz integral), os ingredientes foram homogeneizado e por último a água mineral.
Preenchimento dos potes de substrato kibe+arroz+sementes pássaros+vermiculita e esterilização:
Os copos foram preenchidos e lacrados apenas com as tampas (sem papel alumínio) obtendo rendimento de 05 copos de 336 de ml, deixando 1 cm de espaço até a tampa, sendo esterilizados por 1h20min sob pressão. Os copos foram resfriados normalmente (10h), sem abrir a panela de pressão. Após aberto a panela de pressão os copos foram borrifados com álcool 70 e transferidos/armazenados em recipiente fechado sob luz UV (por aproximadamente 2h) até a inoculação.
Método de inoculação dos copos kibe+arroz+sementes pássaros+vermiculita:
Após resfriamento e banho de luz UV, na boca do forno, 03 copos foram inoculados com micélio de 02 placas de petri 60x15 e tampados, sendo envoltos em plástico para proteger de contaminantes e imediatamente transferidos para incubadora em temperatura de 28~29ºC. Como o micélio foi colocado sobre o substrato os copos serão armazenados de ponta cabeça (micélio ficará embaixo do substrato). Por falta de espaço 02 copos desse substrato não foram inoculados, estão protegidos envoltos em plástico e sob refrigeração.
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PREPARAÇÃO DE CULTURA LIQUIDA E ARMAZENAMENTO EM POTES PP DE 336 ML.
PREPARAÇÃO DE CULTURA LIQUIDA E ARMAZENAMENTO EM POTES PP DE 336 ML.
Foi preparado 720 ml de de cultura liquida com a seguinte composição:
500 ml de água de coco (rótulo informa que é esterilizada e contém 1% de sacarose)
220 ml de água mineral
3 g. de mel
720 ml de cultura liquida foi disposta em 07 potes de 336 ml (100 ml em cada copo), esterilizada em panela de pressão por 01 hora e resfriada. Após resfriamento foi exposto a luz UV por 2h. Na boca do forno 07 potes foram inoculadas com micélio de 02 placas de petri 60x15, tampados e envoltos em plástico para proteger de contaminantes, posteriormente armazenados em temperatura ambiente 17~23ºC.
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PREPARAÇÃO/INOCULAÇÃO DE PLACAS DE PETRI 90X15 (BDA):
Foi preparado 500 ml de BDA, posteriormente esterilizado em panela de pressão por 45min. e resfriado até 45C. Na boca do forno foi dispensado em 07 placas petri 90x15 que foram transferidas para ambiente fechado e expostas a luz UV pelo periodo de 02h. Após esses procedimentos, foi inoculada com o micélio de 02 placas petri 60x15 e imediatamente lacrada com filme PVC e transferido para incubadora em temperatura de 28~29ºC.PREPARAÇÃO/INOCULAÇÃO DE PLACAS DE PETRI 90X15 (BDA):
Tenho uma dúvida: O fato de colocar os copos/bolos de ponta cabeça pode atrapalhar o desenvolvimento do micelio? Fiz desse modo por acreditar que ocorreria maior contato do substrato com o micélio.
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