Completo Recuperando esporos 2007 - Cultivo Orissa, Taz, Pesa,TKSS e Cambodian

RECUPERAÇÃO DOS CARIMBOS
Ganhei muitos carimbos antigos de um amigo de 2007, 2008 e 2009. Com a esperança de recuperá-los apartir de cultura liquida e isolamento em Placa de Petri com Agar

Testei primeiro as Strains:
Pink Bufalo 2007
Cambodian 8/2009
Penis Envy 6 5/2008
Orissa India 01/2008
Mexican Tucun 8/2007
Dancing Tiger 5/2008
Oak Ridg 05/2008
Porto Rico 12/2007
Tazmanian 2009

6 de agosto
Os carimbos foram inoculados em meio de cultura liquido
- Com o uso de um Swab (cotonete longo estéril), coletei todo material do carimbo, coloquei em um tubo falcon de 15 ml, contendo 3 ml de meio de cultura, cortei com uma tesoura flambada a alça do swab, e homogenizei por 1 minuto.

Inoculação das placas de petri com meio de cultura agar
- Com uma pipeta pasteur (Pipeta que tem um bulbo, quando apertada o material entra) descartável de 3 ml, foi coletado 4 gotas dos esporos diluído no meio liquido, forma espalhadas na placa de petri , com esfregaço.

As placas e os tubos foram armazenadas em caixa de isopor, temperatura de 26 a 29ºC

Nenhum das placas ocorreu crescimento
Algumas placas houve crescimento de contaminantes
Na maioria dos tubos teve contaminações , contaminantes diferente, mas apareceu com maior frequência duende verde ( preciso estudar mais a identificação deles)

Passado quase um mês resolvi inocular o meio de novo com alguma esperança
Em 30 de agosto
Inoculei a cultura liquida novamente em placa de petri, mas somente de algumas strain:
Tazmanian, Cambodian, Pink Bufalo, Orissa India, Oak Ridge, Port Rico, Mexican Tucun e Penis Envy 6
Com cuidado para não pegar os contaminantes
Resultado
Mexican Tucun -Tem um pequena borda ao redor do esporo, parece que ira crescer algum dia
Penis Envy 6- Não cresceu nada ate o momento
Dancing Tiger - Não cresceu nada
Porto Rico - Não cresceu nada
Oak Ridge - esta crescendo, mas estou em duvida se e ele ou contaminante, vou aguardar mais um pouco para confirmar, mas 80% de chance de ser PC
Pink Bufalo- Esta iniciando o crescimento, mas não da para identificar ainda
Cambodian - Cresceu micelio, contaminação esverdeada e parece ter tido uma contaminação por Pseudomonas.
Tazmanian - Placa 100% colonizada
Orissa India- Colonizou 70 %, com 3 focos de contaminante

4 de agosto
Isolamento do Micélio em meio liquido:
- Isolei uma pedaço com uma ponteira , e coloquei dentro do falcon com meio de cultura
Fiz 3 Tazmanian, 2 Orissa e 1 Cambodian
Todos tiveram crescimento de micelio, mas irei testar o cambodian em placa de petri, pois a placa dele havia muita contaminação.

As fotos das placas e meio de cultura liquido

 

[Mauricio]

Tente com água mineral e glucose de milho.
Eu uso glucose líquida, incolor, que compro em confeitaria.
Prepare a solução BEM DILUÍDA (3%) e esterelize por 15 minutos no MÁXIMO.
A diluição e o tempo de esterilização não permitem que o açúcar polimerize.
O aquecimento explusa os gases dissolvidos na água (CO2, O2).
Depois de esterilizar resfrie na geladeira e agite vigorosamente para incorporar O2 na solução, faça por 2 dias só então coloque os esporos.

 

[Biolouka]

Concordo, já aconteceu comigo ao tentar isolar a strain Australia, 5 placas e 5 CL's todas com trich. Terrível.

Aproveitando o post, peço humildemente: Galera, vamos nos dedicar um pouco mais na assepsia durante a carimbada?! O próximo a receber um carimbo contaminado pode ser você! Pense nisso!

Neste caso Cosmik, eu já sabia que as possibilidades de recuperar estes carimbos eram pequenas, o colega que me cedeu, ja havia me dito que não estavam germinando, mas eu queria testar e ver uma forma de salva-los.
Se de todas estas strains eu consigar salvar pelo menos o Orissa, ja fico feliz.
E faço tudo com muita amor, um desafio , e para aperfeiçoar minhas tecnicas tambem, que so aprendo a cada dia.

E lá vamos nos
Resolvi hidratar outros carimbos, antes de inoculr na cultura liquida.

12 de setembro
12 tubos falcon de 15 ml com 10 ml de agua deionizada autoclavada em cada
12 swabs

Strains:
Cambodian - jul/2009
Porto Rico - jan/2008
Costa Rica - agos/2007
Trankei - agos/2007
Penis Env6 - maio/2008
Thai BPK - jan/2008
Thai Koh Samui - jan/2008
Tazmanian - agost/2009
Pink Bufalo - dez/2007
Creeper - sem data
Mex Tucum - nov/2008
Mex Palenque - agost/2007

Molhei o swab esteril na agua e passei sobre o carimbo coletando todo material, agitei o swab no tubo e descartei o swab, marquei o nome da strain, data do carimbo e data da hidratação.

Pretendo deixar 48 horas em temperatura ambiente. E depois pipetar 200ul em meio de cultura liquida, e inocular 200 ul em placas de petri.

Usei a agua deionizada, pois ja estava autoclavada e temperatura ambiente, eu sempre usei agua destilada ou deionizada nos meus cultivos e sempre desenvolve bem, e não tive tempo de autoclavar a agua mineral. Acredito que não tera muita diferença, pois so usarei para hidratar e diluir os esporos, depois faço a cultura liquida.

Vou usar o mesmo meio liquido, pois ja esta pronto, foi autoclavado esta semana, maximiza meu tempo. Usei este meio para 10 CL de Pesa e TKSS e desenvolveu muito bem, ja tem uns 4 meses , e quando inoculo o PF ou milho, é bem rapido, vou testar denovo, caso não tenha resultados positiva, vou preparar o meio que o Mauricio me indicou

 

[Biolouka]

Tente com água mineral e glucose de milho.
Eu uso glucose líquida, incolor, que compro em confeitaria.
Prepare a solução BEM DILUÍDA (3%) e esterelize por 15 minutos no MÁXIMO.
A diluição e o tempo de esterilização não permitem que o açúcar polimerize.
O aquecimento explusa os gases dissolvidos na água (CO2, O2).
Depois de esterilizar resfrie na geladeira e agite vigorosamente para incorporar O2 na solução, faça por 2 dias só então coloque os esporos.

Mauricio, posso usar Glicose ou triptona?
Mas se fizer o meio com Glicose não vou poder autoclavar?

Mauricio, posso usar Glicose ou triptona?
Mas se fizer o meio com Glicose não vou poder autoclavar?

A ta achei aqui vou usar dextrose, correndo que tenho que autoclavar material agora...

 

[Mauricio]

Mauricio, posso usar Glicose ou triptona?

dextrose=glucose=glicose
triptona é diferente

Mas se fizer o meio com Glicose não vou poder autoclavar?

Porque não, bastam 15 minutos no máximo.

 

[Biolouka]

Substrato para os Vidros de Milho de Pesa e TKSS
5 potes de po de coco
5 potes de humus de minhoca
5 colheres de calcario
5 colheres de cafe
600 ml de agua filtradas
8 potes Tapoeres de tamanhos diferentes (as q achei na emergencia com n 5)
microporo

Furei as tampas coloquei microporo do lado de dentro e fora
Misturei tudo, bem homogenizado, depois adicionei a agua. Distribui nos potes. Com resceio dos potes naõ aguentarem, embrulhei no papel manteiga para não cair o substrato na autoclave.. Autoclavei, reservei numa caixa para esfriar.

Preparei Meio de Cultura
250ml de agua filtrada
2g de dextrose
Autoclavei

Esporos em H20

Inoculei 200 ul da solução h20 e esporos em 3 ml de cultura liquida a mesma q usei anteriormente
inoculei algumas strain em placa de petri 200 ul da solução

Preparei Milho da mesma forma anterior, para as strains que estiverem viaveis.
Preparei PF tb 4 copos e uma tapoer pequena
Autoclavadas hj

 

[Mauricio]

Se tiver como obter sphagnum utilize no preparo é excelente.
Tem uns cultivos do Pajé que são fantástico.
Ele enviou-me para utilizar e fiquei impressionado com o rendimento e também com a imunidade que dá aos bulks.

 

[Biolouka]

Se tiver como obter sphagnum utilize no preparo é excelente.
Tem uns cultivos do Pajé que são fantástico.
Ele enviou-me para utilizar e fiquei impressionado com o rendimento e também com a imunidade que dá aos bulks.

Este sphagnum é para substituir o po de coco?
Vou dar uma procurada por aqui, vi um site na net , mas comprar pessoalmente acho melhor, alem q evita o frete...
valew a dica

 

[Biolouka]

Novas Placas e Tubos
Cambodian contaminado novamente com Trich, colonizou ate os esporos com agua
Taz contaminados colonias circulares bem pequenas brancas - fungo
Os outros nâo cresceram nada

PF inoculados em 4 de setembro
Os pesas :
estão quase prontos para Dunk e terrario, so 2 potes q estão a 96%
diferença na colnização do PF tek comum, para o com sementes:
os com sementes o micelio ficu mais zigomorfico, mas a velocidade de clonização foi semelhante.



Os TKSS:
Ainda não inocularam todo o copo, quando fui inocular o CL, peguei o CL errado , que estava em observação, com mens micelio, que achava suspeito.
PF Tek colonização em 90%
PF com sementes - Não cresceu nada, reinoculei mais miceli a uns 10 dias e ainda nada



Hipoteses:
Cl contaminada, micelio fraco
TKSS não curte sementes

Milho Pesa e Taz inoculado em 31 de agosto
20 de setembro
9 ptes entre pequeno, medio e grande com substrato aoutoclavado
Não medi nada certo, mas eram 3 receitas
separei os potes 2 para cada vidro
Na boca do forn0 com um protetr lateral para vento, pre aquecid por 30 minutos
distribui o milho nos potes com auxilio de um colher, limpa em agua sanitari, alcool 70% e flambada entre cada distribuição
Deixei a parte de baixa sem nda para ver o crescimento, mas qd sair da incubadora passarei uma fita preta ou algo escuro

pote pequeno TKSS com 5 dias na incubadora

 

[Insider]

Tai o bom exemplo de carimbos velhos COMPLETAMENTE VIAVEIS.. essa vai para os resmugoes que reclamam dos carimbos da ProFungos.

 

[Biolouka]

Tai o bom exemplo de carimbos velhos COMPLETAMENTE VIAVEIS.. essa vai para os resmugoes que reclamam dos carimbos da ProFungos.

Este cultivo foi outros carimbos, para mim não ficar sem nada no terrario, mantive outros cultivo, os carimbos velhos ainda não tive respostas positivas, vou continuar tentando, mas estou para receber outros carimbos tb antigos para recuperar, estou positiva ... rsrsr

 

[Zebu mello]

lindo trabalho, isolar e uma otima terapia, com certeza serao meses, pensando nisso na hora de dormiro...
força!!

 

[SILVIOX]

Isso que é um bom trabalho e dedicado. Como dizia o professor da Escolinha do professor Raimundo: Eu queria ter uma filha assim!!

 

[Biolouka]

Isso que é um bom trabalho e dedicado. Como dizia o professor da Escolinha do professor Raimundo: Eu queria ter uma filha assim!!

Ce tem, ate pq sem seu auxilio e dicas, tanto para meu primeiro cultivo com sucesso e ate hj , teria sido muito mais dificil... sempre me dando dicas preciosas...

 

[Biolouka]

30 de setembro
Na boca do forno, previamente aquecido
injetei aproximadamente 30 ml de agua filtrada e fervida, em cada copo, embrulhei bem e guardei na geladeira.

01 de outubro
Coloquei os bolos no terrario um um pouco de vermiculita na placa
Meu terrario 1 são 4 caixas de isopor interligadas:

Compatilhamento 1 A: 3 furos a redr da caixa com papel filtro, uma mangueira da bomba coberta com papel microporo, com argila expandida, agua fervida com uma colher de agua sanitaria . 4 bolos de Pesa ( capacidade para ate 6 bolos)


1B : 2 saidas de ar com papel filtro, 1 entrada da mangueira dentro de um garrafa aberta com agua fervida com 1 colher de agua oxigenada volume 10 na mangueira papel microporo na saida. capacidade para te 5 bolos. coloquei 4 bolos de Pesa


1C- 2 saidas de ar, 1 entrada. capacidade 6 bolos, cloquei 2 bols de TKSS

1D- 3 saidas , 1 entrada na agua, cm 2 potes 1 com TKSS e 1 com Pesa

Terrario 2
Um galão de alcool de 10 litros com 4 saidas com papel filtro , e uma entrada com um coller, argila expandida com agua e agua sanitaria, 3 potes com pesa.
Tera um brbulhadr dentro ainda, com uma bmba pequena


Terrario 3
Uma caixa organizadora
Com uma saida
Uma entrada com coller
um entrada cm mangueira da bomba em uma garrafa de agua
Este terrario sera para casing, mas no momente esta cm 4 bolos de TKss e 1 Pesa antigos, mas que ainda estã frutificando.

 

[Biolouka]

Os ultimos esporos que testei, não germinaram
Creper contminação bacteriana
cambodian novamente contaminado

1º Frutificação
Pesa
Pinou em 9 de outubro

TKSS
Pinou em 10 de outubro
Mas esta mais devagar que o Pesa, me parecem tortos.


Recebi mais alguns carimbos para recuperar, mas devido a trabalhos academicos, não vou usar todos os carimbos agora, mas em janeiro vou aumentar meu cultivo, e utilizarei o restante.

Selecinei 5 strains para fazer CL
Ecuador 08/2007
Dancing Tiger 2008
Tazmanian
A+ Albino
Blue Meanie (03/2011)


Em 11 de outubro

Utilizei Dextrose, para o meio de cultura liquida desta vez
Com um Swab ( conete esteril), coletei uma parte pequena dos esporos e dilui na cultura liquida.

 

[SILVIOX]

Nossa ! As crianças estão lindas!!!

 

[Biolouka]

Alguem sabe me dizer se essas strain se desenvolvem bem no PF com semente de passaros
Ecuador 08/2007
Dancing Tiger 2008
Tazmanian
A+ Albino
Blue Meanie (03/2011)

No cultivo atual o TKSS não desenvolveu no PF com sementes, somente cresceu no PF tek cremogema.

 

[Mortandello]

faz o teste com copinhos pequenos.
e relata pra gente, eu pessoalmente prefiro o cremotek mas ae vai de cada cultivador.

 

[Biolouka]

faz o teste com copinhos pequenos.
e relata pra gente, eu pessoalmente prefiro o cremotek mas ae vai de cada cultivador.

Então, é que estou com pouca vermicultita, e queria preparar amanhã, para levar para autoclavar na segunda.
Mas vou ter q segurar a ansiedade, e esperar para comprar mais vermiculita.

 

[Mortandello]

ali pertinho da luz tem uma loja que vende o saco de 2 litros a 3,50R$