Problemático GT • PF Tek + Antibiótico

E aí pessoal, tudo em paz?!

bem, já faz um bom tempo q num tento cultivar cogumelos. minha ultima, e primeira, tentativa foi com a strain Canbodian (FSRE) e num deu certo pq contaminou tudo.

Agora, depois de 6 meses, estou voltando com um print de GT (o meu último pedido pelo FSRB) e um novo cultivo... Salve!

Vamos começar então...

Sábado - 25/02/06 12:30

Preparando o substrato: PF Básico + Amoxilina

Fiz a técnica PF conforme as dicas da biblioteca com passos adicionais... vamos por partes né:

• Preparação do substrato

numa tigela juntei 2 copos de vermiculita e 200mg de amoxilina* em pó (cápsula) diluída em 1 copo de água mineral. Misturei muito bem e só depois acrescentei 1 copo de farinha de arroz integral moída na hora.
após muito bem misturado com carinho, é lógico, deu uma quantidade suficiente pra 5 copos.
com uma colher, fui colocando suavemente o substrato nos copos, sempre dando uma mechidinha pra ficar bem aerado e deixando cerca d 1 cm de sobra em cima pra colocar o selo de vermiculita (camada de vermiculita seca).
Então coloquei um pedaço generoso de papel alumínio sobre todos os copos e mandei pra panela de pressão com cerca de 3 dedos d'água. Couberam os 5 copos na minha panela.
Tampei, tirei o pesinho da tampa e coloquei em fogo alto.
*Obs.: deve ser usado 50mg/copo de substrato de antibióticos, porém como eu num sabia que toda a mistura ia dar pra encer 5 copos, utilizei 200mg mesmo.

• 12:55 Tampei, tirei o pesinho da tampa e coloquei em fogo alto.

• 13:05 Como nas dicas da biblioteca, esperei comecçar a sair o ar da panela (5 min) então contei o tempo pra todo o ar sair até so haver no interior da panela vapor d'água (5 min). Só entaum coloquei o pesinho da tampa com o auxílio de um pano pa num me queimar e começei a contagem do tempo de esterilização.
Obs.: no momento do tmepo de esterilização me esqueci de abaixar o fogo da panela ...

• 13:45 Finalizado o tempo de esterilização, um leve cheiro de arroz cozido , mas tudo bem... vamso ver depois na hora da inoculção se o selo de vermiculita vai estar seco... Agora é soh deixar esfriar por 24 horas...

• Confecção da seringa

• 22:15 Do mesmo dia..rs.. logo d manhã minha mãe havia limpado e preparado o banheirinho do fundo d casa pra eu usar como "laboratório"...rs
Tranquei tudo e abri soh essa hora pra confecionar a seringa. Como eu estou com gripe, tomei um banho com protex pra minha assepsia, utilizei luvas, toca e máscara. limpeza do ar com lysol em borrificador improvisado, seringa de 20ml esterilizada, uma taça de boca estreita.

Bem, primeiro desinfectei o ar com lysol; limpei a taça com álcool, mas como a luva tava cheia de lysol axei perigoso para os esporos, entaum passei áqua da torneira com medo deles morrerem por causa do lysol . preparei a seringa, esterilizei a agulha com uma chama de isqueiro, abri o print e raspei com a agulha cerca de 1/5 do print, deixando os esporos cairem dentro da taça (o print era dos grandes, com uns 6 cm de diâmetro ), entaum furei com a agulha a embalagem do soro fisiológico e suguei 20ml, votei à taça e joguei todo o soro contido na seginga pra mistura-lo ocm os esporos, suguei e soltei novamente, agitando a taçã como se fosse vinho , depois suguei mais uma vez e pronto, a seringa tava pronta. Sua água estava bem escurinha com muitos e muitos blocos de esporos. Esterilizei novamente a agulha e a tampei com o protetorzinho de plastico...

Reservei até o dia seguinte pra inoculação.

 

[Night Storm]

Valew gente pela força e pela resolução dos nossos problemas de cada dia . Quanto ao uso de antibióticos eu usei pra ajudar a evitar contaminação por algumas bactérias e outra, eu jah tinha amoxilina em casa, entaum uni o útil ao agradável. Qto ao uso de água oxigenada por enquanto eu num vou usar não, pq os únicos lugares que ela pode ser usada é na seringa ou ba borrificação do terrário, e como meu processo na preparação de serignas é bem rápido, como vcs podem ver nesse cultivo, pra evitar q esporos e endoesporos contaminantes cheguem a ela, usar água oxigenada só estaria colocando um passo a mais, assim deixando a seringa máis propícia a esses contaminantes... Mas isso num tira a possibilidade de eu usa-la um dia, principalmente no caso de um futuro cultivo em meio líquido ocm Yoki (genérico de Karo)

Abraços!!!

 

[Night Storm]

Entaum gente, olha só, estou psotando as fotos daquele copo q parecia estar ocntaminado, mas agora axo q é micélio de P cubensis, um super GT q germina e cresce 90% em 5 dias!!!

Vamos lá, ovu postar, as fotos num estão muito boas, mas jah jah posto mais fotos, junto ocm as fotos do outro copo q tem manchinhas amarelas...

Aqui tah o menino cresce-rápido...

 

[NeuroFX]

E115, vou fazer alguns comentários mas eu posso estar completamente errado, já que as fotos não estão nítidas.

Pelo o que vi não acredito que seja micélio, mesmo se fosse uma superstrain de rápido crescimento, a aparência do micélio seria rizormófica. Nas fotos me parece que o organismo que tá crescendo no seu bolo é meio algodoado e ainda naquela fase de nuvem que o micélio apresenta bem no início da germinação.

Cogitou-se o fato de ser cobweb. Se vc esterilizou legal e vedou não é cobweb. Os esporos desse fungo morrem com a temperatura acima dos 50 e mesmo assim não tá com aparência de cobweb (pelo menos nas fotos).

Micropore é filtro, mas deixa passar alguns microorganismos. O selo de vermiculita já é uma barreira, portanto duas ou três camadas de micropore funciona e não é responsável por contaminação, na minha opinião. A troca gasosa acelera o crescimento e ainda impede que alguns contaminantes cresçam no bolo. Um exemplo disso é o próprio cobweb que tem como causas principais de surgimento a umidade excessiva e a não-circulação de ar.

Acho melhor aguardar e ver como essa nuvem branca vai criar densidade. Se vc puder mandar fotos com maior resolução seria uma boa.

Se mais tarde vc quiser tirar a prova-dos-nove, abra esse copo, salpique um pouco de sal sobre o microorganismo, feche novamente e veja o que acontece com ele.

Sorte!

 

[Night Storm]

Gente, valew... pelo q vc disse NeuroFX, acho tbm q é cobweb... bem, pra ocnfirmar aki estão algumas fotos em alta nitidez e resuloção, a última é da manchinha amarela q eu disse (está em outro copo)

Mas eu num me preocupo de começar um novo cultivo se esse num deu certo, aprendi muita coisa nova no decorrer desses 5 dias...

Mutio obrigado mesmo gente, por estarem acompanhando meu cultivo!

PAZ!!!!

:

 

[Law RJ]

FalaÊ, galera! blz?

Bem, no meu cultivo, apenas uns 2 de 6 copos apresentaram um crescimento algodoado e rápido nos primeiros dias, os copos se desenvolveram muito mais rápidos do que o normal (acredito eu), porém, não tanto quanto os do E115. Creio que esse crescimento acelerado seja devido ao uso de antibióticos na cultura. (e o micropore) :

Quanto às manchinhas amarelas... Desencana! Aqui apareceram as mesmas manchas e não se desenvolveram em absolutamente nada. Na minha opinião, elas são resíduos sólidos de antibiótico ou coisa do gênero.

Depois de ter lido seu post sobre as manchas amarelas, eu fiquei curioso aguardando as fotos só pra ter certeza que eram a mesma coisa que tinha aparecido no meu. hehehe

É isso aí. os:

Abraços aê e sorte no teu cultivo. Aguarde mais uns 2 dias e o seu micélio deve ficar mais rizomórfico.

 

[pegaso]

o melhor para se vedar os frascos de cultivo é uma boa fita crepe para auto-clave, ela é quase o mesmo preço da normal

aeh, pscilo, onde encontrar essa fita crepe para autoclave?

abs.

 

[Night Storm]

Ae gente, descobri algo q eu possa ter q jogar todos os bolos fora


bem, agora pouco (d manhã da sexta feira) vi que em além daquele copo aí em cima, outros dois apareceram hj de manha colonizados pelo mesmo fungo com cerca de 60% a 90% de colonização em cada copo... percebi também q em outro copo um fungo cresce, pequenino, mas jah aparentando ser trichoderma (vi pequenas regiões verdes) de mais ou menos 1cm de diâmetro, alinhado com o furo de inoculação... e no quinto copo (q era um antigo de wisky, cheio de detalhes) que uma região perto de um dos furos de inoculação está com 1/2cm de diâmetro, aparentando ser Psilocybe, pois em uma outra região do memso copo vi um fungo semelhante ao os outros copos, porem ocm uma área de uns 2cm de diâmetro (esse copo foi mais difícil de visualizar tudo pelso entalhes do copo, eu num tinha outro liso em casa mesmo ).

Pude notar também, mas mais importante que tudo, que esse fungo que crece do dia pra noite, sugira de dentro para fora do copo, então oq pode tirar a possibilidade de ser P. cubensis, pois senão teria q começar a crescer próximo aos pontos de inoculação para todos os lados, naum de dentro para fora...

Aguardo comentários

 

[calimba]

o melhor para se vedar os frascos de cultivo é uma boa fita crepe para auto-clave, ela é quase o mesmo preço da normal

aeh, pscilo, onde encontrar essa fita crepe para autoclave?

abs.

Em lugares que vendem material cirurgico, otopédico, odontologico e afins. Em casas que vendem material pra laboratório, ela é bem facil de axar viu pegaso.

Paz.

To vendo que as esperanças já se esvairaram, isso ai é contaminaçao mesmo, ou vc pegou prints de uma raça de cogus criada em estrume de coelho, haha ou no coco do the flash... A

gora é começar de novo cara, garanto que voce aprendeu bastante com seus erros e com esse cultivo, o proximo terá muito menos falhas.

Nao descarte ainda os copos, mas já vá preparando uim novo cultivo, ter copos contaminados é um risco que todos nós corremos, o importante é nao desistir.

Paz cara, aguardo a novo cultivo !

 

[Night Storm]

Gente,

O copo tah 100% colonizado com esse fungo... qdo fui abrir, vi q até o selo de vermiculita tava colonizado. e outra, parece ser P cubensis mesmo ou outro fungo, mas cobweb não por alguns motivos:

- Num tem aparência de teia de aranha
- Tah branco demais
- o cheiro lembra patê de figado de frando da Batavo!!!

Gente, o copo tava meio seco, coloquei um pouco dágua pro copo soltar, entaum takei ele num dunk e coloquei na geladeira....

Os outros copos tbm estão colonizando esse micélio desconhecido (até então)

OQ VCS AXAM? :!:

 

[NeuroFX]

Não esqueça de fazer o teste do sal.

Boa sorte na próxima tentativa! os:

 

[Night Storm]

Que teste do sal???

 

[calimba]

Que teste do sal???

Tbém desconheço Neuro, explica ai pra gente.

 

[NeuroFX]

Deve ser trichoderma...

Então, seja cobweb ou trichoderma, vc pode pegar os bolos e salpicar algum sal neles (carbonato de cálcio, hipoclorito de sódio, bicarbonato de sódio etc.). Pra esses dois fungos aumentar o pH faz com que o seu crescimento seja inibido. Em cultivos comerciais essa medida de profilaxia é adotada pra evitar que os fungos se espalhem pelos cultivos.

Já que contaminou, seria interessante aproveitar e aplicar essa medida e ver como ela funciona. Talvez mais tarde, se um casing seu contaminar, vc pode adotar essa medida e talvez conseguir salvar parte do cultivo.

 

[Night Storm]

Fim do cultivo - inicio de outro cultivo

Então galera

Realmente num é P cubensis, e jah joguei tudo fora... tirei essa conclusão pq eu fiz um pequeno terrário on tem, lá pras 7 da noite, pro copo colonizado e aguardei até agora pouco, antes de vir pro meu trampo... resultado: um micélio fofo envolveu o copo, crescendo 1cm pra todos os lados.... sua textura num era de cobweb, este parecido ocm uma teia de aranha, mas tbm num era micélio de P cubensis, pois num era grudento, mas parecia algodão doce: qdo vc tocava, ele murchava (toquei com uma faca limpa, é lógico)... então num tive dúvidas, juquei o ocnteúdo de todos os copos fora, estes q jah estavam qse 100% colonizados tbm, apenas 1 num tinha colonizado nada, apenas uns pedaços de trichoderma esporados por todo o copo...

Conclusão do cultivo:

Aprendi muito com o pessoal aqui q postou no meu cultivo... agradeço a todos os: : .

Então vamos aos possíveis erros cometidos que serão evitados nesse próximo cultivo q inicio amanhã:

- Sistema de esterilização: antes de levar os copos à panela de pressão eu cobri com papel alumínio, e ocmo o Psilocibec havia dito pra mim: "Se vc cobre ele 100% e num faz nenhum buraco, dentro da panela de pressão, a própria pressão vai fazer ocm que o alumínio grude no copo, e o vapor d´'agua num entrará no meio de cultivo"... Então eu deveria der feito, no mínimo 2 pequenos furos (um pra entrar, o outro pra sair o vapor, é lógico). Esse pode ter sido o principal erro.

- Limpeza do recipiente de msitura de esporos + soro: a taça onde misturei os esporos com o soro havia sido limpa com álcool, mas como eu tinha pecebido antes, deveria ter caido gotas de lysol no papel guardanapo no qual eu ia passar o álcool na taça, entaum lavei com água de torneia ...

- Uso inadequado de micropore: ninguem especificou que deveria colocar mais de um micropore/furo nos locais onde pesquisei sobre... apenas um de nosssos amigos aki nos disse q endoesporos e esporos passam pelos furos do micropore (e eu axando q apenas algumas moléculas passavam) . Definitivamente, micropore é caro, inadequado. Não usarei mais. Pra mim é perda de dinheiro (gastei 3,50 com esse rolinho minúsculo de micropore e acabou tudo nesse cultivo).

- Micropore + elástico = formigas: Essa porcaria de micropore foi frágil, as formigas fizeram um arrombo no micropore, e transitavam livremente... além da posssibilidade de passarem por algum local onde elástico num lacrava.

Descarto a possibilidade da amoxilina ter ajudado a contaminar... porem no copo onde mais se demorou a ver algo, oq apareceu foi trichoderma... em 7 dias nenhum sinal de micélio de P. cubensis... 7 dias num é bastante para os esporos germinamrem e o micélio ser visível a olho nu?!

Enfim... é isso...

Amanhã ou segunda eu posto aki o endereço do meu novo cultivo.

Cultivo encerrado.

 

[NeuroFX]

Fim do cultivo - inicio de outro cultivo

É uma pena E115, mas é uma situação a qual todos os cultivadores estão constantemente sujeitos.

Vc não precisa fazer furos no papel alumínio ao esterilizar, basta deixá-los um pouco soltos que o vapor vai penetrar no copo.

Eu acho que o problema pode ter sido essa água de torneira que vc usou no processo de esterilização.

Quanto ao micropore, não acho que foi a causa. Como já disse num post anterior, mesmo que alguns organismos passem pelo micropore, ainda tem o selo de vermiculita pra proteger. No seu caso há de se especular a possível contaminação prévia do arroz utilizado ou um processo de esterilização falho em algum ponto. O fato é que o que vale para alguns pode não valer para outros. Muitos utilizam micropore e elástico sem problemas de contaminação. Até se vc apertar bem o papel alumínio em torno do copo dificulta a entrada de macro e microorganismos.

Boa sorte na próxima tentativa!

 

[calimba]

Fim do cultivo - inicio de outro cultivo

Hhehe um furo soh tah bom cara, hehe nao precisa ficar entrando e saindo nada, o interioro do copo soh nao pode estar isolado do restante da panerla, e nao eh nem pelo vapor e sim pela pressao, se o interior do copo estiver isolado a pressao interna nao sera igual a pressao exterior, eu sempre deixo alguma entrada quando esterilizo

Elastico funciona bem mas se for bem apertado, eu prefiro vedar meus copos com plastico de pvc e fita adesiva, deixa o local das inocuilacoes visivel e dah pra ver quando comeca a colonizar, e plastico de pvc veda bem se vc apertar ele conta o copo, e a fita nao deixa q macro organismos entresm, como formigas e outros bixos escrotos.

Bom, agora eh comecar um novo cultivo e fazer como vc estah fazendo, corrigir erros de experiencias anteriores, assim se chega a um cultivo perfeito.

Mal aventurados os que nao erram, pois esses nada aprendem.

Paz e sorte no proximo cultivo

 

[CoguMagico]

No caso dessa foto

pq vocês dizem não ser micelio ?

 

[NeuroFX]

É uma afirmação um pouco abstrata, pois se parece muito com micélio, mas há uma diferença sutil.

Eu nunca vi micélio crescer assim, mas não descarto a possibilidade de um dia me deparar com um tipo diferente de crescimento com o qual eu estou habituado a observar, como esse, por exemplo.

O micélio começa a crescer nos pontos de inoculação. Essas áreas vão ficando mais densas e quando o crescimento é algodoado o micélio vai espalhando suas nunvens pelo bolo. No caso de crescimento rizormófico são as teias que se espalham. Na foto em questão a coisa tá uniforme demais pra ser micélio, parece que tudo está crescendo no mesmo ritmo. Repare nas fotos de outros cultivos que vc vai ver a diferença na densidade de algumas áreas do micélio.