Teonanacatl.org

Aqui discutimos micologia amadora e enteogenia.

Cadastre-se para virar um membro da comunidade! Após seu cadastro, você poderá participar deste site adicionando seus próprios tópicos e postagens.

  • Por favor, leia com atenção as Regras e o Termo de Responsabilidade do Fórum. Ambos lhe ajudarão a entender o que esperamos em termos de conduta no Fórum e também o posicionamento legal do mesmo.

Tutorial Atualização PF Tek 2020 - Inoculação

ExPoro

Enteogenista Apaixonado pela Vida
Cultivador confiável
14/04/2015
3,699
1
64
Essa é uma etapa da atualização da PF Tek em diversos tópicos-tutoriais que visam a formar um único guia completo atualizado da PF Tek até o ano de 2020 com base nas evoluções das técnicas de cultivo em nosso fórum. Ao fim, será gerado um arquivo .pdf para ser baixado na Biblioteca.

Esse é o segundo tópico. O primeiro trata da confecção do substrato, e pode ser acessado aqui :teo_apontar_direita: Atualização PF Tek 2020 - Substrato.


Guia 2020 de PF Tek - PARTE II
HORA DE FURAR - Inoculação do Substrato
*assepcia necessária

Inoculação significa aqui pra gente inserir esporos ou micélio em um substrato nutritivo para que se desenvolva. Nosso guia usará uma seringa de esporos.

Bem, passadas pelo menos 6 horas desde que a PP foi desligada, o copo dentro dela já estará em temperatura segura para inocular sem matar os esporos.

1 - LOCAL DE TRABALHO E MATERIAL USADO

Tudo será feito na tampa da boca do forno do fogão (se não falar tampa podem achar que é dentro do forno). Você pode fazer em qualquer outro método de ambiente controlado, como dentro de um banheiro espargido com desinfetante um tempo antes, ou dentro de uma glovebox improvisada, ou como desejar. Mas no nosso tutorial faremos todas as etapas assépticas nessa modalidade de capela de fluxo laminar caseira.

O forno deve ser ligado alguns minutos antes pra preaquecer e começar a funcionar o fluxo laminar de ar. Será desligado apenas após terminar de tapar os furos de inoculação com micropore.

IMG_1147.jpg :apontar: vejam os micropores voando com o fluxo constante de ar que torna a tampa da boca do fogão apta aos trabalhos em assepsia pois não permite que esporos ou bactérias pousem.

Sobre o material usado:
IMG_1146.jpg :apontar: ao lado a disposição de tudo que será usado para a inoculação:
  1. máscara cirúrgica,
  2. touca cirúrgica,
  3. luva de procedimento,
  4. seringa + agulha,
  5. micropore,
  6. papel toalha (não está na foto).

E claro, os copos com os substratos dentro da PP, que serão retirados e postos sobre a tampa do forno ligado.

Um detalhe que vai ajudar na inoculação:
IMG_1155.jpg :apontar: opcional - se quiser, compre avulsas essas agulhas de base cor rosa, que são as mais longas e grossas, e irão facilitar 1000% sua inoculação em comparação à agulha padrão (preta) que vem com as seringas. No entanto, a agulha padrão (base preta) funciona 100%.
edit: retirado do guia para simplificação

2 - RETIRADA DOS BOLOS

Os bolos estão dentro da PP, e lá dentro eles estão isolados do mundo externo, sem chance de contaminantes - a menos que a válvula da tampa da PP esteja ruim. Por isso, você pode inocular os substratos quando quiser, não tem pressa. Pode demorar uma semana ou um mês entre a PP e a inoculação, sem problemas, se você quiser, pois como está bem esterilizado, os substratos vão ficar lá, sem se decomporem, esperando a inoculação.

Mas na hora de abrir a PP pode haver sucção de contaminantes depositados sobre a PP pra cima dos copos lacrados. Isso pode ser reduzido de duas formas:
IMG_1143.jpg :apontar: deixe um pano limpo sobre a PP após desligar o fogo até a hora que for abrir. Aí é só tirar o pano de cima e ir abrir a PP em cima do apoio do forno.
ou...
IMG_1144.jpg :apontar: use um produto de limpeza para desinfetar a parte externa superior da PP ou ela toda. Se quiser, faça isso mesmo se usar o pano recomendado acima.
edit: procedimento desnecessário de constar no guia, pois o copo já é retirado lacrado. Seria uma etapa caso o guia furasse os lacres antes da PP.

:!: A partir de agora é fundamental passar a usar a luva, a máscara e a touca.

Pronto, então...
IMG_1150.jpg :apontar: abra a PP na área de trabalho. No nosso caso, na tampa da boca do forno do fogão...
IMG_1151.jpg :apontar: ... retire os copos e os deposite sobre a área de trabalho...
IMG_1152.jpg :apontar: ... e então seque bem a água sobre o lacre de alumínio usando papel toalha para que depois de inoculado a umidade não prejudique de colar os micropores.

Pronto, temos sobre a área de trabalho os copos (que saíram já lacrados da PP, então essa etapa não existe mais, de lacragem pré-inoculação) e a seringa.

3 - A HORA DE INOCULAR
A hora sexy. Agora vamos injetar os esporos da seringa no copo, furando o lacre, passando a camada de vermiculita e liberando o líquido com esporos no substrato.

Mas antes, precisamos lidar com a seringa, para que ela não leve contaminação para dentro do copo através da agulha. E para tanto, dois métodos são os usados:
  1. Desinfecção da agulha com produto desinfectante por meio de pano ou guardanapo que é então esfregado; e/ou
  2. Flambagem da agulha em fogo até que fique vermelha.
O método adotado aqui será o de flambagem. Por quê? Porque estamos num fogão! Observem:
IMG_1158.jpg :apontar: não preciso nem levantar do chão na área de trabalho pra levar a agulha até a boca simples do fogão e flambá-la. No tempo até trazer ela de volta na área de trabalho não há condição de contaminação. E então é só dar uns tapinhas no bumbum da seringa pra ela espirrar uns vapores e jatinhos que vão resfriar a agulha e então permitir a inoculação.

Esse processo pode ser repetido a cada copo, ou apenas uma vez no começo das inoculações.

Pronto, finalmente leve sua seringa para os copos e inocule:
IMG_1161.jpg :apontar: apenas um exemplo visual.

Sobre o ato de inocular em si, você pode fazer 1, 2, 3, 4 furos. Quantos quiser! É comum ver as pessoas fazerem 2 ou 4, mas se quiser, também pode só fazer um furo no centro do copo e inocular ali:
IMG_1165.jpg :apontar: à esquerda, um furo central de inoculação. No meio, dois furos em lados opostos. Na direita, quatro furos em cruz. Apenas para saberem que tanto faz. A vantagem de inocular no meio é que coloniza tão rápido quanto, você pode gastar menos seringa ainda, e quando coloniza 100% o bolo está consolidado com certeza. A desvantagem é que não se pode verificar se há contaminantes na seringa pois a inoculação se dá no interior do copo e não nas extremidades, o que faz demorar a aparecer contaminantes e tira a chance de verificar se veio da seringa (hipótese em que todos os pontos de inoculação em todos os copos estarão contaminados, em regra).

Bem, terminado de tudo ser inoculado, pode retirar a luva, pra ajudar a manipular o micropore. Pegue um a um os copos inoculados e...
IMG_1164.jpg :apontar: tape então os furos de inoculação com os micropores. Esses locais serão o respiro para o desenvolvimento do micélio. Evite bolsões de ar no micropore que possam abrir caminho livre para entrada de contaminações. Procure deixar o micropore todo bem colado ou vede bem o que não der pra ficar bem coladinho.

4 - HORA DE INCUBAR
É isso aí. Agora pegue uma caneta ou marcador e use o micropore para escrever nele a strain e a data da inoculação. E aí é só colocar na incubadora, se tiver uma. Senão, pode botar numa caixa de sapato. Ou em qualquer lugar que idealmente deve estar entre 26 a 29 °C, mas que na prática pode transitar entre 23 e 33 °C sem grandes prejuízos.

A incubação em si é um momento muito simples. Mesmo. Você pode incubar o Cubensis na sua mochila enquanto viaja pelo Brasil: os copos lá dentro, colonizando na sua mochila.

Não se preocupe com essa etapa se tiver que dar prioridade de gastos a alguma coisa. Repito: em qualquer lugar, coloque os copos inoculados e os cubensis vão se desenvolver. Tente um lugar dentro da temperatura recomendada para que vá mais rápido. Senão, a colonização vai mais devagar um pouco, apenas isso, nenhum prejuízo.

:!: Não precisa ser no escuro. Pode ser no claro. A luminosidade não influi na pinagem até que o substrato esteja todo colonizado. Isso é informação defasada de 2 décadas atrás. Luminosidade é irrelevante na colonização.

Lembre-se também que os copos estão lacrados, então não precisa de paranoia de não mexer. Pode ir lá meter a cara todo dia pra ver se eclodiu ou não, o quanto cresceu, etc. Só faça com cuidado pra não romper os lacres e procure que o ambiente de colonização seja o menos sujo possível pra também não dar mole pras falhas dos lacres.

Inclusive, observação constante dos bolos colonizantes é bom para identificar cedo um contaminante.

A frase de que devemos desenvolver a paciência nos cultivos permanece válida - mas a de que não devemos ir ver como está a colonização já não faz mais sentido.

------------------

E é essa a ideia dessa etapa do tutorial, que trata da inoculação. Espero que gostem e que as discussões por ventura aqui começadas me ajudem a melhor elaborar o futuro tutorial em pdf.

Até a próxima parte.
 
Última edição:
nesta idéia de fazer a inoculação no forno então poderia ser na minha cozinha sendo ela aberta ???

Se não bater um vento forte a ponto de atrapalhar o fluxo de ar quente, não tem problema. Mas haverá um risco maior de contaminação do que se fosse uma cozinha fechada. Contudo, não o suficiente para inviabilizar como área de trabalho pra procedimento que necessita de assepsia.

Mas... sei lá, pensando aqui... tenta manter sua área de trabalho no banheiro mesmo, pra não bater um ventão bizarro na sua cozinha aberta, o que pode até jogar os itens de cultivo no chão... Mesmo as paredes sem acabamento, em área fechada, após esterilizar, sem vento, não vai aumentar as chances de contaminação em muita coisa.

Quanto de limpeza eu vou precisar? pois na cozinha a muita sujeira de comida da pra limpar muito bem mas é difícil ficar perfeito sabe

Basta estar limpa, e não estar imunda. Em tese, o forno do fogão iria isolar as sujeiras. Mas quanto mais limpo o ambiente, melhor.

Passou uma vassoura e um pano no chão, vai com fé. Gordura não vai influir. Mas se tiver comida mofada em algum canto, pode ser ruim pras suas chances de não contaminar.

Eu só evito fazer se estiver aquela poeirada pela casa nos dias antes de vir a faxineira. Ou se tiver obra.
 
Última edição:
Nossa que interessante muito obrigado! Na verdade considerei minha cozinha como aberta pois não tem portas para os corredores, mas a última coisa que bateria aqui e um ventao louco kkkk.
Me preocupo mais com a lixeira e a pia que ficam próximo do forno e frequentemente e uma área um tanto suja mas nada quis uma limpada n resolva na vdd acredito. E possível que eu tente mas vou no banheiro por enquanto.
 
Estou com uma dúvida quanto à essa questão, as tardes aqui na minha cidade estão batendo 35 a 38 graus, durante umas duas horas, isso prejudica no processo?
🤔

É, tudo que não for num clima ameno não é ideal pra cultivo. Tendem a crescer menos e menores frutos.

Tente um local fresco e com bom vento dentro da sua casa pro terrário, como janelas ou corredores.
 
Muito bom cara... Tava precisando reler um tópico desses... Tenho perdido meus cultivos direto pelas contaminações, trichoderma possivelmente, os copos chegam a colonizar 50% mas acaba contaminando.. Tenho feito o procedimento numa glove box caseira e ainda acendo uma vela dentro (!!!) mas mesmo assim tá difícil a coisa.. Já perdi perdi inúmeros copos (+de 30 :( / troquei panela de pressão, já fiz de tudo e ainda sim minha taxa de sucesso tá baixa... Minha primeira inoculação teve 100% de sucesso mas as seguintes não foi no mesmo pique.

Fico imensamente grato por qualquer ajuda!
 
@ExPoro, haha!

Uma pergunta, eu adquiri na internet uma solução de esporos, 30 ml em uma ampola. Na minha região só encontro seringas de 8 ml, o ideal para realizar a incubação seria utilizar 4 seringas novas diferentes, ou pode-se utilizar apenas 1 seringa, inculando e voltando a sugar da ampola depois de esterilizar com alcool e fogo?
Acho que tem um tempo de deixar os esporos para hidratar dentro da seringa, na geladeira. Correto?

Galera, uso ventilador no quarto. É de boa deixar os bolos lacrados aqui dentro? Eles não ficarão na direção do ventilador, mas minha dúvida é pela circulação de ar constante...
 
e a feitura da seringa? senti falta dessa parte...
Logo no início do tutorial tem um link:
 
Não sei dizer.



Pera eu tava no celular e não li direito!

Se inoculou jamais sugue de volta. Isso trará contaminantes para a seringa.

Quando vendem seringas, vendem seringas, não apenas ampolas. Então você não precisa se preocupar com isso.
Fala Exporo! Muito foda seu conteúdo, ajuda giganteee!

Isso eu não imaginei.. então, caso eu precise encher a seringa mais de uma vez para inocular os bolos (seringa de 10ml mas vou precisar de 15ml por exemplo), mesmo que eu flambe a agulha no fogo antes de encher a segunda vez (até a metade na verdade rs), isso pode resultar em contaminação da mistura água destilada + esporo? e acabar contaminando os bolos restantes.. se puder esclarecer se é isso mesmo, agradeço a ajuda, abraço!
 
Fala Exporo! Muito foda seu conteúdo, ajuda giganteee!

Isso eu não imaginei.. então, caso eu precise encher a seringa mais de uma vez para inocular os bolos (seringa de 10ml mas vou precisar de 15ml por exemplo), mesmo que eu flambe a agulha no fogo antes de encher a segunda vez (até a metade na verdade rs), isso pode resultar em contaminação da mistura água destilada + esporo? e acabar contaminando os bolos restantes.. se puder esclarecer se é isso mesmo, agradeço a ajuda, abraço!

Não entendi muito bem o procedimento proposto, caro @Cogex.

Seringas, uma vez usadas, só devem ser reutilizadas após esterilizadas. E o conteúdo inoculado em um copo não pode ser puxado de volta.

De toda forma, fazer seringa fora de uma das teks com assepcia resultará em contaminação.
 
Não entendi muito bem o procedimento proposto, caro @Cogex.

Seringas, uma vez usadas, só devem ser reutilizadas após esterilizadas. E o conteúdo inoculado em um copo não pode ser puxado de volta.

De toda forma, fazer seringa fora de uma das teks com assepcia resultará em contaminação.
Opa @ExPoro !

Vou tentar explicar de outra forma. Imagina que eu tenho um pequeno pote, e coloco nele minha água destilada já esterilizada misturada com os esporos de um carimbo. Eu tenho vários potes para inocular, e vou usar uma seringa de 5 ml. Na hora que eu percebo, vejo que uma seringa cheia de 5 ml não será suficiente para inocular todos os potes estéreis. Então, eu pego e encho a seringa novamente com a mistura de água destilada estéril + esporos, e uso ela para inocular os demais potes. Ai, vendo a sua resposta para alguma das perguntas aqui neste tópico, eu entendi que eu não poderia encher a seringa novamente utilizando essa mesma solução de água esterilizada + esporos para terminar meus potes. Entende?


Valeu demais!!!
 
Cara, muito muito bom.

Legal que concorda comigo que as mandigas afastam quem é iniciante.

Pessoalmente acho que a touca, a luva e a máscara estão na lista das mandigas.

Não existe grandes medos de banho tomado, mãozinha esfregada, sem sintomas de doenças respiratórias e cabelos fora da fase de queda kkkkkkkkkkkk.

Mas é claro, é um baita cuidado fácil de se tomar que te dá alguma garantia.

Acrescentaria no outro tópico o uso de potes de PP5 descartáveis. Hoje em dia com essa mania de bolos de pote se encontra em todo lugar. Muito fácil de achar em lojas de descartáveis, próprios para microondas e livres de starters que podem ser prejudiciais.
Fiz hj com pote de pp5 morrendo de medo de derreter e a panela explodir na minha cara mais da certo
 
Depois de quanto tempo incubado eu posso usar?
Como assim? Da incubação tem que esperar o miscelio correr por todo substrato e depôs esperar mais alguns dias pra garantir que ele correu em lugar que não dá pra ver.
Depois desse passo é dar um cold shok e levar pro terrário umidade 95 a 100% depois de 7 a 15 ele aparecem, Ai é só colher .
Os meus da incubação a colheita foi com 29 dias. 11 potes depende muito da temperatura de incubação e do terrário é o que vai determinar se vai se mais rápido ou não, o tipo de substrato tbm ajuda.
 
Depois de quanto tempo incubado eu posso usar?
E isso que o @Ochiha disse.

Incubação é colonização. Colonização é crescimento do micélio.

Após o crescimento do micélio em que ele domina todo o substrato nutritivo, ele é então aniversariado e posto pra frutificar.

Na frutificação que se obtém os frutos santos, que podem ser consumidos imediatamente desde que são colhidos.
 
Qual seria a temperatura ideal do forno para se realizar este processo? Senti falta dessa informação.
O mais quente possível, ou o suficiente pra você sentir que formou um fluxo constante de ar quente saindo do forno.

Não se trata aqui que o calor do forno irá esterelizar alguma coisa. O calor só serve pra fazer um fluxo de ar que irá tornar a tampa do fogão suficientemente isolada das impurezas do ar que poderiam cair sobre o que você estiver fazendo. Então não há precisão na temperatura do forno, só precisa estar quente o suficiente pra criar essr fluxo constante de ar.

Se tiver dúvida... Cola na parte superior da boca aberta do forno as fitas micropores que irá usar pra fechar os furos após inocular. Quando elas começarem a balançar com o fluxo de ar quente, então já pode começar a trabalhar sobre a tampa.
 
Quantos ml da cultura liquida é suficiente?
Olá, nobre @peddrofe. Acho que você quis dizer "seringa"? Esse guia usa seringa ME, e não CL.

Por furo, 0,5 ml tá bom. Mas não exija muita precisão nas primeiras vezes. Vai entre 0,5 ml e 1 ml por furo que fica excelente já. :)
 
Back
Top