Tutorial Cultura Líquida

Um pouco mais do mesmo, para contribuir:

Introdução​

Uma das questões para se usar uma cultura líquida é a economia. Uma seringa de esporos de 10 ml, por exemplo, vai inocular de 8 a 10 potes. Se você usar 01 ml de uma seringa de esporos para criar 300 ml de cultura líquida (CL), você vai poder inocular em média de 200 copos.

Outro ponto das culturas líquidas é a praticidade. Por exemplo, fiz uns 10 copos de substrato, agora basta eu pegar com uma seringa um pouco de micélio vivo e sair inoculando, o desenvolvimento do micélio vai ser muito mais rápido.

Posso observar contaminantes.

O que usar?​

Qualquer açúcar, numa proporção certa, deve funcionar. Então desde o açúcar branco da sua mesa à dextrose de lojas especializadas, passando pelo mel, Karo, glicose, glucose, etc.

Eu pessoalmente, prefiro dextrose. Por quê? Porque no final da minha solução terei uma água transparente, sendo possível identificar bem o micélio. Ao contrário do Karo, mel ou outro xarope que vai deixar minha solução com cor de mel, o que dificulta um pouco a visualização.

Quantidades / Proporções / Métodos​

Conforme observei em vários cultivos, uma medida base é 4% de açúcar por 100 ml de água. Isso seria uma máxima. Posso colocar menos açúcar que funciona. Não acrescente açúcar em demasia acreditando que irá apressar o processo, não irá, só irá retardar o crescimento ou até estagnar.

Estou usando essas medidas em minhas CLs e tendo bons resultados:

• 250 ml de água mineral fervida para:
• 2 g de dextrose.

Antes esterilizo os copos e colheres que irei usar por 10 min:


É sempre bom ter uma balança digital, vai ter precisão nas medidas:


A dextrose se dissolve muito bem em água quente:


Acrescento água mineral fervida:


Misture bem:


Tampe o seu recipiente enquanto continua organizando os trabalhos:


Recortei as tampas em alumínio:


Passo álcool em todas elas:


Copos esterilizados e com as tampas já prontas:


Destampe o recipiente:


E vá preenchendo os copos. Importante: Preencha somente 1/3 dos copos com o líquido,
pois é necessário bastante oxigênio dentro dos copos para um crescimento saudável do
micélio:


Há uma escola que usa pedaços de vidro no fundo dos copos (para melhor quebrar o micélio quando for puxar com a seringa). Mas esse procedimento não é necessário.


Panela de pressão neles por 15 a 20 min, em fogo alto. Coloque um paninho embaixo dos vidros para não baterem ou caírem. Não fiz furos nas tampas de alumínio, apenas apertei com as mãos:

Agora espere esfriar completamente para proceder com os esporos, pois água quente irá matá-los. Agite violentamente os copos, por 1 minuto. Isso irá trazer oxigênio de volta a água. A panela de pressão tira a maior parte do oxigênio da água. É por isso que é deixado o espaço dentro do copo, para ter oxigênio suficiente para o bom desenvolvimento da cultura.

Trabalhe dentro de uma glovebox, preferencialmente:

Para eu colocar esporos dentro dos copos, eu me utilize do método de raspagem, existem outros métodos. Trabalho com um bisturi e lâminas cirúrgicas esterilizados:

Feche os copos com fita isolante ou durex. Na tampa, marque a strain usada e a data do procedimento. Coloque-os em uma incubadora com temperatura controlada, de preferência com termostato. Temperatura ideal é de máxima 28 °C:


Uma vez por dia, se quiser acelerar o crescimento do micélio, agite cuidadosamente e devagar as culturas (formando um redemoinho). Deve observar o crescimento entre 3 a 7 dias. Começa com "pequenas nuvens de algodão".

É difícil dizer com certeza se uma cultura líquida está ou não contaminada. Mas dá pra se basear em teorias. Por exemplo: Essa cultura tem 99% de chances de ser saudável: O micélio é vigoroso, o restante da água é transparente.


Agora observe como essa cultura está com a "água esbranquiçada" e o micélio disperso, onde não se formou uniforme como na foto acima. Eu não usaria essa cultura, é arriscado.


Mais um bom exemplo de micélio ideal:


Aqui tirei a foto no momento em que o micélio foi "quebrado" pelo vidro que deixei no fundo:
Notem mesmo assim a boa consistência do micélio:


Mais um exemplo:


Notem esse micélio estranho, (água totalmente branca) bem provável que esteja contaminado, muito diferente dos outros potes:


Inoculei esse micélio da foto de cima, nesses 2 copos (para testes) resultado: cobweb:


Cobweb:


Resultado de outra cultura líquida duvidosa:


Então, o certo mesmo é somente usar CL´s com uma ótima aparência.
Cores diferentes dentro do copo, é contaminante: cinza, preto, rosa, etc.
Ou texturas diferentes, como na foto abaixo, é perda de tempo e produção.


Micélio se formando, 5 dias depois da inoculação:


Outras medidas:

• 250 ml água mineral para:
• 1 colher de sopa de Karo

? Inoculando CL´s em substratos

Para se trabalhar com micélio proveniente de CL´s usa-se preferencialmente agulhas de seringas com diâmetro maior, evitando assim entupir a agulha. Porque a agulha padrão é muito estreita.

? Observação

Uma CL pronta, já com micélio bem desenvolvido (2 semanas) pode ser guardada em geladeira (não freezer) por no máximo 7 meses. O ideal é 3 meses.

---------------------------------------------------

Técnicas de outros membros: