Hmm, acho que minha dúvida foi esclarecida, valeu ecuador!
Eu não tinha certeza de que fase da vida podia ser feita a cultura. Onde eu achei, tinham duas fase, que acredito serem do mesmo fungo: uma esbranquiçada (acredito ser honeydew, mas não tenho certeza nenhuma, visto que as fotos são escassas, até para o C. purpurea, quanto mais para o C. paspali), e outra preta, que acho que é a fase esclerotia. Achei isso no artigo que vc postou:
"A
strain of C. purpurea, designated
strain 17/3, which was first isolated from a sclerotium
on AZopecurus myosuroides in 1960 and had since been used in several studies (Corbett et ab.,
1974; Mantle & Nisbet, 1976)".
Então vou realizar os isolamentos a partir do
micélio preto, apesar de ter achado bem mais do branco. Se soubrar placas de petri, tempo e dinheiro, faço do branco tb, talvez funcione, pq pelo que me lembro do ensino médio, no geral, as células dos fungos não são diferenciadas.
Também acabei de achar isso, retirado do livro "Ergot", de Zdenek Malinka, página 322:
"Saprophytic cultures can easily be obtained from sclerotia of the appropriate
species of Claviceps. After pre-soaking with ethanol or propanol, the sclerotium
surface is sterilized by a suitable agent—resorcinol, mercury dichloride or Lugol
solution (Desai et al., 1982b; Mantle, 1969; Strnadová et al., 1986). After
washing under sterile conditions, the plectenchymatic tissue of the sclerotium
is cut and the slices are transferred on the surface of an
agar growth medium."
Acho que o procedimento que vou adotar vai ser esse:
Preparo a glove box esterilizada com
água sanitária (hipoclorito de sódio), com bisturis, um isqueiro, as esclerotias, placas de petri já preparadas e esterilizadas,
álcool 70%, e tintura de iodo, encontrado em farmácias, que acredito ser a tal solução de Lugol. Feito isso, mergulho as esclerotias por uns 5 segundos no álcool 70%, e em seguida mais uns 5 segundos no iodo. Fatio a esclerotia em cima de uma lámina de vidro esterilizada com álcool, e com uma pinça, coloco cada pedaço nas placas de petri com BDA.
Sobre a temperatura de
incubação, tinha visto que era em torno de 26º C, mas acredito que eu não precise muito controle na temperatura, já que a velocidade não é problema e nem sei o que vou fazer com isso depois kkkkkkk E alguém sabe se as partes pretas são realmente as esclerotias? E quantas placas de petri vcs me recomendam comprar?