Preparação da solução com os esporos.
Para hidratar os esporos usei água mineral fervida num vidrinho fechado na panela de pressão por meia hora. Deixei esfriar e utilizei seringa de 10ml esterilizada, agulha esterilizada, luvas, máscara e ambiente sem vento todo limpo com álcool.
Utilizei a metade do carimbo e deixei hidratar na geladeira por três dias (na seringa fechada com a agulha e tampa da agulha).
Erros: Não mexi na seringa por este período o que fez com que os esporos colassem no interior da seringa.
Preparo do milho de pipoca (substrato para a solução inoculada)
1º dia - Numa panela de pressão fechada fervi por 10 minutos 500gr de milho e um litro de água. Deixei esfriar por 24hs.
2º dia – Aqueci até ferver e deixei repousar mais 24hs.
3º dia – Aqueci até ferver, desliguei, deixei esfriar, passei para escorredor, cobri com um prato e deixei na geladeira por 24hs para secar o milho.
Esterilização total
Espalhei o milho sobre uma toalha limpa e sequei bem.
Distribuí em dois vidros de 500ml, cobri com duas folhas de papel alumínio com pequeno furo no meio, que apertei bem junto ao vidro e mais uma terceira sem furo e com uma borda levemente levantada (saída da pressão nos vidros).
Inoculação do milho.
Cobri parte de uma mesa com um vidro que desinfetei co m álcool, sempre usando máscara. Usei um local sem corrente de ar, deixei a panela aberta fora da área desinfetada, pois esta usei somente para utilizar com o manejo esterilizado. Abri o papel alumínio da seringa com as mãos desinfetadas com álcool, troquei a agulha por uma nova esterilizada. Calcei as luvas, retirei os vidros da panela e coloquei sobre a mesa, abri a primeira tampa de papel de alumínio, bati levemente na seringa para soltar os esporos e injetei em vários furos 5ml de solução no primeiro, e 5ml de solução no segundo vidro.
Fechei com a terceira folha de alumínio, passei fita crepe em torno, apertando bem.
Coloquei na panela de pressão com água até a metade dos vidros, deixei ferver por 90 minutos em fogo baixo, desliguei e deixei esfriar completamente.
Erros – 1º deveria ter injetado somente 2ml de solução. Ficou muito molhado.
- 2º Como não mexi na seringa os esporos não se soltaram da parede interna, tanto que o primeiro vidro apesar dos 5ml de solução ficou sem ser colonizado. Somente o segundo vidro recebeu os esporos, mesmo assim acredito que a maior parte deve ter ficado colada no êmbolo e dentro da agulha.
Incubação.
A temperatura ambiente aqui é de 28º a noite e chega a 31º durante o dia. Eu guardei os vidros naturalmente dentro de uma caixa num quarto fechado sem mexer na temperatura ambiente.
Resultado: O 1º vidro não deu sinal de vida em 15 dias, apenas suou muito nos primeiros dias depois normalizou mas nada brotou.
O 2º vidro demorou 8 dias para dar sinal de vida e agora no 15º apresenta 50% de colonização.
Não sei se espero mais...
Pretendo fazer o cultivo em terrario, numa estufa controlada, com substrato bulk, vermiculite e farinha de conchas do mar.
Para hidratar os esporos usei água mineral fervida num vidrinho fechado na panela de pressão por meia hora. Deixei esfriar e utilizei seringa de 10ml esterilizada, agulha esterilizada, luvas, máscara e ambiente sem vento todo limpo com álcool.
Utilizei a metade do carimbo e deixei hidratar na geladeira por três dias (na seringa fechada com a agulha e tampa da agulha).
Erros: Não mexi na seringa por este período o que fez com que os esporos colassem no interior da seringa.
Preparo do milho de pipoca (substrato para a solução inoculada)
1º dia - Numa panela de pressão fechada fervi por 10 minutos 500gr de milho e um litro de água. Deixei esfriar por 24hs.
2º dia – Aqueci até ferver e deixei repousar mais 24hs.
3º dia – Aqueci até ferver, desliguei, deixei esfriar, passei para escorredor, cobri com um prato e deixei na geladeira por 24hs para secar o milho.
Esterilização total
Espalhei o milho sobre uma toalha limpa e sequei bem.
Distribuí em dois vidros de 500ml, cobri com duas folhas de papel alumínio com pequeno furo no meio, que apertei bem junto ao vidro e mais uma terceira sem furo e com uma borda levemente levantada (saída da pressão nos vidros).
Inoculação do milho.
Cobri parte de uma mesa com um vidro que desinfetei co m álcool, sempre usando máscara. Usei um local sem corrente de ar, deixei a panela aberta fora da área desinfetada, pois esta usei somente para utilizar com o manejo esterilizado. Abri o papel alumínio da seringa com as mãos desinfetadas com álcool, troquei a agulha por uma nova esterilizada. Calcei as luvas, retirei os vidros da panela e coloquei sobre a mesa, abri a primeira tampa de papel de alumínio, bati levemente na seringa para soltar os esporos e injetei em vários furos 5ml de solução no primeiro, e 5ml de solução no segundo vidro.
Fechei com a terceira folha de alumínio, passei fita crepe em torno, apertando bem.
Coloquei na panela de pressão com água até a metade dos vidros, deixei ferver por 90 minutos em fogo baixo, desliguei e deixei esfriar completamente.
Erros – 1º deveria ter injetado somente 2ml de solução. Ficou muito molhado.
- 2º Como não mexi na seringa os esporos não se soltaram da parede interna, tanto que o primeiro vidro apesar dos 5ml de solução ficou sem ser colonizado. Somente o segundo vidro recebeu os esporos, mesmo assim acredito que a maior parte deve ter ficado colada no êmbolo e dentro da agulha.
Incubação.
A temperatura ambiente aqui é de 28º a noite e chega a 31º durante o dia. Eu guardei os vidros naturalmente dentro de uma caixa num quarto fechado sem mexer na temperatura ambiente.
Resultado: O 1º vidro não deu sinal de vida em 15 dias, apenas suou muito nos primeiros dias depois normalizou mas nada brotou.
O 2º vidro demorou 8 dias para dar sinal de vida e agora no 15º apresenta 50% de colonização.
Não sei se espero mais...
Pretendo fazer o cultivo em terrario, numa estufa controlada, com substrato bulk, vermiculite e farinha de conchas do mar.
