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Problemático 3ª tentativa de cultivo

Diário de cultivo problemático.
Bom dia, boa tarde boa noite :)
Esse é minha primeira participação aqui no forum, então vocês ainda não me conhecem, mas acompanho as publicações a um bom tempo.. Prazer, chamo-me Man, tenho 23 anos e sou licenciada em Ciências biológicas. Estou realizando um projeto pessoal que consiste na formulação de um trabalho científico sobre o Psilocybe cubensis. Estou trabalhando na parte escrita do trabalho assim como na parte prática que é o cultivo basico e caseiro (PF Tek) em pequena escala do cogumelo, sendo que nessa parte estou apanhando um pouco rs
Sim é minha 3ª tentativa.
Na primeira segui bastante as dicas contidas nos vídeos do canal "Esporos no ar". Estando tudo bem limpinho primeiramente preparei o substrato, esterilizei os copos lacrados usando a panela de pressão (sem tirar o ar dela), no dia seguinte realizei a inoculação sem glove box, no banheiro sem ventilação, e tudo devidamente limpo. Não deixei os esporos hidratarem na geladeira, os mesmos foram hidratados durante processo em água destilada comprada em farmácia de manipulação, misturados com uma seringa e inoculados. Foram mantidos em incubadora de isopor em temperatura de 28ºC. Não os abri para respirarem. Depois de um mês mais ou menos um dos cinco bolos aniversariou, 3 contaminaram e 1 permaneceu na incubadora (era um copo grande) pois não estava totalmente colonizado e posteriormente também contaminou. O bolo que aniversariou dentro de alguns dias começou a exalar um cheiro muito ruim (eu abria o terrário (daqueles simples feitos com caixa organizadora e argila expandida no fundo, uso de borbulhador de aquário) para colocar aqueles gelos encapados a fim de manter a temperatura a 24ºC). O bolo começou a escurecer assim concluí que também foi contaminado. Fiquei bem chateada pois tomei muito cuidado em todo processo. Acreditei que a contaminação do ultimo bolo foi causada por um fungo presente no meu quarto atrás da parede do banheiro que eu não havia visto. Me entusiasmei, estudei mais, li muitas dicas no forum e iniciei minha 2ª tentativa.
Limpei todo material com álcool 70 e deixei ferver por 10 minutos (desisti dos copos grandes). Fiquei realmente noiada com a limpeza, usando alcool e lysoforme em spray. Os métodos de produção do substrato e de esterelização na pressão foram os mesmos usados na primeira tentativa ( me arrependi de lacrar os bolos nesse momento mas ja era tarde rs). Sairam da panela já no local de inoculação (novamente o banheiro limpo) e dessa vez única diferença foi que usei aquela água de copinho ao invés da comprada na farmácia. Inoculei 4 copos. 16 dias depois abri a incubadora pela primeira vez, visando abrir os lacres de alumínio para troca gasosa. Um dos bolos estava contaminado :'( e nos outros 3 não havia sinal de qualquer colonização. Dessa vez minha garrafa de vidro onde ficava o termostato quebrou, então usei uma pet, mas a temperatura não chegou aos 28º, variou entre 24º a 26º (esta mais frio agora). Novamente tomei muito cuidado com a limpeza mesmo assim não obtive sucesso.
Nesse momento os 3 copos "vazios" estão ainda na incubadora, estou tentando acertar a temperatura da mesma e buscando desesperadamente respostas sobre o que está saindo errado rs. Antes de iniciar a terceira tentativa estou estudando sobre o uso correto do álcool 70, do lysoforme e da água sanitária (vou começar a usa-la para limpeza do local) e já decidi mudar algumas coisas:
*Vou esterelizar os bolos na pressão antes de serem lacrados.
*Vou preparar a seringa de esporos antes e deixa-las hidratando na geladeira por 7 dias (continuarei usando água mineral).
* Tanto na inoculação como no preparo da seringa irei usar a tampa do forno como bancada de trabalho (só não entendi ainda se deixo o forno ligado ou as bocas do fogão ligadas durante o processo rs).
Ufa, acho que falei tudo que queria rs
estou esperando por dicaas :D
Continuarei compartilhando com vocês minha experiência! Agradeço muito por todo conhecimento vindo da comunidade e espero poder difundi-lo também um dia!!!
 
Bem vinda !
Vc flambou a agulha da seringa entre as inoculações ? Eu uso um isqueiro maçarico e flambo a cada furo de cada pote !
Gooooood vibes aí pro cê !
 
Olá, seja bem vinda. Faremos o possível para ajudá-la no objetivo.

esterilizei os copos lacrados usando a panela de pressão (sem tirar o ar dela)

Primeira observação: não lacre os copos antes do processo de esterilização, pois isto dificulta que o vapor entre no copo e esterilize o substrato. Às vezes até funciona, mas de forma geral, é mais recomendável apenas colocar as tampas de alumínio de forma que sejam esterilizadas junto, mas ainda não lacradas. Só fui ler depois que você já está ciente disso, mas como já escrevi, tá aí.

3 contaminaram e 1 permaneceu na incubadora (era um copo grande) pois não estava totalmente colonizado e posteriormente também contaminou

Em casos assim, o descarte pode ser feito na rua, em algum local com sombra, e qualquer terra ou coisa por cima, de forma que ainda seja possível que o micélio gere alguns cogumelos, mesmo estando contaminados.

* Tanto na inoculação como no preparo da seringa irei usar a tampa do forno como bancada de trabalho (só não entendi ainda se deixo o forno ligado ou as bocas do fogão ligadas durante o processo rs).

A idéia da boca do forno é que o ar quente suba, mantendo assim a tampa do forno em si, esterilizada. Portanto, não há necessidade de nada referente às bocas do fogão em si.

Recomendações:

- Flambar a águlha entre inoculações para evitar contaminação cruzada. Pode utilizar uma vela pra isso, também.
- Utilização de glove box. É importante.
- Utilizar selo de vermiculita caso não esteja, e certificar que a agulha penetrou o selo e a água caiu no substrato, caso esteja.

Às vezes, mesmo fazendo tudo certo, os copos contaminam ou a maioria deles. Pode ser devido ao carimbo estar contaminado. De qualquer forma, recomendo que não desista. Nos meus primeiros cultivos, minha porcentagem de sucesso nos copos era menos de 50%. Eu costumava fazer de 8 em 8 copos por cultivo e menos da metade davam certo. Eu também fazia sem glovebox, num banheiro "limpo" (Banheiros nunca estão limpos).

Em último caso, recomendo que tente em outro ambiente. Se possível, em algum ambiente de laboratório, sei que é difícil ter acesso mas às vezes é possível. Ou, veja com algum amigo(a) algum local que seja bem limpo e sem corrente de ar, pois às vezes realmente há um foco de algum fungo no local específico e isto dificulta bastante.

Outra recomendação seria efetuar o procedimento sem roupas (juro que tem explicação) e logo após o banho (preferencialmente com sabonetes antissepticos, como protex), pois as roupas, cabelo, etc, estão sempre cheias de esporos, que são onipresentes. Eu fiz assim da primeira vez, além de ter usado quase o tubo inteiro de lysol no banheiro que tinha focos de fungo e mesmo assim tive algum sucesso.

O mais importante é não desistir. E ainda que dê tudo errado, não esqueça sobre o descarte. Ainda que seja feito em "guerrilha", faça em algum local público ou privado (caso viva em um condomínio por exemplo) de forma disfarçada e poderá conseguir colher ainda que seja alguns.

Boa sorte.
 
Última edição:
Bem vinda !
Vc flambou a agulha da seringa entre as inoculações ? Eu uso um isqueiro maçarico e flambo a cada furo de cada pote !
Gooooood vibes aí pro cê !

Obrigada !! ^^ flambei na segunda tentativa, mas a cada copo, não a cada furo.

Em casos assim, o descarte pode ser feito na rua, em algum local com sombra, e qualquer terra ou coisa por cima, de forma que ainda seja possível que o micélio gere alguns cogumelos, mesmo estando contaminados.

Gostei!!! Vou aderir com ctz! Esses meus bolos que não apresentaram nenhuma colonização, será que ainda podem ser usados para alguma coisa? Não vi nada por aqui sobre bolos inativos..

- Utilização de glove box. É importante.

Estou pensando sériamente em fazer uma, mas acho que nessa tentativa vou tentar usar o forno e ver o que acontece!

Obrigada pelas dicas !!!!! Vou preparar as seringas de esporos em breve e coloco noticias!!!
 
Bem vinda!!!

Sobre banheiros: qnd precisei usar banheiro, além de limpar mt bem piso e paredes, "isolei" o vaso sanitário colocando um saco de lixo em volta dele (com a tampa fechada, claro), e lasquei agua sanitaria em cima. Fiz a msm coisa com a pia. E coloquei fita adesiva pra "isolar" o ralo.
Funcionou bem. Mas se tem mofo na parede realmente fica dificil.

Só cuidado com o tanto de agua sanitaria no ar... ja exagerei um dia e fiquei com o olfato comprometido uns 2 dias ... é perigoso esse trem.

Tô torcendo pelo seu cultivo e pela sua pesquisa :)
 
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