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Problemático 2ª - GT • Cultivo de risco

Diário de cultivo problemático.
Falaí galera!!! Estou agora começando esse novo cultivo... porém agora é um cultivo arriscado... já já chego nesse ponto.

Técnicas: PF / Milho de pipoca / Yoki tek (Karo tek) (tudo com Amoxilina)

Começando a receita!!!:p:

Ingredientes:


4 Bolos PF:

- água mineral
- vermiculita (qse 2 copos)
- amoxilina
- farinha de arroz integral fina, não em pó! (1 copo)


2 Frascos de Milho de pipoca

- água de torneira (não recomendado! :( )
- água mineral
- milho de pipoca (2 metades dos frascos)
- amoxilina
- Yoki (glicose (genérico do Karo)) (2 colheres de chá)


1 Frasquinho de Yoki (cultivo em meio líquido)

- água mineral
- Yoki (1 colher raza de sopa)
- amoxilina



Preparo:

Água + amoxilina

Eu calculei a água mineral necessária q seria usada para todos os copos e frascos, então usei cerca de 1 copo pros bolos PF; 10ml para os frasco de milho; 40ml para o cultivo líquido. misturei cerca de 300mg de amoxilina em toda essa qtde de água... agora reservo para utiliza-lá


• Bolos PF

num recipiente misturei, respectivamente, a vermiculita e 1 de água+amoxilina. Só então misturo a farinha de arroz integral.

Pronto! Coloco nos copos e por ultimo adiciono o selo de vermiculita.
Tampei com um pedaço de papel aluminio e fechei com fita crepe. Reservo.



• Milho de pipoca

Peguei os frascos, adicionei milho dep ipoca até a metade de sua capacidade. Adicionei a água de torneira (coisa q eu num devia ter feito!!) até cerca de dois dedos acima do nível do milho e deixei hidratando por 24 horas.

Escorri toda a água, e lavei o milho. Num pequeno recipiente á parte misturei cerca de 10ml de água+amoxilina com o Yoki então misturei com o milho.

Tampei os frascos com papel alumínio e lacrei-os com fita crepe também. Reservei.



• Meio líquido com Yoki

Bem básico! rs! 40ml de água+amoxilina misturados com o Yoki. Tampei e lacrei com a fita crepe tbm. Reservei.



• Mandando tudo pra esterilização


Depois de tudo fechadinho e lacradinho, fiz dois furos por tampa pra permitir a livre entrada e saída de vapor (2 furos são suficientes) e coloquei os com 2 panelas de pressão com água em seu interior.

Fiz o esquema básico de esterilização:
Retirei o peso das tampas e deixei a panela em fogo alto. Qdo ocmeçasse a sair vpaos pela tampa, conta-se 5 minutos para que todo o ar existente dentro da panela saia e só fique vapor d'água. Só então coloca-se o pesinho de volta na tampa, mas com a ajuda de uma luva pra não se queimar né!
Abaixe o fogo da panela e ocmeçe a ocntagem do tempo de esterilização.

Deixei as panelas cerca de 1 hora a 1,20 hora esterilizando.

Deixei resfriar por 24 horas...



• Confecção da seringa

Esterilizei muito bem um benheirinho no fundo de casa... preparei tudo q precisaria: seringa, agulha, álcool etílico, lysol, panos limpos, guardanapo de papel, uma taça, sabonete protex, luvas, máscara, touca, soro fisiológico e o print.

Bem... foi simples
Me limpei ocm protex e dpeois massei um paninho embebido ocm álccol nos meus braços pra garantir assepsia, alem de colcoar as luvas, mascara e touca.

Espirrei no ar lysol em borrificador improvisado , passei um paninho ocm álccol em tudo

Dentro da taçinha de transferência do soro passei o guardanapo de papel embebido com álcool...

Tudo certo

Agora abro o print, raspo cerca de 1/6 do restante do print d GT pra dentro da taça com a agulha da seringa. Agora me enrolo na hora de chupar o soro do frasco com a seringa (a vaca da mulher me vendeu uma seringa fininha). Com pressa pra num cair ocntaminante na seringa, abri o potinho do soro e coloquei a olhometro uma quantidade X de soro.

Qdo vou puxar e empurrar o soro, misturand os esporos nele, pra minha sorte, a agulha voa dentro da taça.. mas ocmo eu tav de luva, e a luva tava limpa ocm álccol, eu enfiei a mão entro e jogeu a agulha longe :mad: ..hehe:eek: . PReparo outra agulha e qdo olho dentro da taça, o risco q eu havia falado: algumas formigas estavam boiando mortas... provavelmente provinientes do print q eu guardei no guardaroupa onde havia a minha ultima ucltura que foi invadida por formigas tbm.

Aí vem meu desespero.
Puxo toda o liquido e tampo a agulha.

Saí do banheirinho qse chorando de raiva!
Dentro de 24 horas eu teria q estar com uma seringa viável e já hidratada. Por isso postei na urgência isso ontem: https://teonanacatl.org/threads/formigas-no-print-help.428/#post-3568

Bem.. de qualquer forma. hj fui inocular...

• Inoculação

Essa pelo menos ocorreu tudo perfeito
Num vou dar detalhes. Apenas melhorei minha pratica na hora de retirar os ocpos das panelas e tampa-los com fita crepe e na hora de injetar os esporos hidratados fui super rápido e ágil.

Só um detalhe gostaria de Compartilhar com vcs:

O potinho de meio liquido foi o último a inocular e, eu ao inves de injetar esporos, eu puxei o liquido com a seringa, assim misturei o restinho de esporos q haviam na seringa, depois eu joguei metado do conteudo da seringa dentro do potinho, dei uma mexidinha, e puxei até encher a seringa. tampei a seringa e o furo do potinho. Agora tenho uma seringa q será colonizada e um potinho tbm!!!

Em breve, dou andamento ao desenvolvimento das culturas..

Abraços!:cool:
 
16 dias já é um bocado de tempo ....

Se você realmente constatou que são contaminações e que o micélio de cubensis nao apareceu em 16 dias creio que o mais correto seja descartar os bolos. Uma pequena contaminação com o micélio ativo e grande é uma coisa, o seu caso é bem mais complicado: se os esporos germinarem encontrarão um meio cheio de contaminações concorrentes fortes e já estabelecidas, tornando a vitória do micéio de cubensis utópica.

Paciencia, é errando que se chega até a perfeição .
 
Acabou!

hoje é o ultimo dia, chegando em casa vou jogar todos os copos fora... nanhum sinal aparente de P cubensis.

Na minha próxima tentativa vou fazer 4 copos como antigamente: PF + sementes de pássaros e 4 copos de PF com a receita do Sporeworks.


Valew gente pela força
Até o próximo cultivo.
 
Acabou!

E115, vc já sabe onde vc possa ter errado?

Eu tenho alguns palpites:

- Esporo contaminado (o caso das formigas)
- Uso de soro fisiológico (vou explicar minha suposição)
- Esterilização ineficaz

Se a esterilização foi bem sucedida e o local de inoculação estava bem limpo, adotamos o fato da contaminação estar na seringa de esporos.

O uso positivo do soro ainda não está bem definido. Vc usou soro nos dois cultivos que postou e não houve sinal de colonização nos dois, só de contaminação. No cultivo do psilocibec ele tb usou soro e a colonização demorou 19 dias pra começar! A viabilidade dos esporos usando soro existe, já que no cultivo dele germinou, mas podemos especular sobre uma demora na germinação devido a processos químicos que eu desconheço.

O que pode ter acontecido é o soro ter desacelerado o tempo de germinação. Os esporos devem estar contaminados por esse fungo e isso tb pode ter contribuído para a inibição da germinação.

Os endoesporos do contaminante tiveram o substrato todinho pra eles e fizeram a festa com tempo livre, acabando com as chances dos esporos de cubensis.
 
Então, na segunda tentativa desse mesmo cultivo eu num usei soro, usei água.

Neuro, axo q vo sair pra caçar cogus e estou pensandop em fazer um print ocm um chaéu selvagem, entaum kero isolar o micélio. Estou pedindo sua ajuda pra preparação do agar, que já comprei 5g e a placa de petri ainda vou comprar pq tá cara demais: 10reais.

Valew
 
Humm, então descarte a minha hipótese. :eek:

O lance do ágar é tranquilo, o problema é justamente contaminação. Os cuidados devem ser redobrados. Tá valendo até treinar seus movimentos antes de executar a atividade pra usar o mínimo de tempo possível.

Eu tinha começado a preparar um texto sobre uma técnica de purificação (de funcionalidade constatada) do micélio, vou ver se termino e posto logo.

R$10,00 uma placa? Tá muito caro, deve ser de vidro. Compre de polipropileno que tá saindo na faixa de R$0,70 a unidade. Compre no mínimo umas 20 pra vc trabalhar com uma probabilidade de contaminação menor.

[]'s
 
É a de vidro mesmo, pq qdo fui comprar na loja cirugica daki da cidade tinha uma placa de petri de plastico descartável, mas como eu num sabia que material era... acabei perguntando por outra de vidro.

Essa placa de petri seria de polipropileno? Eu peguei a embalagem e num tava escrito lá o material, nem o PP nem nada.

Vo ver se volto lá e peço o número do telefone do fabricante e pergunto. Valew ae Neuro;)
 
Voltando!!!

Vcs se lembram q eu havia dito q eu ia jogar todos os copos fora? pois bem, acabei jogando só uns 4, o resto eu eskeci!

Ai esses dias eu me lembrei e fui ver, olhem o resultado do frasco de milho:

(imagem em anexo, notem q parece ser o lipstick mold)
IMG_0001.jpg
 
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