Completo Tentativa de Isolamento em PDA - Flórida

Bom Dia, vou tentar fazer um diário curto. Tenho um diário recente de uma clonagem, eu peguei um fruto dessa clonageme fiz a 2° clonagem, e com esse micélio em PDA comecei isolar os setores Rizo. estou no momento na 3° repicagem.

2° Repicagem

Tive 3 placas assim
Essa foi a unica com setor Rizo, que foi cortada e passada pro outro pote.
O restante dessa placa repicada, eu corte a parte rizo e joguei em Milho Esterilizado.


3° Repicagem

No momento, as 3 placas da 3°repicagem apresenta um micélio muito bonito e rizomórfico


Logo vou separar a placa mais bonita e repicar pra mais 4 placas, e oq sobrar no pote vou cortar e jogar no milho, e logo vou picar o micélio direto pra cultura liquida tbm.
Quero fazer um cultivo pra cada repicagem, pra ir comparando os flushs e etc. Espero estar fazendo certo, caso esteja errado, me corrijam. Criticas e dicas sempre bem vindas
Forte abraço a todos

 

[cubensisdedread]

Micélio ja está avançando, do PDA p/ o Milho.

 

[AshtarSherry]

Está avançando e lindamente, diga-se de passagem. Belo trabalho, mano!

 

[tupy]

está maravilhoso o micélio indo no milho. Está tudo certo, não tem o que melhorar. Só deixo a sugestão de identificar cada pote, cada placa, cada repicagem, data, números, etc. senão chega uma hora se pode se perder em meio a tantos processos, no mais é isso. parabéns.

 

[cubensisdedread]

está maravilhoso o micélio indo no milho. Está tudo certo, não tem o que melhorar. Só deixo a sugestão de identificar cada pote, cada placa, cada repicagem, data, números, etc. senão chega uma hora se pode se perder em meio a tantos processos, no mais é isso. parabéns.

Muito obrigado tupy, eu estava identificando escrevendo diretamente no vidro, mas tava manchando, ai oque eu fiz foi esrever na fita crepe e colar na tampa dos potes, assim a fita n atrapalha a visibilidade, Muito obrigado pela dica, to ansioso com essse micélio ja que meu bulk clonado ''azedou'' e eu tive q descartar.

 

[cubensisdedread]

Micélio evoluindo!! Estava com saudade da incubadora cheia, mesmo sendo quase todos Shimejis, o importante é ser cogumelo

 

[cubensisdedread]

Bom Dia, Tirei umas fotos das placas com a 3°repicagem. as 3 placas estão indo mto bem, a 2° repicagem eu tive 3 placas totalmente algodoadas e apenas 1 rizo, q foi transferida o setor mais forte pra outras 3 placas, no momento as 3 placas estão indo muito bem.
Estou fazendo teste com esporos nesse pda novo, mas não eclodiu nem o Australia que tem 7 meses, e nem o Thai na Muang de 2011. Pelo q tinha visto e conversado, esse PDA serviria até pra recuperar carimbos antigos... Meus esporos pode estar sem vida ? ou pode ser o pda ?
Aqui vai uma foto da atualização.

Lado esquerda Na Muang, e lado direito Australia, os dois sem sinal.

A evolução no milho.


3° Repicagem.

 

[Cosmik]

Meus esporos pode estar sem vida ? ou pode ser o pda ?

Minha intuição diz que para reativar esporos antigos seria melhor uma CL ou seringa. Assim, me parece que a hidratação ocorre de maneira mais fácil.
Bom, de qualquer forma, não perca as esperanças. Acredito que ainda é cedo para afirmarmos. Por exemplo, eu já tentei fazer uma CL com carimbo que tinha 4 anos, e demoraram quase 30 dias para dar sinal de vida. Lembrando agora, até que foi uma experiência interessante, porque eu já tinha desistido em partes dessa CL. Deixei ela "mofando" na incubadora, e quando decidi jogá-la fora, para minha surpresa o micélio estava lá.

 

[cubensisdedread]

Minha intuição diz que para reativar esporos antigos seria melhor uma CL ou seringa. Assim, me parece que a hidratação ocorre de maneira mais fácil.
Bom, de qualquer forma, não perca as esperanças. Acredito que ainda é cedo para afirmarmos. Por exemplo, eu já tentei fazer uma CL com carimbo que tinha 4 anos, e demoraram quase 30 dias para dar sinal de vida. Lembrando agora, até que foi uma experiência interessante, porque eu já tinha desistido em partes dessa CL. Deixei ela "mofando" na incubadora, e quando decidi jogá-la fora, para minha surpresa o micélio estava lá.

É isso mesmo que vou fazer, vou deixar ele quietinho na incubadora. Eu tinha deixado de lado a ideia de hidratar antes na seringa, pelo fato do pda estar com uma camada superficial de água, tanto q o da esquerda na foto, da pra ver q os esporos se espalhou, isso foi devido ao movimento do pote e essa camada de água da superfície acabou se movendo... ai pensei q ele se hidrataria assim. Mas se esse ñ vingar, mais pra frente eu faço com a seringa. Valeu Cosmik

 

[Arcturus]

Ai ja é a vera isolar o tecido do clone do clone. Sigo acompanhando pra ver o que vai crescer disso ai

Tenho minhas duvidas a respeito da eficacia da clonagem é pouco provável afirmar que durante os procedimentos não tenha ido esporos junto com o tecido ou que não tenha caído esporos no meio nutritivo ja que são muito leves e poderiam estar dispersos no ambiente.

Vejo que algumas pessoas costumam clonar antes de esporularem.

No mais esta muito bonito cara parabéns.

 

[cubensisdedread]

Acho que na hora da clonagem pode até cair esporos, mas na repicagem eu acho que não. Pra fazer o clone eu uso o cogumelo, q esporulou, mas pra fazer a repicagem eu faço da placa colonizada, do setor rizo, q cresceu a partir do pedaço cortado... o cogu mesmo foi usado na primeira clonagem, dps segui cortando da própria placa colonizada... creio q a partir da 2° repicagem já diminui beeeem as chances de ter esporos do cogumelo, já q a repicagem continua a partir do micélio e n do tecido do cogu. Estou ansioso tbm pra ver oq vem por ai... dessa 3°placa ai, vu repicar pra 4° q oq sobrar de setor rizo vou transferir pro milho. Valeu Arcturus

 

[mantonelli]

Tenho minhas duvidas a respeito da eficacia da clonagem é pouco provável afirmar que durante os procedimentos não tenha ido esporos junto com o tecido ou que não tenha caído esporos no meio nutritivo ja que são muito leves e poderiam estar dispersos no ambiente.

Por isso alguns cultivadores mergulham o tecido que vai ser clonado em solução de peróxido de hidrogênio, que é esporicida, antes da transferência para o BDA.

 

[AshtarSherry]

Sabe a proporção dessa solução, @mantonelli? Contanto que não prejudique o micélio colhido, pode ser uma boa prática de laboratório!

 

[mantonelli]

Esse é um livro que trata bastante da utilização do peróxido de hidrogênio nas diversas formas de cultivo: https://teonanacatl.org/threads/psilocybin-mushroom-handbook.6104/

A diluição que utilizei, de acordo com o livro, foi de 3ml de água oxigenada (10 volumes) em 1 litro de água. E funcionou.
Se a mistura de BDA já for feita utilizando o peróxido, esse banho do tecido se torna desnecessário, pois como disse acima, essa substância é esporicida.

É importante respeitar as proporções indicadas no livro, dessa forma o micélio não vai ser prejudicado.
Nesse tópico eu errei na conta e o micélio não vingou: https://teonanacatl.org/threads/utilização-de-ágar-com-peróxido-de-hidrogênio.8921/

 

[AshtarSherry]

@mantonelli , eu acompanhei esse tópico do erro, tá valendo o livro do Nicholas e o retorno! Sempre aprendendo.

 

[mantonelli]

Só para finalizar, eu peguei essas placas com a diluição errada e antes de descartá-las, as deixei expostas ao ar, sem nenhuma cobertura.
Elas só foram apresentar algum tipo de contaminação depois de 15 dias, mas nesse meio tempo o BDA praticamente secou.

Então é uma técnica que tem sua validade, desde que respeitada.

 

[cubensisdedread]

Só para finalizar, eu peguei essas placas com a diluição errada e antes de descartá-las, as deixei expostas ao ar, sem nenhuma cobertura.
Elas só foram apresentar algum tipo de contaminação depois de 15 dias, mas nesse meio tempo o BDA praticamente secou.

Então é uma técnica que tem sua validade, desde que respeitada.

Vou fazer isso, eu recebi essa dica, mas mandaram eu molhar na agua oxigena apenas, sem diluir na água.. a agua oxigenada 10 volumes tem 3% ativo de peróxido de hidrogênio. ou seja, eu ia perder a clonagem, certo ? hehehehe

 

[AshtarSherry]

CERTEZA, eu já sequei bolos inteiros com aspersão de H2O2, que o Grande Cogumelo nos livre!

 

[cubensisdedread]

E o micélio vai avançando, bem lindamente esse micélio é da 2° repicagem. logo vu montar com a 3° repicagem, e ja vou passar pras placas da 4° repicagem.

 

[cubensisdedread]

Boa Noite. A colonização do milho está indo muito bem. Um dos potes está 99%. Vou estou pensando ainda oque vou usar, pretendo usar bastante palha, só nao vou usar apenas palha, pq se nao eu fico sem p/ os Shimejis.
Milho inoculado com PDA, selecionando o setor RIZO da 2° Repicagem.


Esse está 99%

Pó de coco com arroz integral, inoculado com Cultura-Liquida. Cultura Liquida feita também com pedaço de micélio selecionado no PDA tbm.


Vamos nessa