Micélio em placa de agar

[Phyllomedusa]

Esses dias preparei 10 placas de petri com Batata, dextrose e agar e inoculei com 3 variedades de cubensis (GT, Huatla e PESA). 4 placas estao visivelmente contamidas (talvez aspergillus e outras coisas verdes):neg: . Essa ai nao apareceu nada verde apenas isso. Voces acham que é micélio?
A variedade é GT. Foi inoculada a partir de uma cultura de micelio em meio liquido.
A foto nao está muito boa porque a placa condensou.
Abraços!

*Depois posto as fotos das contaminaçoes!

 

[shroower]

Pra mim parece micelio sim.

 

[Phyllomedusa]

Entao vou postar aqui as outras placas que nao teve sucesso.
Vários tipos de contaminaçoes. (se depois acharem melhor ir para parte de contaminaçoes,OK!)

Foi por isso que fiquei com duvidas sobre esse micélio. Praticamente tudo está perdido, apenas o GT que apresentou o crescimento de um micelio (algodoado, pra mim). Mas mesmo este tem um pequeno sinal de contaminaçao. Mas parece que nao vai atrapalhar o micelio a crescer.

O agar (BDA) eu fiz com agua de torneira, esterelizado em panela de pressao por 45 min., e o local (peq. banheiro) esterelizado com uma solucao que inventei (3%formol, 10% agua sanitaria e 20% Lysol, em agua).
EU nao tomei banho no dia da inoculação, mas usei luvas estereis, mascara e uma lamparina.

O PES foi feito uma seringa. O GT e o Huatla são de culturas de micelio em meio liquido.

PRATICAMENTE TUDO PERDIDO!

O bom é que apenas foi utilizado 5 gotas em cada placa e ainda tem muito nas seringas.

 

[shroower]

Ja pensou na ideia de que a contaminacao pode ter vindo das seringas?

 

[Phyllomedusa]

mais fotos...
a foto do meio é denovo o micelio do GT (duvidoso). Tem pequenos sinais de contaminacao. Mas do jeito que o ???micelio??? cresce nao será um problema.


Cheguei a pensar que realmente fosse o meio liquido... Mas o PESA que foi feito na hora (a seringa) tbm contaminou (menos).
Valeu moçada!os:

 

[Phyllomedusa]

Agora as fotos estao melhores. Dá pra ver que é micélio mesmo.
No total de 10 Placas (nao tive muita sorte):neg: Apenas 3 estao colonizando sem contaminaçoes, 1 ainda nao tem sinal de nada. O resto contaminou BRABO!

Receita do agar (BDA) utilizado e material utilizado:
10g de agar (comprado em lojas de produtos naturais ou de festas. R$16,00/50g)
7g de Dextrose (lojas de nutrição)
500ml de agua (de torneira) conzinhados com 200 g de batatas fatiadas.
10 placas de petri descartaveis (lojas de produtos laboratorias. 10 placas/R$4,00)

Modo de preparo.
Deixar a água (500ml) com as batatas cozinhar por 15 min. Depois cuar a agua e completar até dar 500ml. Feito isso adicionar a dextrode e o agar. Mexer bem e depois esterelizar em panela de pressao por 1 hora.

*Acho que este tópico ficaria melhor na parte de cultivos em agar. PAZ a todos!


... as nove placas... a décima já descartei!

 

[Mauricio]

As seringas são novas ou usadas ?
Sendo usadas foram esterelizadas ?

Não ter tomado banho foi um vacilo grande.
O corpo, na pele, carrega uma infinidade de microorganismos.
A ansiedade de começar o trabalho já me levou a cometer esse erro.
É fatal

Sobre um meio de cultura aberto, como uma placa de petri, um microorganismo cai e se prolifera rapidamente.

Tendo reprodução mais rapida do que a do Cubensis,(supondo) ele não encontra competição pelo meio de cultura

O bolo PF, com selo de vermiculita, é mais resistente a contaminação.

Pode acontecer de um microorganismo "pousar" sobre selo na inoculação.
Mas os esporos injetados no substrato têm tempo de colonizar e prevalecer.

Os esporos, hidratados por 48 horas, colocados no meio o colonizam mais rapido.
Não hidratando os esporos voce dá uma vantagem enorme aos intrusos.

Não use água de torneira.
Mesmo fervendo, água de torneira tem cloro, e sais dissolvidos que podem inibir ou retardar a colonização.

Use sempre água destilada.
Se não encontrar use água mineral (tem menos sais e metais dissolvidos).

 

[Phyllomedusa]

A única seringa que preparei foi o PESA (uma seringa nova). Os demais foram de culturas em meio liquido já em seringas.

Mas tbm acho que o vacilo maior foi nao ter tomado um banho. Apesar de ter esterelizado o ambiente e usar luvas, mascaras e uma lamparina nao impediram as contaminaçoes que estavam, provavelmente, na minha pele e cabelos.

Apesar disso eu gosto muito de meios de cultura em placa, pq no caso de nao dar certo voce nao gasta muitos esporos e nem muito trabalho.

Valeu Mauricio (valeu a TODOS)!

 

[NeuroFX]

Usar placa petri é muito arriscado, não é à toa que na maioria das vezes elas são preparadas em câmaras de fluxo lâminar ou sob filtros HEPA.

Vc deu muita sorte de algumas não terem contaminado.

Isso prova que condições estéreis só com filtros, nenhum cultivador amador/caseiro consegue 100% de assepsia usando os métodos descritos aqui no fórum.

O lance é você tentar, além de tudo que vc já fez, manipular as placas como o pessoal de laboratório faz, com agilidade e ritmo.

Tá muito legal esse tópico, boa sorte!

 

[calimba]

Eu abomino placas de petri.

São dificeis de manusear e contaminam fácil. Estou usando minha técnica de cremoagar em copinhos de geléia e de 9 culturas nenhuma contaminou até agora, e olha que já foram mandadas até pro ceará.

Como nos copinhos o agar fica vedado pelo plástico de pvc e você pode literalmente jogar o copinho com a cultura pelo laboratório (ou o que mais chegar perto disso na sua casa ).

 

[Phyllomedusa]

É psilo, esses potinhos ai sao o esquema mesmo!
Agora vou começar a juntar esses potes para os cultivos em meio de agar.
Já estereliza no microondas e diminui as chances de contaminaçao.
Valeu MESMO as dicas.
Abraços

 

[Mortandello]

entao...
até ae firmeza!
tem o micelio no agar e tudo!
mas a gente nao tem NADA explicando como re-introduzir esses micelios em um meio de cultura nao é?
nao sei se vcs tem esse problema, mas comigo ocorre quando eu uso Spawn tirado de meio liquido:
eu coloco lah 5 sementes de trigo para " boiar" na cultura liquida, e em 3 ddias elas estao com a superficie toda coberta de micelio.
ae eu re- introduzo essas sementes em uma cultura (jogando elas dentro cada uma em um pote com arroz integral sem casca cozido)
ae q vem o problema!
aqui em casa, elas se desenvolvem legal, viram um bolinho grande! mas nao sai disso, ela nao parece querer migrar para o arroz. perdi essa semana 4 potes com arroz e fiquei chatiadao. as que eu deixei em cima do substrato formaram aquele lindo mofao por cima, ae quando eu agitei pra ela se misturar elas pararam de se desenvolver...
perdi coisas em milho tb...azedou.. a partir de spawn eu nao tou conseguindo ir...
ehhehe
[]´s

 

[viridis]

Concordo plenamente! Também tenho culturas em agar se desenvolvendo e com ctz terei dificuldades de passá-las para o spaw ou sementes de pássaros. Na teoria é tudo muito fácil.... Retira a película protetora, corta um pedaço da cultura e deposita dentro do meio nutricional. Alguém sabe o nome do instrumento que faz a transição agar---->meio nutricional? uma colher ( esterelizada ) cairia bem?

 

[calimba]

Alça de inoculação.

Mas eu sempre me dei bem cortando com um bisturi estéril e passando o pedaço de agar com micélio para o destino final com uma pinça.

 

[Phyllomedusa]

entao moçada,
vou postar apenas umas fotos do meu novo cultivo... Sem grandes pretencoes, por isso nao vou abrir mais um topico no diario de cultivos. Até porque vou esperar que tenha algum sucesso e depois relato direitinho como foram os procedimentos.
Em suma foram 3 bolos PF e 7 sacos de polipropileno. Os bolos foram inoculados: 1 com esporos de PESA e os outros com micelio em meio liquido de Huatla e GT.
Os sacos foram: 2 com PESA (mesma seringa), 2 com Huatla em meio liquido e 3 com GT da placa em agar (das fotos acima). O procedimento para inocular o agar no grao foi o mesmo descrito pelo Psilo no post acima.
Abraço a todos!

A foto com o BOlo é de Huatla. O saco de polipropileno tem um pedacinho do agar que já está indo para o trigo!

 

[Mauricio]

Fala Phylomedusa


Voce colocou o substrato no saco de polipropileno e esterelizou em panela de pressão ?

Descreva como foi o procedimento.

 

[Phyllomedusa]

Foi isso mesmo mauricio!
Primeiro deixei o trigo hidratar por 5 horas. Depois lavei e deixei cozinhar por 30 minutos (até ficarem molinhos e gostosos). Feito isso eu retirei o excesso de agua do grao, pus nos sacos e na panela de pressao por 45 minutos.

 

[Mauricio]

Os sacos de polipropileno resistiram sem deformação a temperatura ?

Qual a marca dos sacos que você usou ?

O saco é do mesmo tipo ziplog ?

Na inoculação você fez os furos no saco em vários pontos ?

Ou fez apenas um furo e agitou ?

Cobriu os furos com fita durex ?

Descreva o procedimento da inoculação

 

[Phyllomedusa]

Os sacos de polipropileno resistiram sem deformação a temperatura ?

Qual a marca dos sacos que você usou ?

O saco é do mesmo tipo ziplog ?

Na inoculação você fez os furos no saco em vários pontos ?

Ou fez apenas um furo e agitou ?

Cobriu os furos com fita durex ?

Descreva o procedimento da inoculação

Os sacos resistiram muito bem. A marca dos sacos está num post em cogumelos comestiveis "duvida sobre Pleurotus" (se nao me engano). https://teonanacatl.org/threads/duvida-sobre-o-pleorotus-sajor-caju.649/#post-6806
Esses sacos nao sao do tipo ziplog.
Na inoculaçao fiz dois furos no saco em nao agitei. E os furos foram cobertos com fita durex.
Para inoculaçao usei uma lamparina onde flambava a agulha a cada inoculaçao. Esperava a agulha esfriar um pouco (ao lado da lamparina) e inoculava. Foi basicamente assim. A cada inoculaçao deve ter ido 1 ml da seringa.

 

[Night Storm]

Phyllo, blz irmão?

então, oq seria isso q vc fechou os sacos? akeles araminhos de saco de pão-de-forma?