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Em Andamento C02 - O Destemido - PF/Casing TKSSS com Terrário Refrigerado

Discussão em 'Diário de cultivo' iniciada por WoD, 14 Out 2018.

  1. WoD

    WoD Hifa
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    Iniciando novas atividades hoje. Após conseguir êxito tomando todos os cuidados defendidos pela maioria dos growers, nesse cultivo eu adotarei uma abordagem mais natural sem tomar muitos cuidados e, deliberadamente, escolhendo abandonar alguns procedimentos considerados por alguns como essenciais.

    Vamos lá:

    ==================
    DIÁRIO DE CULTIVO
    ==================

    STRAIN: TKSSS
    PROCEDÊNCIA: Loja Digital

    Obs: recebi a seringa a três meses atrás. Ela sobrou do meu primeiro cultivo. Durante este tempo, esteve guardada no fundo da geladeira, dentro de um ponte vedado.

    ---------------------------------------------
    SUBSTRATO PARA COLONIZAÇÃO:
    ---------------------------------------------
    (X) PF TEK (2V + 2,5FAI + 1A)
    Selo com Vermiculita
    (X) Sim ( ) Não

    GRÃOS:
    (X) Arroz Integral

    Método de preparação e esterilização do substrato:

    Nenhum cuidado de esterilização antes de ir pra panela de pressão. Substrato mexido em local aerado, sem proteção nenhuma (sem luva e sem máscara), com material não cozido não limpo de forma alguma. Vermiculita suja (com pedaços de saco dentro dela).

    Mistura feita, foi para a panela de pressão ficando aproximadamente 1h e 20m. 20m para fazer pressão, 1h nas condições adequadas de esterilização.

    -------------------------------------------------
    INOCULAÇÃO: Data 14/10/ 2018
    -------------------------------------------------
    (X) Seringa Multiesporos

    GloverBox?
    ( ) Sim (X) Não

    Inoculação realizado no banheiro. Limpei usando desinfetante comum. Depois de limpar, passei cerca de 1h (enquanto preparava outras coisas), encharcando todas as superfícies, paredes e o que avaliei que fosse uma possível fonte de contaminantes com álcool 70. Deixei o ambiente completamente fechado. De forma que o cheiro de álcool dentro ficou bastante forte quando entrei para fazer a inoculação.

    Não flambei a agulha, limpei-a bem usando álcool 70 e só.

    O tamanho da agulha foi insuficiente, então tive que enfiar um pouco mais fundo dentro do copo abrindo um buraco bem grande e fazendo com que a ponta dela tocasse o selo de vermiculita. Cobri o furo com fita micropore, mas não pus uma tampa de alumínio por cima. Deixei a micropore exposta.

    Foram inoculados 5 copos de 200ml cada um usando uma seringa de 5ml. Cada copo recebeu 1ml dividido em dois furos equidistantes com 0,5ml cada um.
    -------------------------------------------------
    INCUBAÇÃO: Data 14/10/ 2018
    -------------------------------------------------

    INCUBADORA:
    Usei uma caixa de sapatos. Dentro dela pus um aquecedor de aquário grande com termostato incluso configurado para 30°. Pus um pano em cima (jeans velho) e fechei a caixa.

    E é isso aí abiguinhos
     
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    #1 WoD, 14 Out 2018
    Última edição: 15 Out 2018
  2. WoD

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    INOCULAÇÃO: Data 14/10/ 2018
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    5º Dia de Incubação
    - Sinais sutis de desenvolvimento de Micélio em dois copos. Foi preciso analisar com muita atenção pra ver os pequenos detalhes brancos nos flocos de arroz.
    - De qualquer forma, vou pegar alguns carimbos feitos com o cultivo anterior e preparar alguma culturas líquidas e copos neste domingo. Só pra ter um cultivo de retaguarda. Vou manter a coleção de strains por culturas líquidas e carimbos.
    - Aproveitei um tempo livre e fiz adicionei uma camada de alumínio aos copos, escondendo assim os furos, anteriormente cobertos apenas com uma camada de micropore. Fiz isso porque acredito que possa facilitar a manutenção da hidratação do substrato, evitando que a água se perca por estes furos.

    ERRATA: eu coloquei o termostato pra 28° mesmo. Pensei que tinha posto 30°.
     
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    #2 WoD, 18 Out 2018
    Última edição: 18 Out 2018
  3. WoD

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    10° dia de Incubação

    - Cinco dos copos demonstram sinais claros de desenvolvimento com micélio bastante rizomórfico.
    - Um dos copos não apresenta qualquer desenvolvimento visível.
    - Iniciadas duas culturas líquidas de Albinos, visando aprendizagem e cultivo de reserva.
    - Próximo checagem somente no 20° dia de incubação.



     
  4. WoD

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    14° dia de Incubação

    1 copo com 100% de ocupação da superfície. Neste copo em especial, fiz 4 furas equidistantes porque sobrou na agulha. Ou seja, fazer quatro furos pode tornar o processo mais rápido e garantir a velocidade de 20 dias.
    4 copos estão oscilando entre 30 e 50%.

    - Manchas amareladas em alguns dos copos. Possível contaminação bacterial. Vou aguardar evolução pra ter certeza. Seguem algumas fotos.

    photo-2018-10-28-17-50-32.jpg
    photo-2018-10-28-17-51-03.jpg
    photo-2018-10-28-17-51-38.jpg
    photo-2018-10-28-17-51-42.jpg
    photo-2018-10-28-17-51-45.jpg

    Além da esterilização por calor, durante todo o processo utilizei somente alcool 70. Se confirmada a contaminação, evitarei utilizar somente esta substância para esterilização no futuro.

    OBS: as fotos correspondem a dois copos diferentes. Não são representativas dos cinco copos inoculados.
     
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    #4 WoD, 28 Out 2018
    Última edição: 29 Out 2018
  5. WoD

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    Deu ruim negrada!

    photo-2018-11-01-12-04-46.jpg
    photo-2018-11-01-12-05-23.jpg

    Apesar do bom início com desenvolvimento rápido, na metade do caminho nos esbarramos com essa contaminação por bactéria.
    Essas duas primeiras fotos são do mesmo copo, de faces diferentes, para vocês terem comparativo em relação a coloração amarelada.
    Mesmo na face que está mais branca, a textura do micélio está algodoada, ou seja, ele parece estar lutando nessas regiões.
    photo-2018-11-01-12-05-28.jpg
    photo-2018-11-01-12-05-37.jpg
    photo-2018-11-01-12-05-46.jpg

    Nessa última imagem, nós temos uma secção tranversão do bolo. Observe que a infecção se alimenta principalmente dos arroz. Ou seja, ela está competindo, mas não atacando o micélio.

    De qualquer forma, como eu não sei o que é, e nem me interessa saber, os bolos foram desprezados.

    ___________________________________________________________________


    Essa foi minha primeira perda por contaminação, então pra não cair as lágrimas, vou transformar episódio em uma boa chance de aprendizagem:

    Essa semana recebi do @l3th3 esporos selvagens de cubensis e paneulous. Como estágio pro isolamento, eu vou tentar isolar este micélio (um TKSSS), pra ver se obtenho êxito na remoção da contaminação!

    Ou seja, este diário agora vai ser de uma clonagem e de uma tentativa de isolamento.

    -------------------------------------------------------------------
    INOCULAÇÃO POR CLONAGEM: Data 01/11/ 2018
    -------------------------------------------------------------------

    Selecionei um pedaço de micélio ainda bastante rizomórfico que estava brotando para fora do selo de vermiculita. Esse pedaço foi partido em 8, dos quais 5 foram postos em copos anteriormente esterilizado em panela de pressão.

    Os cinco copos, apensar de uma semana guardados, não demonstravam sinais visíveis de nenhum tipo de contaminação. Eu removi as tampas de alumínio, peguei uma pequena tesourinha (antes imersa em álcool 70), cavei um furinho na lateral do copo, próximo a borda para que eu possa acompanhar o desenvolvimento e pus a secção de micélio. O processo, foi repetido nos cinco copos.

    Feito isso tapei novamente com o alumínio, e passei fita isolante nas bordas.

    Todo esse processo foi feito, abrindo somente um dos copos que estavam contaminados. Coletando micélio que estava acima do selo de vermiculita, eu espero não ter trazido contaminantes para o novo cultivo. Depois de fechados todos os copos, levei os contaminados para o jardim onde enterrei em locais longe do sol.

    A temporada de chuva no NE é no final ano, onde as temperaturas alcançam até 25°. Será que eu consigo um outdoor? ;)

    Os novos copos foram então para incubadora. Dessa vez pus 30° mesmo, obedecendo a recomendação do Psilocybin - Magis Mushroom Grower's Guide.

    Esse procedimento tem baixa chance de dar certo, mas acho que serve como experiência para desenvolvimento de clonagem.

    -------------------------------------------------------------------
    ISOLAMENTO: Data 01/11/ 2018
    -------------------------------------------------------------------
    Fase 0 - Preparação.

    Comprei placas petri de vidro (15x60, custando 3,90 cada)
    Comprei agar comestível 100g por R$20,00 (uma fortuna, mas eu estava com pressa)
    Comprei cremogema (R$ 4)

    Seguirei a receita "Agar com cremogema do Psilo"
    Outras receitas disponíveis aqui.
     
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  6. Kvasir

    Kvasir Esporo
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    Raça Preferida:
    MDK
    Técnica Preferida:
    Bulk & Spawn
    Parabéns mano, apesar da contaminação estragar nosso planos aprendemos muito nos adaptando e tentando remediar os problemas. Comecei essa semana um isolamento em placas petri de P. Cubensis e Pan Cyan selvagens que colhi, se tudo der certo eu posto um diário também.
     
  7. WoD

    WoD Hifa
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    INOCULAÇÃO POR CLONAGEM: Data 01/11/ 2018
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    Sem novidades

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    ISOLAMENTO: 01/11/2018
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    Fase 1 - Inoculação a partir de tecido de micélio.
    02/11/2018

    Fiz o ágar conforme descrito na postagem anterior, coloquei na petri e as pus dentro da panela de pressão, o que se provou ser um erro miserável. Boa parte delas acabou encharcando, só 5 ficaram em condições, das 19 preparadas. Por mais que eu tenha passado quase vinte minutos encaixando-as, tentando evitar que isto acontecesse, não teve jeito.

    Montei uma SAB com uma tampa de vidro que tinha por aqui e a minha antiga glovebox (que dificultava bastante meus movimentos). Fiz todo o procedimento dentro de um quarto sem nenhuma entrada de ar, mas não lacrado (ou seja, havia troca de ar pelas frestas da porta).

    Usei toca, luva e máscara cirúrgica. Todo o ambiente foi esterilizado primeiro com lyson e depois com álcool 70. Um borrifador contendo álcool 70 foi mantido dentro do espaço para borrifar o ambiente de vez em quando. Usei uma vela para esterilizar as ferramentas utilizadas (pinça cirúrgica e uma tesourinhas de unha em substituição do bisturi). O fogo da vela é insuficiente pra deixar a ferramenta incandescente, conforme as recomendações do RR em sua famosa coleção de videos. Mas acho que isso pode ser um exagero.

    Ao fim, lacrei as placas com plástico filme.

    Das 5 placas:
    - 1 Inoculei com um pedaço de tecido de um bolo bastante promissor que tive no cultivo 01. Estava guardado na geladeira a pelo menos três meses em um pedacinho, não mais de 1cm³, de bolo.
    - 4 inoculei com tecido do pedaço contaminado.

    O processo é muito legal, mas extremamente cansativo. Principalmente pra mim que tive de organizar o espaço (diferente dos que usei anteriormente). Já estou traçando planos para corrigir os erros realizados dessa vez:
    - Da próxima vez vou esterilizar as petri + ágar em um ponte dentro da panela de pressão e abrí-los somente no espaço planejado.
    - Vou precisar de um bisturi pras próximas etapas. Acho que pode facilitar o serviço. Minha pinça cirúrgica, que veio junto com a balança, ajudou bastante dessa vez. Ferramentas sempre são a chave.

    Bati as fotos, mas vou por só na próxima postagem para mostrar a comparação de cada placa.
     
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    #7 WoD, 2 Nov 2018
    Última edição: 2 Nov 2018
  8. WoD

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    INOCULAÇÃO POR CLONAGEM:
    Data 01/11/ 2018
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    Condições de crescimento:
    Fechados dentro de uma caixa de sapato com um aquecedor de aquário dentro de uma garrafa de vidro configurado para manter a temperatura em 30°
    Temperatura ambiente oscilando entre 28° a 33°

    Evolução
    Dois copos demonstram sinais de micélios menores que uma unha.

    Considerado o desenvolvimento lento se comparado com seringa multiesporos. Mas isto é o esperado.

    Sem sinal de manchas amarelas nos copos.

    -------------------------------------------------------------------
    ISOLAMENTO: 01/11/2018
    -------------------------------------------------------------------
    Condições de crescimento:
    Fechados dentro de uma caixa de madeira. Temperatura ambiente oscilando entre 28 a 33° nesta semana.

    Evolução:
    Resumo-1-3-6.jpg

    Lamento a qualidade das fotos, mas a minha habilidade de fotógrafo ainda está em desenvolvimento kkk.

    Estou um pouco preocupado com a qualidade do meio. Se você observar a placa 3, vai perceber que o micélio não parece estar se expandido com facilidade. Ao invés de termos uma expansão clara, ela mais parece uma mancha no substrato. Os outros não estão assim, mas parecem ter um desenvolvimento mais lento. Talvez seja também devido ao tempo que este micélio passou na geladeira.

    Senti que o meio não ficou muito uniforme, a cremogema deixou pequenos nódulos visíveis quando se aproxima e observa a placa com atenção. Vou manter a receita, pela praticidade, mas pretendo tentar fazê-lo mais uniforme.

    Estou me preparando para fazer um spawn de milho com o produto destes isolamentos.

    OBS: as culturas líquidas que eu havia feito com alguns albinos que tenho mostraram resultado. Agora consigo distinguir o micélio na água e aparentemente não há contaminações.
     
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    #8 WoD, 7 Nov 2018
    Última edição: 8 Nov 2018