Problemático 4º bulk - Escondido

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DIÁRIO DE CULTIVO
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STRAIN: Escondido
PROCEDÊNCIA: carimbo FSRE

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SUBSTRATO PARA COLONIZAÇÃO:
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Milho de pipoca (preparado conforme a Técnica PF Very Desperate Poor Man (PF tek & Balde), só que pulando uma das fervidas seguidas de 24h de molho.

Fechei os copos antes da pressão com uma tampa de papel alumínio com 1 ou 3 furos presa com fita isolante e mais uma tampa sem furos solta.

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INOCULAÇÃO: Data 21/08/2019
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- 9 copos com seringa multiesporos:

- 6 usando uma seringa que só esterilizei com álcool 70º

- [experimento] 3 usando uma seringa que esterilizei com álcool 70º e fervura

- Um pouco mais de 3ml por copo. Em uns distribui os 3ml em 3 furos, em outros apliquei os 3ml num furo central rotacionando a agulha. Os furos foram cobertos com fita microporosa.

- Usei glovebox

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INCUBAÇÃO:
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Caixa de madeira tampada dentro do armário sem controle de temperatura

31/08/2019: sem sinal de colonização

04/09/2019: primeiro sinal de colonização, micélio algodoado saindo de um único grão junto a parede de um dos copos. Chacoalhei.

05/10/2019:
Quatro dos copos estagnaram com uma colonização estranha (figura 1)
Outros quatro também tiveram essa colonização estranha inicialmente, mas começaram a desenvolver micélio algodoado em um ou alguns pontos
Um copo está cerca de 70% colonizado

-Gambiarra- suspeito que esteja faltando umidade nesses copos estranhos estagnados, então, aproveitei que estava reinoculando uns copos de milho com uma cultura líquida experimental de shimeji, e injetei 10ml dela divididos em dois dos copos estranhos, pra umedecer.

Copo estranho:



Figura 1: em vez de formar um micélio rizomórfico ou algodoado, parece que vários esporos germinaram, formando pequenos pontos brancos pelo milho, e assim ficaram (tirei um print da tela do celular porque a imagem fica bem visível na tela, mas, quanto tiro a foto, a foto fica horrível)

Alguém tem ideia do que cause essa colonização estranha e como desestagná-la?

Valeus! Abraços!

 

[Wanderer]

Cara, então, eu já passei bastante por coisas parecidas, alguém deve ter escrito sobre isso em algum livro ou artigo, eu nunca vi em fontes confiáveis mas pela minha experiência acredito que seja bem real.

A idéia é mais ou menos essa: os fungos em geral, leveduras e fungos filamentosos quando estão meio dormentes e vão direto pra um meio super nutritivo cheio de açúcar, acabam morrendo ou estagnando, eles não estão com o máximo da sua capacidade de metabolização pra conseguirem dar conta. Com leveduras pra produção de cerveja artesanal, primeiro é realizada a reativação das leveduras, que consiste em colocar elas por um tempo num meio mais pobre em nutrientes pra daí elas entrarem num ritmo mais acelerado de crescimento e consumo de substrato, pra só depois colocar elas na água nutritiva da cerveja.

Com os cogumelos da pra fazer algo parecido, primeiro isolar eles em ágar, depois colocar no grão esterilizado, depois pegar grãos colonizados pra fazer mais grãos colonizados e aí sim mandar pro substrato final. Como você tem um tanto crescendo nos grãos de milho, você pode aproveitar esse pote pra fazer novos potes de grãos de milho, que aí esse micélio já vai estar crescendo num ritmo acelerado e vai ser bem mais fácil a colonização.

 

[Hellneroni]

- 6 usando uma seringa que só esterilizei com álcool 70º

- [experimento] 3 usando uma seringa que esterilizei com álcool 70º e fervura

CORREÇÃO
- 6 usando uma seringa que esterilizei com álcool 70º e fervura

- [experimento] 3 usando uma seringa que esterilizei só com álcool 70º

[CONTINUAÇÃO DO DIÁRIO]
20/10/2019: 60 dias após a inoculação. Três copos totalmente colonizados. Dois copos cerca de 85-95% colonizados. Dois copos chacoalhados após uma colonização de cerca de 5%. Dois copos (os da gambiarra) reesterilizados pra reinoculação com CL produzida a partir de um dos copos 100% colonizados.

Esterilização da seringa de inoculação​	colonização <5% em 20/10/2019​	Colonização 5-10% em 20/10/2019​	Colonização 85%-95% em 20/10/2019​	Colonização 100% em 20/10/2019​
Só álcool 70º​	0​	0​	2​	1​
Álcool 70º + fervura​	2​	2​	0​	2​

Quantidade de furos de inoculação​	colonização <5% em 20/10/2019​	Colonização 5-10% em 20/10/2019​	Colonização 85%-95% em 20/10/2019​	Colonização 100% em 20/10/2019​
1​	1​	1​	1​	3​
3​	1​	1​	1​	0​

Conclusões
Como nenhum copo sofreu contaminação a esterilização apenas com álcool 70º parece ser tão eficaz quanto a fervura.

Há um indício pouco evidente de que três furos cobertos com fita microporosa retardam o desenvolvimento do micélio em relação a presença de apenas um furo. Isso pode decorrer de uma maior perda de umidade e/ou maior oxigenação em copos com mais furos. A primeira possibilidade me parece mais plausível, apesar de eu achar que os três copos 100% colonizados terem apenas um furo foi, em grande medida, uma coincidência.

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BULK:
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20/10/2019:
CL
(Cultura Líquida feita com Spawn colonizado adaptado) com uma seringa fervida fui pegando água de um copinho de água mineral lacrado e injetando num copo de milho colonizado. Chacoalhei bem batendo o pote na palma da mão e enchi seringas fervidas com a água cheia de micélio. Enrolei elas em papel alumínio, guardei num ziploc, dentro de um saco de papel dentro de uma sacola de mercado na geladeira.

Bulk com o spawn usado na produção da CL
Proporção 1 spawn pra 3 de substrato nitrogenado (esterco + vermiculita 50/50). Alocado num baldinho seguindo o mesmo modelo do meu último bulk (3º bulk Palenque (experimento esterco) ).