Problemático Minha Tentativa de Shiitake e Shiimeji

Olá Pessoal, com incentivo de nosso amigo @cubensisdedread através de seus cultivos, resolvi tentar com os comestíveis desta vez.

Preparei o meio de cultura BDA da seguinte forma:
500ml de água + uma batata pequena descascada (50g) Fervi por 20 minutos, coei com filtro de café.
Passados os 20 minutos, essa água reduziu para 240ml. Acrescentei 4g de Dextrose + 4g de Agar Comestível.
Levei a mistura para a panela de pressão e após começar a chiar, marquei 20 minutos.
Limpei as placas petri com água e sabão e depois passei Álcool, levei ao formo elétrico á 200° por 20 minutos. (esperei esfriar e levei para a GloverBox).

Aguardei 1 hora e meia para esfriar um pouco a panela, preenchi as placas com o meio de cultura.

No dia Seguinte, comprei uma bandeja de Shiitake e uma de Shiimeji

Cortei com um bisturi e retirei um pequeno pedaço do seu interior diretamente para a placa petri.

Levei para a incubadora á 26/27°


OBS: Junto com estas, fiz também mais 4 placas com Culturas Liquidas que eu tinha a uns 6 meses na geladeira, apenas para fazer testes com a placa e o BDA. (01 dos selvagens que cultivei, 01 de Pesa, 01 de GT e uma de Pan que também é selvagem, porem nao tinha cultivado ainda, apenas feito a CL).

Vamos ver no que dá.
Abraços a todos.

 

[cubensisdedread]

Parabéns Kinney. Vc vai tirar de letra esse cultivo. Esse shimeji que vc comprou pe o Shimeji Preto, esse gosta de temperatura mais frias, na hora da pinagem/frutificação tentá manter de 18ºc a 20ºc!! agora vai que vai, abração

 

[kinney]

Agradeço pelas aulas e diários, qualquer dúvida já sabe né. Pergunto mesmo... kkkk
Mexer com gelo acho chato, mas vou tentar.

 

[User03]

Muito bom mano! Trabalho profissa.

Você achou alguma dificuldade com o ágar comestível? Qual recipiente você utilizou na panela de pressão?

 

[kinney]

Você achou alguma dificuldade com o ágar comestível? Qual recipiente você utilizou na panela de pressão?

@RainSpirit eu utilizei um Erlenmeyer que comprei no mercado livre.
Hoje dei uma olhada nas placas, e notei que o meio de cultura ficou meio mole, acho que não vai dar certo. Eu deveria ter colocado um pouco mais de agar.
Se não der certo, faço novamente!
É errando que se aprende...

 

[Ecuador]

Hoje dei uma olhada nas placas, e notei que o meio de cultura ficou meio mole, acho que não vai dar certo. Eu deveria ter colocado um pouco mais de agar.

Quatro gramas para 240 ml de água deveria ser suficiente. Esse agar é alimentício ou PA?

 

[User03]

Hoje dei uma olhada nas placas, e notei que o meio de cultura ficou meio mole

Esse agar é alimentício ou PA?

É esse o motivo do meu questionamento... Já tentei trabalhar com ágar alimentício e não dá certo, ele não solidifica.

O jeito é comprar um laboratorial mesmo, para evitar gastar tempo em placas problemáticas.

 

[kinney]

Esse que eu usei é o Agar alimentício.

Já sei porque ele ficou mole... Faltou Agar mesmo.
Olhando no site http://www.himedialabs.com.br/ Temos:

Dividindo essa receita em 4 seria mais ou menos isso:
50g de batatas
250ml (água de cozimento das batatas)
5g de Dextrose
8g de Agar

Tentarei esse da proxima vez.

 

[kinney]

Bom dia Pessoal,
Das placas que eu tinha preparado, apenas uma está saudável com o clone de Shimeji a caminho. (porem com o meio de cultura meio mole). As demais placas contaminaram, com 3 tipos diferentes de contaminação...

Ontem dia 11/05 fiz novas placas, dessa vez com a receita do post acima:

• 50g de batatas sem cascas.
• 250ml (água de cozimento das batatas)
• 5g de Dextrose
• 8g de Agar Comestível

Eu esterelizei na pressão em um Erlenmeyer por 20 minutos, e depois passei para as placas que havia deixado á 200° por 30 minutos no formo elétrico. Agora sim, o meio de cultura ficou firme e hoje farei a inoculação novamente com Shimeji, Shitake.
Estou pensando em retirar esse pedaço de Shimeji que deu certo e passar para essa outra placa antes que esse meio de cultura mole prejudique o micélio. Pretendo fazer em frente ao forno elétrico ligado servindo como uma capela de fluxo laminar. O que acha, devo passar para outra placa mesmo ?

 

[User03]

O que acha, devo passar para outra placa mesmo ?

Pode passar sim, não há problemas.

Sugiro montar uma glovebox. CLs e BDAs contaminam facilmente trabalhando fora de uma, mesmo na frente do forno!

 

[kinney]

@RainSpirit, eu tenho uma Glover, inclusive essas que montei foram dentro dela. Mas contaminação é F*da...

 

[kinney]

Esta é a placa que deu certo: (retirei e passei para outra placa).

E estes são novas: (O meio de cultura ficou ótimo bem firme).


Tentei inoculações com:

• Shitake (clone)
• Shimeji (clone)
• Cubensis Selvagem (esporos)
• Panaeolus Selvagem (esporos)
• GT - (esporos)
• Florida (esporos)
• Laccaria Amethystina (Eu tinha um carimbo deste, mas resolvi por na placa pra ver no que dá)

Vamos ver se contamina ou se vai pra frente...

 

[User03]

Vou fazer uns testes aqui com ágar comestível, vamos ver se fica legal.

Boa sorte, @kinney .

 

[kinney]

Faz mesmo @RainSpirit, essa receita que usei ai em cima deu certo. Ficou bem firme.
Depois de coado o caldo e adicionado o agar e a dextrose eu deixei ele no fogo um pouco e mexi durante uns dois minutos mais ou menos para diluir bem, ai sim depois pressão.

 

[kinney]

Atualizando o processo...
Esta placa é de shitake, está com uma contaminação:

Esta está saudavel:

Estas são de Shimeji:

Estão com muita água na tampa pois estão ficando de cabeça pra baixo para não pingar na placa.
Estou achando esse micélio muito Estranho. @cubensisdedread o que acha?

 

[cubensisdedread]

Está meio dificil de identificar, mas o da 2ºfoto está com um micélio muito cinza pra ser de Shimeji. A primeira parece bem, mas está ficando com muita água. A dica que eu te dou eh tampar as petris com papel aluminio, e abrulhar a tampa avulsa no papel aluminio... assim quando vc for tempar ela ta seca.

 

[kinney]

As tampas estavam secas, ficaram assim na incubadora. Eu acabei de desligar o aquecedor estava deixando em 26°

 

[kinney]

Eai galera, estou contente em mexer com BDA. Achei que seria mais complicado, mas nem é tanto assim!
Hoje realizei repique das placas, segue imagens para acompanhamento...
Fiz 3 de cada.

 

[kinney]

Atualizando com algumas fotos...
Substrato: Serragem + farinha de arroz integral, (1:30 de pressão).
Técnica de compactação do substrato conforme dicas de nosso companheiro @cubensisdedread.
Inoculação das sementes no substrato dia 05/06/14 (realizado em 4 potes de shimeji)


Alguns dias depois...


Hoje! 14/06/14 este pote é o que está mais colonizado. (shimeji)


Hoje inoculei mais 4 copos, mas agora foi com sementes de shiitake... Estão na incubadora.
Por enquanto é isso.

 

[FrankHerbert]

Olá kinney, muito legal sua cultura!

Para o Shiitake, qual parte dele você cortou?
Foi a base do cogumelo (isolando um pedaço de micélio vivo), ou foi um pedaço do chapéu (para iniciar com os esporos)?
É possível fazer um carimbo com uma bandeja de Shiitake comprado no supermercado?
Qual seria o substrato ideal para iniciar a cultura?

Desculpa a quantidade de perguntas...