Manter linhagem não produtora de esporo?

[Cabritinho]

Olá pessoal!
Adquiri há alguns meses uma cultura líquida de uma linhagem (Penis Envy PLUS 07) e tive vários problemas com contaminação, o micélio cresce devagar, não apresenta padrão rizomórfico, o que dá brechas para contaminação agir. O vendedor alega que sua reprodução é apenas por clonagem, sem utilização de esporos, o que me leva a pensar se o micélio está ''fraco'' após tantas reproduções, e se tiver, existe alguma forma de renová-lo? Abaixo mostro um spawn e uma placa petri dessa strain.


Também estou cultivando uma strain chamada Magic Popcorn, que não produz esporos, ou seja, só reproduz por clonagem. Logo, como mantenho ela viável por longos períodos? Sem que o micélio enfraqueça após tantas reproduções? Como podem ver, ela é uma variação da Omni:

 

[Maal]

UP
Também tenho essa dúvida, aguardando as respostas

 

[SpiritualMind]

Para linhagens que produzem esporos mas não depositam, não carimba (penis envy, albinos etc). O melhor método qnd se pega uma genética assim é:
Cultive a primeira linhagem e faça a clonagem usando um pedacinho do cogumelo tirado do interior do cogu, a técnica de ágar é a mais indicada. Ao mesmo tempo, com um swab esteril colete esporos fazendo esfregaço das lamelas, tire uns 4 ou 5 swabs, com 1 vc faz duas placas, esfregando swab no ágar e cortando o algodão no meio e depositando metade em casa placa, e os outros swabs vc espera eles secarem e volta para a embalagem original e sela na seladora.

A clonagem vai servir para garantir o sucesso do próximo cultivo, e um backup curto de pelo menos 6 meses, a placa feita com os esporos do swab vai garantir o "reset" da genética, caso tenha sucesso vc vai conseguir verificar a estabilidade da genética e depois escolher um cogu mais bonito e vigoroso pra continuar o trabalho.

Caso queira fazer um backup mais longo, vc pode usar as técnicas do Castellani ou do "ágar tube slant"
Assim vc conserva o micélio por vários anos em estado de inércia.

Esse backup que eu citei acima. Tbm serve pra qnd tu consegue isolar um bom micélio independente de qual geração esteja, ou se produz ou não esporos. Assim tu cria um banco de micélio e um banco de esporos.


Sobre a conservação de longo tempo.

E recomendo assistir os outros vídeos desse canal, pois são curtos e direto ao ponto.

Basidium Equilibrium

Mycology educational visual series. Join us as we take a deeper look into the study of fungi, and the industry surrounding it. We will deep dive into the macro universe of mycelium to gain a better understanding of the micro world in which they exist. On this path we will highlight some unique...

youtube.com

Ah, sobre a genética tipo "enigma" não produz esporos mesmo. Aí é só ignorar a parte do swab e ir fazendo as clonagem

 

[Maal]

Ah, sobre a genética tipo "enigma" não produz esporos mesmo. Aí é só ignorar a parte do swab e ir fazendo as clonagem

Mas como o @Cabritinho mencionou, após várias reproduções por clonagem, o micélio não enfraquece?
Lembro de já ter lido algo a respeito que após muitas reproduções, o ideal seria recomeçar dos esporos novamente...
Mas realmente, no caso do enigma que não produz esporos, só se mantem por clonagem, então deve fluir né?
A preocupação é realmente se dá pra manter a linhagem só por meio de clonagem, para qualquer variedade.

 

[Cabritinho]

Para linhagens que produzem esporos mas não depositam, não carimba (penis envy, albinos etc). O melhor método qnd se pega uma genética assim é:
Cultive a primeira linhagem e faça a clonagem usando um pedacinho do cogumelo tirado do interior do cogu, a técnica de ágar é a mais indicada. Ao mesmo tempo, com um swab esteril colete esporos fazendo esfregaço das lamelas, tire uns 4 ou 5 swabs, com 1 vc faz duas placas, esfregando swab no ágar e cortando o algodão no meio e depositando metade em casa placa, e os outros swabs vc espera eles secarem e volta para a embalagem original e sela na seladora.

A clonagem vai servir para garantir o sucesso do próximo cultivo, e um backup curto de pelo menos 6 meses, a placa feita com os esporos do swab vai garantir o "reset" da genética, caso tenha sucesso vc vai conseguir verificar a estabilidade da genética e depois escolher um cogu mais bonito e vigoroso pra continuar o trabalho.

Caso queira fazer um backup mais longo, vc pode usar as técnicas do Castellani ou do "ágar tube slant"
Assim vc conserva o micélio por vários anos em estado de inércia.

Esse backup que eu citei acima. Tbm serve pra qnd tu consegue isolar um bom micélio independente de qual geração esteja, ou se produz ou não esporos. Assim tu cria um banco de micélio e um banco de esporos.


Sobre a conservação de longo tempo.

E recomendo assistir os outros vídeos desse canal, pois são curtos e direto ao ponto.

Basidium Equilibrium

Mycology educational visual series. Join us as we take a deeper look into the study of fungi, and the industry surrounding it. We will deep dive into the macro universe of mycelium to gain a better understanding of the micro world in which they exist. On this path we will highlight some unique...

youtube.com

Ah, sobre a genética tipo "enigma" não produz esporos mesmo. Aí é só ignorar a parte do swab e ir fazendo as clonagem

Ahh muito legal, tô com um pacote de swab de tubo, aquele que ao invés de vir no saquinho ele vem dentro de um tubo plástico, ou seja da pra fechar sem ao mesmo selar.
Porém fico com a mesma dúvida do @Maal . Essas linhagens que não produzem esporos, tipo o enigma, eu posso clonar ade eterno que não tem problema?

 

[GlubGlub]

Eu sempre pensei nesse negocio dos cogumelos que não produzem esperos. Então basicamente esses cogumelos que temos acesso, são oriundos de clonagens de um primeiro cogumelo inicial?


Enfim, sobre a cultura liquida que você mencionou, imagino qual seja o site que você adquiriu. No momento de minha vida não consigo comprar as coisas necessárias para produzir minhas culturas, e to num momento também de querer cultivar outras strains, então acabo adquirindo pela internet. Esse site, que não foi mencionado, sinto que sei lá, as CL's estão enfraquecidas... demoram bastante para surgir nos spawns, e nem é possível ver aquele "negócio" se mexendo dentro das seringas (não sei se é uma regra isso). Enfim, optei por procurar outros meios para adquirir uma cultura.

Mas, como o @SpiritualMind pontuou muito bem em outro tópico aqui no fórum, os comerciantes não tem obrigação de compartilhar CL's extraórdinarias, apenas vendem a cultura.

 

[Cabritinho]

os comerciantes não tem obrigação de compartilhar CL's extraórdinarias,

Realmente, os esporos que compro deles sempre vieram muito bons. Agora as culturas líquidas fico me questionando se já estão ''cansadas'', pois as que eu faço aqui com cogu fresco, faltam arrancar o arroz pra fora do pote

 

[SpiritualMind]

Mas como o @Cabritinho mencionou, após várias reproduções por clonagem, o micélio não enfraquece?
Lembro de já ter lido algo a respeito que após muitas reproduções, o ideal seria recomeçar dos esporos novamente...
Mas realmente, no caso do enigma que não produz esporos, só se mantem por clonagem, então deve fluir né?
A preocupação é realmente se dá pra manter a linhagem só por meio de clonagem, para qualquer variedade.

Vamos lá, temos que separar 2 coisas

1- Duplicação
2- clonagem

Na duplicação, o micélio tem tendência a ir enfraquecendo, basta imaginar um crescimento linear, onde o início do crescimento celular é no cruzamento das hifas mono e subsequente ela vai crescendo e ficando mais velha e mais longe. Agora, o qnt pode ser esse "comprimento", já não sei dizer. Mas como padrão, tentamos não ficar duplicando muito, fazendo cl de cl infinitamente ou placa de placa.

Na clonagem, já rola um pouco diferente, em alguns fungos, como o cubensis, há uma diferenciação entre as células do micélio e do corpo frutífero e com isso pode ser feita mais clonagem sucessivas.

Porém é muito importante, sempre que possível, fazer um cultivo via esporos e sem fazer a seleção/isolamento na placa. Pois é dessa maneira que verificamos se a strain ainda está estabilizada, e a partir daí continuamos o trabalho com ela. Cultivo de esporos é um reset

A Palavra chave é senescência...
Vou mandar um artigo sobre o assunto.

 

[Cabritinho]

A Palavra chave é senescência...
Vou mandar um artigo sobre o assunto.

Realmente, o artigo coloca que uma característica ecológica que predispõe a senecência é o hábito coprófilo (acredito que nosso cubensis seja assim, no mato a gente acha ele no cocô).

sempre que possível, fazer um cultivo via esporos e sem fazer a seleção/isolamento na placa.

Isso você se refere para por ex: Se eu tiver clonado um cogumelo com uma pinta roxa no chapéu, e após sua frutificação tiver nascido vários com pintas roxas, o ideal é tirar um cultivo com os esporos, para verificar se a maioria dos frutos irão manter a característica da pinta que eu quero, e assim, sucessivamente, garantir uma strain estabilizada?

Discussão interessante! A única forma de fugir da senecência então é com os esporos. Clonando do corpo de frutificação, ou duplicando uma placa petri, teremos senecência, logo, todas essas CL de Penis Envy disponíveis online provavelmente já estão ''enfraquecidas''.

--> A melhor forma de manter a longo prazo a strain Omni que não produz esporo, seria então, armazenar em água destilada estéril fragmentos de um fruto fresco, para garantir que o micélio ainda tenha ''metragens'' sobrando para crescer. E se ao invés de ficar reproduzindo ele sempre sobre o último cultivo, eu armazenar fragmentos ''mestres'' e mais novos, para que o micélio cresca de um material genético não tão velho?
--> A respeito da variedade Penis Envy por ex, poderia tentar cultivos a partir dos esporos, verificando se mantém as características, e obtendo um micélio ''fresco''? E a partir daí, uma parte vai pra armazenamento da ''cultura mestre'', e a outra eu reproduzo em grãos para verificar se com a clonagem eu mantive a característica do PE?

 

[SpiritualMind]

Isso você se refere para por ex: Se eu tiver clonado um cogumelo com uma pinta roxa no chapéu, e após sua frutificação tiver nascido vários com pintas roxas, o ideal é tirar um cultivo com os esporos, para verificar se a maioria dos frutos irão manter a característica da pinta que eu quero, e assim, sucessivamente, garantir uma strain estabilizada?

Isso, primeiro passo é fazer cultivo do clone (maiores chances de repetir a mutação); em paralelo eu gosto de fazer um cultivo dos esporos coletados da mutação (menor chance de vir o fenótipo, porém da ter uma ideia de como será o trabalho de isolamento)

No cultivo que eu fiz do VaCo (isolamento de mutação albina de minha autoria) , não usei os esporos no primeiro cultivo e consegui replicar com 100% de sucesso o padrão, porém isso no quer dizer que ha estabilidade. Por mais que eu continue clonando um cultivo após o outro. Ele ainda está na primeira geração, só vai mudar assim que eu fizer um cultivo via esporos, aí sim consigo ver a estabilidade, já que vó esporos eu aumento a variabilidade genética do micélio. Caso via esporos todos saiam com a mutação, eu ainda cultivo mais umas 5 gerações pra ter a certeza absoluta que a strain se manterá por mais tempo,e aproveito para ir refinando, clonando frutos maiores ou mais densos, assim faço o trabalho de melhoria.

Temos que tomar cuidado qnd cultivamos sucessivamente via esporos, pois a tendência é aumentar a variabilidade genética do micélio e com isso perder o fenótipo desejado, vide cogumelos dourados padrões, ou até mesmo certas strains tipo pênis envy cansadas ou com características diferentes da original que rolam por aí. Muito disso se deve ao fato dos cultivadores não fazerem o trabalho de isolamento, clonagem, restart "checagem" da estabilidade etc ...

Destaque - VACO "Verdadeiro Albino Columbian"

Salve galera! Um dos meus sonhos qnd comecei a me interessar pelo cultivo é isolar alguma mutação do zero. E hj estou mais perto de realizar, tô tão feliz e queria compartilhar com vcs esse pequeno passo, pq foi aqui no fórum que tudo começou pra mim e tenho um carinho muito grande por todos que...

teonanacatl.org

Nesse tópico, estou alimentando com todas as etapas do trabalho de isolamento dessa mutação espontânea que pelos cogumelos fui presenteado.
Da pra ter uma ideia do processo todo

Edir: sobre a conservação ainda

Micélio em tubo de ágar inclinado


Tecido coletado, armazenamento em água destilada ou óleo mineral

 

[Cabritinho]

etapas do trabalho de isolamento dessa mutação espontânea que pelos cogumelos fui presenteado

Muito interessante seu trabalho @SpiritualMind !
Eu sempre quis trabalhar com isolamento de mutações e exploração do potencial genético do cubensis, porém só agora consegui fazer um investimento em alguns suprimentos laboratoriais, uma panela melhor, tubos e placas petri, e pretendo iniciar meus trabalhos nessa área também!

Inclusive, criei um tópico sobre uma strain que estou cultivando, e penso que talvez tenha encontrado algo em potencial, você que tem mais experiência poderia dar uma olhada?

Enigma (Magic Popcorn)

Diário de teste, para clonagem e manutenção de strain.

teonanacatl.org