Insucesso na primeira experiência com carimbo de esporos

[gnomo_azul]

Salve!!

Realizei a coleta de esporos e fiz um carimbo. No dia seguinte, com agua mineral, e bastante assepsia, montei uma seringa com os esporos. Deixei hidratando na geladeira por 24 hrs e no dia seguinte inoculei em bolos pf-tek.

Mais de uma semana se passou e nenhum micélio apareceu. Para a seringa, usei a agulha que vem junto do kit, uma cinza. Lendo por aqui, vi recomendarem o uso de agulha com calibre maior, a na cor rosa. Minha hipótese é que tenha dado errado pelo uso dessa seringa cinza. Alguma outra coisa pode ter interferido no insucesso dessa inoculação com seringa de esporos?

Agradeço de antemão todo conselho que por ventura possa aparecer por aqui!! Gostaria muito de poder ter esporos infinitos e não precisar comprar culturas líquidas da internet




(Foto da agulha que usei para inocular)

 

[BlackCat]

Amigo, para esporos creio que o ideal seja você passar para placas de agar, selecionar e a partir dos clones fazer cultura liquida.
Cultura liquida de esporos pode dar muita contaminação.
boa sorte!

 

[gnomo_azul]

Amigo, para esporos creio que o ideal seja você passar para placas de agar, selecionar e a partir dos clones fazer cultura liquida.
Cultura liquida de esporos pode dar muita contaminação.
boa sorte!

Entendi, amigo!! Adquiri algumas coisas para começar a cultuvar com agar em placas de petri. Não sabia que era possível germinar esporos a partir do agar. Vou procurar conteúdo no forum sobre isso, acredito que o procedimento seria, a partir dos carimbos, raspar os esporos e inocula-los na placa de petri com a cultura nutritiva, certo?

Muito obrigada pela orientação e bom cultivo!

 

[Constantine]

Boa tarde!
Em relação a sua pergunta sobre a seringa de esporos: O calibre da agulha nada tem a ver a com o insucesso na germinação dos esporos. A não ser que esteja usando uma agulha para administração de insulina (creio eu que nem assim seria um problema), não teria problema nenhum para a passagem dos esporos pela agulha para que cheguem até o substrato.

Vários fatores podem ser mais relevantes que o calibre da agulha pra que o micélio não tenha germinado: Substrato dos bolos está insuficiente, temperatura errada, nível de umidade alto ou baixo demais, local de inoculação (aqui, caso tenha inoculado apenas no meio do bolo, pode demorar mesmo pra você ver o micélio nos cantos, por que você só vai ver quando o bolo tiver praticamente 100% colonizado, já que o micélio vai partir do centro pras bordas)... Então sugiro rever certinho o processo do zero pra ver onde pode ser o erro. Garanto que não vai ser a agulha.

Não sabia que era possível germinar esporos a partir do agar. Vou procurar conteúdo no forum sobre isso, acredito que o procedimento seria, a partir dos carimbos, raspar os esporos e inocula-los na placa de petri com a cultura nutritiva, certo?

Isso mesmo. Você pode raspar os esporos diretamente no ágar que deve funcionar. Lembre de usar uma still air box ou outras estratégias para manter o ambiente o mais estéril possível. Ágar é complicado de trabalhar devido a facilidade de contaminação, mas fazendo tudo certinho, vai ser sucesso.

Caso opte por usar o ágar, quando tiver com uma boa colonização, pode transferir direto para os grãos e aí fazer um cultivo de bulk, ao invés do PFTEK. Aí é só iniciar o ciclo de novo.

Sucesso no seu cultivo!

 

[BlackCat]

Dentro da minha limitação tento te ajudar para tentar obter mais sucesso kkkk

1: esporo -> agar


2: isolar esporo


3:cultura liquida


bom cultivo para ti, abs!

 

[gnomo_azul]

Boa tarde!
Em relação a sua pergunta sobre a seringa de esporos: O calibre da agulha nada tem a ver a com o insucesso na germinação dos esporos. A não ser que esteja usando uma agulha para administração de insulina (creio eu que nem assim seria um problema), não teria problema nenhum para a passagem dos esporos pela agulha para que cheguem até o substrato.

Vários fatores podem ser mais relevantes que o calibre da agulha pra que o micélio não tenha germinado: Substrato dos bolos está insuficiente, temperatura errada, nível de umidade alto ou baixo demais, local de inoculação (aqui, caso tenha inoculado apenas no meio do bolo, pode demorar mesmo pra você ver o micélio nos cantos, por que você só vai ver quando o bolo tiver praticamente 100% colonizado, já que o micélio vai partir do centro pras bordas)... Então sugiro rever certinho o processo do zero pra ver onde pode ser o erro. Garanto que não vai ser a agulha.


Isso mesmo. Você pode raspar os esporos diretamente no ágar que deve funcionar. Lembre de usar uma still air box ou outras estratégias para manter o ambiente o mais estéril possível. Ágar é complicado de trabalhar devido a facilidade de contaminação, mas fazendo tudo certinho, vai ser sucesso.

Caso opte por usar o ágar, quando tiver com uma boa colonização, pode transferir direto para os grãos e aí fazer um cultivo de bulk, ao invés do PFTEK. Aí é só iniciar o ciclo de novo.

Sucesso no seu cultivo!

Muito obrigada, irmão!!
Com sua fala, consegui pensar numa segunda hipótese: falta de oxigênio. As proporções da pf-tek que usei foram semelhantes com outros bolos que obtive sucesso na colonização a partir de cultura de esporos compradas da internet, então não considero um problema do substrato. Fiz furos mais na lateral do copo, na expectativa de avistar o micélio que surgisse mais facilmente. Numa dessas experiências, dois dos bolos custaram a aparecer o micélio, então fiz novos furos no papel alumínio que cobria o copo, e no dia seguinte já avistava micélio. Um dos bolos acabou contaminando. É um risco, mas foi uma alternativa que pensei a partir de sua fala, talvez seja falta de O. Realmente, compreendi que as seringas não foram determinantes!!

Gratidão e excelentes cultivos!!

Dentro da minha limitação tento te ajudar para tentar obter mais sucesso kkkk

1: esporo -> agar


2: isolar esporo


3:cultura liquida


bom cultivo para ti, abs!

Que material excelente, muito obrigada, será de grande valia!!!

 

[Constantine]

Muito obrigada, irmão!!
Com sua fala, consegui pensar numa segunda hipótese: falta de oxigênio. As proporções da pf-tek que usei foram semelhantes com outros bolos que obtive sucesso na colonização a partir de cultura de esporos compradas da internet, então não considero um problema do substrato. Fiz furos mais na lateral do copo, na expectativa de avistar o micélio que surgisse mais facilmente. Numa dessas experiências, dois dos bolos custaram a aparecer o micélio, então fiz novos furos no papel alumínio que cobria o copo, e no dia seguinte já avistava micélio. Um dos bolos acabou contaminando. É um risco, mas foi uma alternativa que pensei a partir de sua fala, talvez seja falta de O. Realmente, compreendi que as seringas não foram determinantes!!

Gratidão e excelentes cultivos!!

Imagina, estamos aqui para ajudar um ao outro.
Em relação aos contaminantes: Depois que fizer o furo no papel alumínio, não esquece de cobrir com fita micropore. Antes de fazer os furos para maior entrada de oxigênio é só esterilizar bem as tampas, a agulha (ou o objeto que for usar pra furar) e suas mãos, não tem erro. Acredito que tomando esses cuidados não vá sofrer com contaminações.

Um abraço!