Ola, estou voltando a ativa... com as reviravoltas da ida fiquei um bom tempo impossibilitada de cultivar.
Este cultivo é um experimento meu, não faço ideia do que vai acontecer.
Utilizo este meio para cultivo de bacterias, mas os fungos se dão muito bem nele, é um meio rico, para que diferentes microorganismos consigam crescer.
Meio Difco Tm R2A é composto por
Extrato de levedura
Proteose Peptona
Casaminoacido
Dextrose
Amido Soluvel
Piruvato Sodico
Fosfato de Potassio bibasico
Sulfato de Magnesio
Agar
PH 7,2
Fiz este teste no meio com agar e em agar ( meio liquido)
Hidratação dos esporos - (17/04/2012)
-Strains:
Peza
Thai Pink Buffalo
[EDITADO - Ecuador: § 1° É expressamente proibido pedir Esporos no fórum.]
- Esterelização
Limpei o Fluxo Laminar com Alcool 70%, liguei a luz UV por 1 hora.
Limpei todo o material com alcool 70% e coloquei no fluxo na luz UV por 20 minutos, menos o carimbo
- Material
ponteiras de 200 ul
Pipeta de 200
2 tubo facon de 15 ml esteril
2 tubos de agua para injeção de 10 ml esteril
luvas
Coloquei as luvas , joguei alcool 70%,
limpei a parte de fora do carimbo com alcool 70%
Identifiquei os tubos com nome da strain e data,
Abri o tubo abri o carimbo, com auxilio da ponteira esteril com filtro raspei o carimbo para dentro do tubo.
Abri o tubo de agua, com a ponteira joguei agua no carimbo, para tirar os residuis que não se soltaram., fechei os tubos, colequei Parafilm na tamapa para lacra-los
Coloquei no vortex para homogenizar
Embrulhei no papel aluminio e guardei em uma caixa de isopor por 12 horas.
OBS: Sempre cultivei em milho, e estou fazendo este cultivo com meu conhecimento de cultivo de bacterias, total diferente, aceito sugestões.
Inoculação (18/04//2012)
- Preparação da placa de petri
Placa de petri 15X90 decartavel esteril
meio R2A agar
autoclave
pipetador automatico
pipeta sorologica de 10 ml
Autoclavei a 121°C por 20 minutos o meio de cultura R2A agar e R2a liquido
esterlizei o fluxo com alcool e luz UV, depois os materiais por mais 20 minutos
Coloquei a placa aberta na luz UV por 20 minutos
coloquei as luvas, alcool 70% com o pipetador, coloquei 20 ml de meio em cada placa, como é um teste, fiz 1 placa para cada strain , total de 2 placas. Deixei as placas abertas no fluxo ate esfriarem.
fechei as placas e deixei em um canto no fluxo enquanto preparava o meio liquido.
- Preparação do meio liquido
2 tubos facon de 15 ml
+ mesmo material anterior
protocolo similar ao anterior
pipetei 10 ml de meio liquido em cada tubo, fechei e reservei ate esfriar.
Inoculação
alça esfregaço
pipeta de 200
ponteira de 200
parafiml
Placa:
Pipetei 200 ul da solução com agua e esporos na placa de petri, com auxilio da alça espalhei o liquido ate secar na placa, identiquei as placas com nome da strain e data. Lacrei com Parafilm, embrulhei no papel aluminio e coloquei em uma caixa de isopor, com termometro marcando 28°C
enquanto estiver com boa temperatura mantenho na caixa, caso mude, coloco ele na camera climatica, que sera muito arricado para mim.
Meio liquido:
Adicionei no tubo de meio peza 2ml da solução com esporos, lacrei com parafim
Adicionei no tubo de meio Thai 1,5 ml da solução com esporos, lacrei com parafilm
embrulhei no aluminio e para a caixa de isopor.
Queria incluir as fotos , mas não sei pq o sistema não esta me permitindo, se alguem puder me auxiliar.
Objetivos deste experimento:
- verificar se o micelio cresce neste meio
- verificar o periodo que se mantem vivo armazenado, para que possa utilizar para clonagem.
- verificar se existe a possibilidade de frutificação neste meio, essa posibilidade considero muito baixa.
- Futuramente, testar se o micelio aguenta ser congelado no processo de criogênia, em solução com glicerol, para construir um banco criogênico com os micelios.
Paralelamente com este experimento, estou cultivando em milho e arroz.
Este cultivo é um experimento meu, não faço ideia do que vai acontecer.
Utilizo este meio para cultivo de bacterias, mas os fungos se dão muito bem nele, é um meio rico, para que diferentes microorganismos consigam crescer.
Meio Difco Tm R2A é composto por
Extrato de levedura
Proteose Peptona
Casaminoacido
Dextrose
Amido Soluvel
Piruvato Sodico
Fosfato de Potassio bibasico
Sulfato de Magnesio
Agar
PH 7,2
Fiz este teste no meio com agar e em agar ( meio liquido)
Hidratação dos esporos - (17/04/2012)
-Strains:
Peza
Thai Pink Buffalo
[EDITADO - Ecuador: § 1° É expressamente proibido pedir Esporos no fórum.]
- Esterelização
Limpei o Fluxo Laminar com Alcool 70%, liguei a luz UV por 1 hora.
Limpei todo o material com alcool 70% e coloquei no fluxo na luz UV por 20 minutos, menos o carimbo
- Material
ponteiras de 200 ul
Pipeta de 200
2 tubo facon de 15 ml esteril
2 tubos de agua para injeção de 10 ml esteril
luvas
Coloquei as luvas , joguei alcool 70%,
limpei a parte de fora do carimbo com alcool 70%
Identifiquei os tubos com nome da strain e data,
Abri o tubo abri o carimbo, com auxilio da ponteira esteril com filtro raspei o carimbo para dentro do tubo.
Abri o tubo de agua, com a ponteira joguei agua no carimbo, para tirar os residuis que não se soltaram., fechei os tubos, colequei Parafilm na tamapa para lacra-los
Coloquei no vortex para homogenizar
Embrulhei no papel aluminio e guardei em uma caixa de isopor por 12 horas.
OBS: Sempre cultivei em milho, e estou fazendo este cultivo com meu conhecimento de cultivo de bacterias, total diferente, aceito sugestões.
Inoculação (18/04//2012)
- Preparação da placa de petri
Placa de petri 15X90 decartavel esteril
meio R2A agar
autoclave
pipetador automatico
pipeta sorologica de 10 ml
Autoclavei a 121°C por 20 minutos o meio de cultura R2A agar e R2a liquido
esterlizei o fluxo com alcool e luz UV, depois os materiais por mais 20 minutos
Coloquei a placa aberta na luz UV por 20 minutos
coloquei as luvas, alcool 70% com o pipetador, coloquei 20 ml de meio em cada placa, como é um teste, fiz 1 placa para cada strain , total de 2 placas. Deixei as placas abertas no fluxo ate esfriarem.
fechei as placas e deixei em um canto no fluxo enquanto preparava o meio liquido.
- Preparação do meio liquido
2 tubos facon de 15 ml
+ mesmo material anterior
protocolo similar ao anterior
pipetei 10 ml de meio liquido em cada tubo, fechei e reservei ate esfriar.
Inoculação
alça esfregaço
pipeta de 200
ponteira de 200
parafiml
Placa:
Pipetei 200 ul da solução com agua e esporos na placa de petri, com auxilio da alça espalhei o liquido ate secar na placa, identiquei as placas com nome da strain e data. Lacrei com Parafilm, embrulhei no papel aluminio e coloquei em uma caixa de isopor, com termometro marcando 28°C
enquanto estiver com boa temperatura mantenho na caixa, caso mude, coloco ele na camera climatica, que sera muito arricado para mim.
Meio liquido:
Adicionei no tubo de meio peza 2ml da solução com esporos, lacrei com parafim
Adicionei no tubo de meio Thai 1,5 ml da solução com esporos, lacrei com parafilm
embrulhei no aluminio e para a caixa de isopor.
Queria incluir as fotos , mas não sei pq o sistema não esta me permitindo, se alguem puder me auxiliar.
Objetivos deste experimento:
- verificar se o micelio cresce neste meio
- verificar o periodo que se mantem vivo armazenado, para que possa utilizar para clonagem.
- verificar se existe a possibilidade de frutificação neste meio, essa posibilidade considero muito baixa.
- Futuramente, testar se o micelio aguenta ser congelado no processo de criogênia, em solução com glicerol, para construir um banco criogênico com os micelios.
Paralelamente com este experimento, estou cultivando em milho e arroz.
