Olá a todos,
Meio ano atrás eu tentei fazer vários testes tentando clonar cogumelos selvagens mas sem sucesso, na época achei que era a melhor forma de conseguir um strain, mas todas as minhas tentativas contaminaram.
Há umas duas semanas saí para caçar cogumelos novamente e achei apenas um pequenino (oq já era esperado pois é época de estiagem) então resolvi fazer uma outra clonagem a partir da estipe e, como ele era muito pequeno para comer, eu tirei um carimbo de esporos em uma placa de Petri que eu tinha a disposição. A coleta não foi feita de maneira muito asséptica mas eu tomei os mínimos cuidados necessários (limpei a superfície com iodo e usei água filtrada para umedecer o chapéu).
A minha tentativa de clonagem falhou (novamente) então eu tentei usar os esporos que havia coletado.
Usei uma seringa de 20ml e água destilada para fazer uma seringa de esporos (depois percebi que 20ml era muito volume para aquela pequena quantidade de esporos e a solução ficou completamente transparente mas não fez diferença).
Usei a técnica "tradicional" pf (1,5 partes de farinha de arroz integral, 2 de água e 4 vermiculita) e fiz 7 frascos com aproximadamente 150g da cultura cada e deixei mais da metade do frasco com ar para não precisar me preocupar tanto com colocar filtro na tampa para o micélio respirar. Na tampa fiz um pequeno furo com um preguinho e martelo e tampei com fita micropore (a intenção não é ventilar e sim fazer um ponto onde poderia dar uma "injeção" com os esporos). "Autoclavei" na panela de pressão por uma hora com um papel alumínio sobre a tampa. Depois que tudo esfriou injetei ~2ml da solução de esporos em cada cultura levantando o papel alumínio o mínimo possível (não tomei os devidos cuidados de assepsia como usar uma glove box ou ao menos flambar a agulha de uma inoculação para outra pq achei que não iria dar certo).
Para incubação usei uma caixa de isopor com um termostato de aquário submerso em um frasco idêntico aos usados para a cultura.
Três dias depois eu saí de viagem e acabei ficando "preso" no lugar por conta de chuvas fortes que molharam a estrada de terra que era caminho. Fiquei mais 7 dias lá e voltei hoje, totalizando 10 dias de incubação e, para a minha surpresa, todos os bolos estão sendo colonizados SEM CONTAMINAÇÃO!
Fiquei muito feliz com os resultados e resolvi compartilhar. Vou mandando atualizações quando o bolo estiver completamente colonizado (pretendo fazer um casing para frutificar, se alguém tiver dicas eu agradeço, nunca cheguei a frutificar uma cultura antes).
Segue fotos do processo:
Meio ano atrás eu tentei fazer vários testes tentando clonar cogumelos selvagens mas sem sucesso, na época achei que era a melhor forma de conseguir um strain, mas todas as minhas tentativas contaminaram.
Há umas duas semanas saí para caçar cogumelos novamente e achei apenas um pequenino (oq já era esperado pois é época de estiagem) então resolvi fazer uma outra clonagem a partir da estipe e, como ele era muito pequeno para comer, eu tirei um carimbo de esporos em uma placa de Petri que eu tinha a disposição. A coleta não foi feita de maneira muito asséptica mas eu tomei os mínimos cuidados necessários (limpei a superfície com iodo e usei água filtrada para umedecer o chapéu).
A minha tentativa de clonagem falhou (novamente) então eu tentei usar os esporos que havia coletado.
Usei uma seringa de 20ml e água destilada para fazer uma seringa de esporos (depois percebi que 20ml era muito volume para aquela pequena quantidade de esporos e a solução ficou completamente transparente mas não fez diferença).
Usei a técnica "tradicional" pf (1,5 partes de farinha de arroz integral, 2 de água e 4 vermiculita) e fiz 7 frascos com aproximadamente 150g da cultura cada e deixei mais da metade do frasco com ar para não precisar me preocupar tanto com colocar filtro na tampa para o micélio respirar. Na tampa fiz um pequeno furo com um preguinho e martelo e tampei com fita micropore (a intenção não é ventilar e sim fazer um ponto onde poderia dar uma "injeção" com os esporos). "Autoclavei" na panela de pressão por uma hora com um papel alumínio sobre a tampa. Depois que tudo esfriou injetei ~2ml da solução de esporos em cada cultura levantando o papel alumínio o mínimo possível (não tomei os devidos cuidados de assepsia como usar uma glove box ou ao menos flambar a agulha de uma inoculação para outra pq achei que não iria dar certo).
Para incubação usei uma caixa de isopor com um termostato de aquário submerso em um frasco idêntico aos usados para a cultura.
Três dias depois eu saí de viagem e acabei ficando "preso" no lugar por conta de chuvas fortes que molharam a estrada de terra que era caminho. Fiquei mais 7 dias lá e voltei hoje, totalizando 10 dias de incubação e, para a minha surpresa, todos os bolos estão sendo colonizados SEM CONTAMINAÇÃO!
Fiquei muito feliz com os resultados e resolvi compartilhar. Vou mandando atualizações quando o bolo estiver completamente colonizado (pretendo fazer um casing para frutificar, se alguém tiver dicas eu agradeço, nunca cheguei a frutificar uma cultura antes).
Segue fotos do processo:
