1 Mês na incubadora sem sinal de micélio

[MrJottabe]

Gente, há mais ou menos um mês inoculei 4 copos usando a técnica pf-tek, por ser a mais fácil para iniciantes e etc. Fiz tudo da maneira mais estéril possível e guardei encubando numa caixa de isopor. Hoje fui abrir pela primeira vez e, para minha surpresa, não havia nenhum indício de colonização. Parecia até que eu não havia inoculado nada. O que pode ter acontecido? comprei a seringa de esporos de um vendedor confiável, então creio que não tenha sido problema com ela :/

 

[gldtn]

Ok, vamos por etapa meu caro.

Primeiro, você usou algum guia para o preparo dos bolos? Se sim qual foi? Resolveu aventurar e fazer alguma coisa diferente?

Outra coisa que precisamos saber, qual a temperatura que você mantenha a sua incubadora? E por fim tem fotos?

 

[ExPoro]

Não desenvolveu nem contaminação, então o procedimento foi asséptico mesmo.

Uma possibilidade é que não tenha esperado o suficiente entre o fim da autoclavagem e a inoculação, de forma que matou os esporos. Bem, também pode ser que o seu fornecedor tenha enviado uma seringa sem esporos dentro.

Responda às orientações do @gldtn para melhor elucidação, caro @MrJottabe. :coffee:

 

[MrJottabe]

Ok, vamos por etapa meu caro.

Primeiro, você usou algum guia para o preparo dos bolos? Se sim qual foi? Resolveu aventurar e fazer alguma coisa diferente?

Outra coisa que precisamos saber, qual a temperatura que você mantenha a sua incubadora? E por fim tem fotos?

Segui todos os passos da técnica PF-Tek que tem no canal "esporos no ar".

Mantive numa caixa de isopor, a temperatura externa variando de 25º (noite) até 30º (dia). Não fiz nada de diferente da técnica, e por fim, não tirei fotos, mas o substrato estava exatamente do mesmo jeito que coloquei. :/

Não desenvolveu nem contaminação, então o procedimento foi asséptico mesmo.

Uma possibilidade é que não tenha esperado o suficiente entre o fim da autoclavagem e a inoculação, de forma que matou os esporos. Bem, também pode ser que o seu fornecedor tenha enviado uma seringa sem esporos dentro.

Responda às orientações do @gldtn para melhor elucidação, caro @MrJottabe. :coffee:

A possibilidade de ter recebido uma seringa sem esporos é quase nula, pq analisei uma gota da solução no microscópio da faculdade e pude ver o que me pareceu ser esporos, mas não sei. Quanto ao tempo entre a autoclavagem e a inoculação, pode ser que tenha sido isso. 4 horas de diferença é pouco tempo?

E obrigado pela atenção de vcs, caros amigos gldtn e ExPoro

 

[tupy]

Não, não foi o tempo para a inoculação, isso não.
Olha, simplesmente pode acontecer, já tive esse problema também. Nem contaminantes nem fungos. No meu caso, suspeitei que o substrato estava muito seco, o que não favoreceu o crescimento de nada.

 

[ExPoro]

A recomendação é de 6 horas entre a autoclavagem e a inoculação. :coffee:

 

[MrJottabe]

Estou prestes a fazer outra inoculação. O substrato já está esterilizado, esperando esfriar. Agora, quando comecei a reunir os materiais para preparar a seringa, reparei que no rótulo da água destilada que comprei está escrito "água deionizada para autoclave". É a mesma coisa? Ou devo abortar a missão e conseguir água destilada? Tenho também 20 ml de água estéril para injeção. Funciona?

Grato a todos

 

[Ecuador]

reparei que no rótulo da água destilada que comprei está escrito "água deionizada para autoclave". É a mesma coisa? Ou devo abortar a missão e conseguir água destilada? Tenho também 20 ml de água estéril para injeção. Funciona?

As duas água servem, igualmente.

Assim como água de torneira, esterilizada.

 

[MrJottabe]

Olá amigos, fiz uma inoculação na madrugada do dia 30/10. Entre desligar a esterilização do sobstrato até a inoculação, esperei 7 horas. Inoculei 4 copos, 3 que guardei na encubadora e um "referência" de referência pra deixar do lado de fora e acompanhar o crescimento (maior).

No 8º dia, sem sinal do micélio no copo referência, não aguentei à curiosidade, pois tinha medo de acabar perdendo mais tempo como foi na minha segunda inoculação, cujo micélio nunca apareceu, e acabei abrindo a encubadora, e notei que nos 3 copos havia um pontinho branco, o micélio, de mais ou menos 1 cm de diâmetro.

Coloquei os copos de volta na encubadora e continuei esperando. Hoje, 10º dia, abri novamente e dois copos estavam como na segunda foto e um continuava com o pontinho de micélio do mesmo tamanho do 8º dia.

Notei também que o copo de referência começou a apresentar um pontinho de micélio um pouco mais sutil do que os copos apresentaram na primeira vez que abri a encubadora, no 8º dia.

Porque essa diferença de crescimento entre copos, alguém sabe?
paz

 

[ExPoro]

Porque essa diferença de crescimento entre copos, alguém sabe?

Provavelmente a genética de cada micélio que eclodiu. Também pode ser diferença de compactação na hora de por o substrato em cada copo. :coffee:

 

[tupy]

Olá amigos, fiz uma inoculação na madrugada do dia 30/10. Entre desligar a esterilização do sobstrato até a inoculação, esperei 7 horas. Inoculei 4 copos, 3 que guardei na encubadora e um "referência" de referência pra deixar do lado de fora e acompanhar o crescimento (maior).

No 8º dia, sem sinal do micélio no copo referência, não aguentei à curiosidade, pois tinha medo de acabar perdendo mais tempo como foi na minha segunda inoculação, cujo micélio nunca apareceu, e acabei abrindo a encubadora, e notei que nos 3 copos havia um pontinho branco, o micélio, de mais ou menos 1 cm de diâmetro.

Coloquei os copos de volta na encubadora e continuei esperando. Hoje, 10º dia, abri novamente e dois copos estavam como na segunda foto e um continuava com o pontinho de micélio do mesmo tamanho do 8º dia.

Notei também que o copo de referência começou a apresentar um pontinho de micélio um pouco mais sutil do que os copos apresentaram na primeira vez que abri a encubadora, no 8º dia.

Porque essa diferença de crescimento entre copos, alguém sabe?
paz

Acrescentando. Tem muitos fatores envolvidos: genética, temperatura, substrato, compactação, aeração, entre outros.

Não espere um desenvolvimento uniforme e sistematizado de igual maneira em todos os seus copos, ou em todos os seus cultivos com a mesma seringa de esporos.

 

[MrJottabe]

Obrigado amigos @ExPoro e @tupy <3