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Formas de Conservação de Culturas de Micélio

Pedro

Cogumelo maduro
Membro Ativo
14/07/2005
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Achei esse texto na net, originalmente era destinado a conservação de culturas em agar de espécies comestíveis, mas nada impede que seja usado com os Psilocibes ou outras espécies.

Fonte: http://paginas.terra.com.br/negocios/cogumelohobby/
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CONSERVAÇÃO

Devemos proceder a armazenagem das culturas filhas a fim de que quando for necessário possamos recomeçar o processo de produção dos cogumelos. Cada cultura deverá ser sempre armazenada em 5 tubos de ágar inclinado para assegurar que pelo menos um ou dois desses tubos se mantenham viáveis e possamos recuperar a cultura. Quando todos os tubos armazenados são perdidos por algum motivo , fica difícil obtermos uma nova cultura a não ser que recorramos a um banco de culturas ou aos amigos que também cultivam cogumelos.

Métodos de Armazenagem:
  • Repiques feitos a Intervalos regulares
  • Armazenagem da cultura sob óleo estéril
  • Armazenagem da cultura em água destilada estéril
  • Outros métodos de armazenagem

Repiques feitos a Intervalos regulares

Um dos métodos mais utilizados para armazenagem das culturas consiste em guardar as culturas em tubos de ágar inclinado e armazená-las na geladeira (sem congelar), fazendo a transferência das culturas para um meio novo a intervalos regulares. É um método muito trabalhoso pois devemos proceder o repique dessas culturas a cada 4 meses no máximo. Para um colecionador de culturas que possua várias espécies armazenadas podemos imaginar o trabalho necessário para fazermos o repique de centenas de tubos de uma só vez.

Após feitos os repiques dos tubos velhos para os novos , devemos deixar o micélio crescer em temperatura ambiente de 25 ºC ,observando sua sanidade e só então armazená-los no refrigerador. Existe ainda o problema de algumas espécies de cogumelos em que o micélio morre ao se fazer o resfriamento em geladeira , além do fato de que não podemos avaliar uma cultura quanto a sua produtividade após a mesma ter sido repicada várias vezes.

Quando usamos um meio de cultura muito rico em nutrientes para armazenagem , o micélio do fungo sofrerá degeneração após muitos repiques no mesmo meio de cultura , adaptando-se a esse meio rico e não mais produzindo cogumelos com a mesma qualidade quando for transferido para um composto. Quando se atinge esse estágio devemos descartar essa cultura e obtermos uma nova de um fornecedor de culturas.

Armazenagem da cultura sob óleo estéril

Nesse método fazemos a armazenagem da cultura em tubos de ágar , onde o ágar foi solidificado com o tubo na vertical , formando uma superfície horizontal e perpendicular à parede do tubo de ensaio.

Transfere-se , com a haste metálica ,um pedaço da cultura para esse tubo e deixa-se que o micélio cresça normalmente. Após ,cobre-se o micélio com uma camada de óleo mineral (Nujol) esterilizado em estufa. O uso do óleo tem a capacidade de limitar as trocas gasosas do micélio com o ar , inibindo o crescimento do micélio por diminuição do metabolismo do fungo .Para fazer o repique devemos extrair assepticamente um pedaço do ágar com o micélio aderido ,escorrer o excesso de óleo e transferir esse micélio para um tubo com ágar inclinado. Este método possui o inconveniente de produzir muita sujeira devido ao uso do óleo , podendo-se contaminar fácilmente a cultura, além do que , o repique da cultura pode demorar para reiniciar a crescer devido ao óleo.


Armazenagem da cultura em água destilada estéril

Um método que tenho usado e que tem dado bons resultados para as espécies citadas nesses site (quase todas), é o da armazenagem do micélio sob água destilada estéril e a temperatura ambiente. Para isso uso frascos com tampa rosqueada onde coloco 10 ml de água destilada e procedo a esterilização desses tubos em panela de pressão por 30 minutos , deixando esfriar até temperatura ambiente.

Faz-se entâo uma transferência asséptica de pedaços de ágar com micélio aderido para esses frascos (micélio proveniente de tubos de ágar inclinado). Esses tubos serão então armazenados em temperatura ambiente dentro de caixas de isopor . Esse método segundo dados da literatura , pode ser usado para armazenar culturas a temperatura ambiente por até dois anos sem necessidade de repiques. Pode ser usado com micélios de cogumelos que tem sensibilidade ao frio , pois não é necessário armazenar os tubos na geladeira, além de ser um método que não produz sujeira como o óleo mineral.

Outros métodos de armazenagem

Existem métodos muito eficientes usados por empresas que possuem grandes quantidades de culturas. Um deles é a armazenagem do micélio em nitrogênio líquido em baixíssimas temperaturas. Tem a vantagem de literalmente parar o metabolismo do fungo quando bem executado , mantendo as características da cultura por muitos anos , porém é um método caro e que consome muito nitrogênio líquido, necessitando de equipamento específico para armazenagem e técnicas complexas para sua execução.
 
Existe um medidor de eficiência de culturas que é chamado de Sistema de Valor "P" criado pelo Stamets. Ele indica por quantas inoculações em agar o micélio passou. Por exemplo: retirou-se um pedaço de um micélio e inoculou ele em um tubo de agar, esse novo micélio se chamará P2, que quer dizer que foi a segunda inoculação em agar a partir do micélio original.

Um valor máximo adotado pra se manter as características iniciais foi de 10 inoculações sucessivas em agar, após isso o micélio já começa a se degenerar, podendo até ocorrer uma mutação não benéfica. Quanto mais próximo do original o micélio estiver, mais cogumelos ele vai produzir.
 
Em meus testes sobre a eficiencia do uso de amoxicilina (antibiotico) e dextrose para aumentar a longevidade da cultura sem o risco de contaminaçoes ou enfraquecimento do micelio já consegui 5 meses de incubaçao sem perca de potencia ou sem o aparecimento de contaminantes. Para quem nao tem acesso ao agar eh uma saida um tanto quanto benéfica. O problema é soh achar a amoxicilina hehe....

Mas administrando em um meio de cultura de graos inteiros (sem ser arroz pelo amor de deus) uma dose certa de amoxicilina e dextrose voce possibilita o uso de mais agua no meio de cultura , deichando um "estoque" para o micelio se aliemntar pelo tempo que voce precisar. A necessidade de serem graos inteiros eh justamente para inibir a frutificaçao in vitro, que como todos sabem eh muito mais dificil de acontecer com graos inteiros (como milho de pipoca) sem a utilizaçao de casing.

O sabbath, meu camarada de cultivos, tinha varios tubos comk matrizes vivas em agar e todas elas sempre produziram bons frutos, ateh me enviou uma do parana com micelio de GT que produziu uma bela frutificaçao.

Paz!
 
me explique melhor psilocibec a quantidade de amoxilina, acucar, agua....

e o procedimento...
 
Bom a da amoxicilina depende da concentraçao do antibiotico (qtos mg de antibiotico por soluçao) dextrose vc pode colocar umas duas colherinhas de café, eh meio que a gosto mesmo pois nao eh prejudicial ao micelio, o antibiotico vc pode colocar de 30 a 40 mg por copo pf, é só nao exagerar em nada que dá certo.

Se tiver mais alguma duvida posta ai .

Paz, amor e muita poesia!
 
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