Duvida sobre contaminação.

[VIvi Westwood]

Salve!

Essa semana eu fiz minha primeira placa com o P. Cubensis , usei um meio agar-malt, sem suplementar com açúcar o vitaminas. Utilizei uma solução de esporos, embora saiba que não é a melhor forma de "eclodir" eles.


Não tenho experiencia com os cogumelos então fiquei em duvida se o que tenho parece com o micélio certo ou pode ser outra coisa.
Sei que eles podem crescer com morfologia isomórfica ou como um algodão... mas continuo em dúvida, rs.

Podem me dar uma opinião?
VW

Ps. Esqueci de citar, a estirpe é Transkei (South African), inoculado a 10 dias e incubado a 27°C.

VW

 

[SpiritualMind]

Sobre a forma de inoculação dos esporos acredito que essa seja uma das melhores forma de se fazer, se não a melhor (inoculação em placas de ágar) oq pode ter de diferente são as variações dos ingredientes domeio de cultura mas em suma, a técnica é basicamente a mesma.

Sobre a textura, me parece um micélio tomentoso "algodoado", mas vale a pena esperar ele desenvolver mais pra ver se vai surgir uma zona mais rizomorfica pra fazer uma transferência para outra placa, ou se não surgir, vc pode escolher a área que mais lhe agrada para fazer outras transferência. Lembrando que ambos tipos de micelio produzem cogumelos; nossa preferência no rizomorfismo é principalmente pela facilidade de vizualizar e selecionar monoculturas, que proporcionam uma maior uniformidade nos cogumelos produzindo e tbm ajuda nos trabalhos de estabilização das strains

 

[VIvi Westwood]

Opa @SpiritualMind
Obrigado pela resposta.

Sobre inoculação no agar, vi alguns lugares falando que não é a melhor opção, mas sinceramente não entendi o por que. Até acho que tem mais chances de contaminação, sendo um meio pouco seletivo, mas as outras opções também são. Como vc sugere fazer?

Eu não conseguia lembrar o termo tomentoso por nada! Ele continua crescendo assim, acho que vou transferir para outra placa e depois para uma cultura líquida ou spawn, não decidi ainda.
valeu.

VW

 

[Experimentalist]

Salve @VIvi Westwood !

Meu, que da hora! Vc já chegou logo mandando uma placa de agar na cara das inimiga!

Pô, queria muito trabalhar com agar, só não fiz ainda porque tenho medo de contaminar tudo fazendo ela na minha SAB humilde velha de guerra.

 

[SpiritualMind]

Opa @SpiritualMind
Obrigado pela resposta.

Sobre inoculação no agar, vi alguns lugares falando que não é a melhor opção, mas sinceramente não entendi o por que. Até acho que tem mais chances de contaminação, sendo um meio pouco seletivo, mas as outras opções também são. Como vc sugere fazer?

Eu não conseguia lembrar o termo tomentoso por nada! Ele continua crescendo assim, acho que vou transferir para outra placa e depois para uma cultura líquida ou spawn, não decidi ainda.
valeu.

VW

As alternativas de meios que o pessoal costuma usar é o water ágar, que é somente água e ágar mesmo, sem nenhuma nutrição, eu nunca testei, o funcionamento é fazer o esporo germinar e expandir a procura de alimentos no mesmo tempo que dificulta pros possíveis contaminantes; o outro método que eu costumo usar é o ágar saboraund com cloranfenicol, pq já elimino as bactérias da lista e ele da uma fortalecida no micélio tbm.

Qnd eu tô com esporos de um carimbo ou swab que eu mesmo produzi, uso o meio de cultura nutricional padrão, (bda; malte) só vou pro com antibiótico se apresentar alguma contaminação; agora se é um trabalho que preciso de mais cuidado (tipo swab de importação, ou carimbo que vem de outro cultivador) aí eu faço os dois meios de cultura, com e sem antibiótico.

Sobre os contaminantes, se for bactéria é bem suave de lidar; o foda é qnd o inimigo é outro fungo, geralmente se for inoculação por esporos, fica bem difícil de conseguir uma área limpa pra fazer um repique pra transferir, fora o medo de abrir uma placa e ter algum problema no lab; eu só abro placa com contaminação por outro fungo caso a placa seja de clonagem, pq nesse caso geralmente os contaminantes ficam separados. E só em extrema necessidade...senão é lixo, sem pensar duas vezes


Ah, é tanto nome estranho que acaba fugindo mesmo. Eu acho que seria legal vc fazer outras transferências e se vc tiver acessos a microscópio, vale a pena conferir pra ver se tem alguma estrutura estranha e tbm dar uma olhada se o micélio possui os ganchos.

 

[VIvi Westwood]

Opa!

Salve @VIvi Westwood !

Meu, que da hora! Vc já chegou logo mandando uma placa de agar na cara das inimiga!

Pô, queria muito trabalhar com agar, só não fiz ainda porque tenho medo de contaminar tudo fazendo ela na minha SAB humilde velha de guerra.

@Experimentalist, valeu! Eu fico a vontade para brincar com isso pq tenho bastante pratica com meios de cultura. Já brinquei muito com levedura cervejeira, leveduras selvagens e algumas bactérias, mas com cogumelos eu to bem perdido ainda.
Placas são um ótimo instrumento para selecionar e "purificar" amostras, agora, trabalhar cogumelos é bem mais chato do que com leveduras. A amostra já tem muita chance de vir com contaminantes.
Aqui em casa eu trabalho junto a um Bico de Bunsen, nunca tive contaminações antes, mas com o cogumelo apareceram umas coisas suspeitas. Acredito que dá para trabalhar melhor na SAB.

 

[VIvi Westwood]

@SpiritualMind, muito obrigado por dividir o conhecimento!
Isso tem um valor incrível especialmente vindo de quem entende tanto!

Sobre os contaminantes, se for bactéria é bem suave de lidar; o foda é qnd o inimigo é outro fungo, geralmente se for inoculação por esporos, fica bem difícil de conseguir uma área limpa pra fazer um repique pra transferir, fora o medo de abrir uma placa e ter algum problema no lab; eu só abro placa com contaminação por outro fungo caso a placa seja de clonagem, pq nesse caso geralmente os contaminantes ficam separados. E só em extrema necessidade...senão é lixo, sem pensar duas vezes

Então, essa era minha dúvida, fique com receio que pudesse ser outro fungo ou estar contaminado. Em outra placa, de B+AKM, cresceu algo diferente, no inicio achei que fosse algo como cobweb, no entanto o desenvolvimento foi lento e não ficou com aquela cara de teia, mas certamente não é cubensis também.
E se tratando de fungos, o risco de espalhar esporos é sempre grande...

Agora as placas de Transkei estão com a cara bem melhor, não parece ter contaminantes e alguns pontos pequenos estão com aspecto mais próximo de rizomorfo.

Ah, é tanto nome estranho que acaba fugindo mesmo. Eu acho que seria legal vc fazer outras transferências e se vc tiver acessos a microscópio, vale a pena conferir pra ver se tem alguma estrutura estranha e tbm dar uma olhada se o micélio possui os ganchos.

Pretendo fazer isso mesmo, vou tentar no fim de semana, antes que a hifa domine toda a placa.
Sobre o microscópio, é bom que eu tiro a poeira dele, tem uns anos que ele tá dormindo profundamente no armário. Você usa alguma coloração para as amostras ou dá para ver bem sem isso?
Fiquei em duvida sobre os ganchos, isso é para verificar se é uma hifa dicariótica? Como foi a partir de uma cultura de esporos, imagino que sim, mas agora to em duvida.
Pensando em fazer uma cultura líquida a partir da placa, teria diferença ser mono ou dicarióticas?

Eu preciso de uma boa revisão de micologia, vc tem alguma sugestão de material? Certamente não tenho mais nenhum libro de microbiologia! rs

Valeu!!!
VW

 

[SpiritualMind]

@SpiritualMind, muito obrigado por dividir o conhecimento!
Isso tem um valor incrível especialmente vindo de quem entende tanto!

Tamo junto, outros tbm dividiram esse conhecimento comigo.
Ah, eu nao entendo tanto assim, ainda tem muito chão pela frente, aproveito pra frisar que eu nao tenho nenhuma formação academica na area, tudo que sei foi aprendendo por experiencia e pesquisando por demanda, então as vezes posso estar falando besteira ou confundindo os termos cientificos etc...é bom sempre conferir em outros locais

Você usa alguma coloração para as amostras ou dá para ver bem sem isso?

da pra ver sem, mas eu gosto de usar a coloração "azul lactofenol"

Fiquei em duvida sobre os ganchos, isso é para verificar se é uma hifa dicariótica? Como foi a partir de uma cultura de esporos, imagino que sim, mas agora to em duvida.
Pensando em fazer uma cultura líquida a partir da placa, teria diferença ser mono ou dicarióticas?

isso, a presenção de gancho indica que o micelio "cruzou" e pode gerar os cogumelos. Geralmente por esporos seram dicariontes mesmo, a nao ser que de muita sorte ou faça todo o processo de diluição seriada.
uma hifa mono nao produz cogumelo, mas pra gente a mono é muito importante pq é o jeito mais facil de fazer um cruzamento, pegando duas monos e colocando juntas para ver se elas combinam.

Para fazer uma cultura liquida ou qq outro meio que sera usado para a produção, precisa ser dicarioticas


abaixo foto feita com o uso do reagente Azul Lactofenol, em destaque os tais "ganchos ou clamps" da strains Thai Pink Bufalo que eu to cultivando...
,

essa outra foto é do micelio de ODPE que eu postei esses dias, fiz essa imagem pra ver se realmene tinha os clamps.


Sobre material de estudo, eu tenho esse drive onde coloco todos os arquivos que eu encontro ou que passam pra mim. Tem bastante coisa

estudos fungos - Google Drive

drive.google.com

 

[VIvi Westwood]

Pô, queria muito trabalhar com agar, só não fiz ainda porque tenho medo de contaminar tudo fazendo ela na minha SAB humilde velha de guerra.

Algo que eu só lembre agora!
Acho que vale apena testar, mesmo que não tenha um ambiente prefeito e nem experiencia.
Sabe, o que a gente tem a perder?
Alguns reais? Agar culinário e placas de plástico não custam caro.
Tempo? Se der errado vc vai ter aprendido alguma coisa, vai sair ganhando.
Em ultimo caso, se achar que tem algo suspeito na placa, só joga ela fora sem abrir.

As vezes a gente tem que ser um pouco mais punk... Hey Ho, Let's Go!

VW

 

[VIvi Westwood]

Opa @SpiritualMind, foi mal a demora!

Tamo junto, outros tbm dividiram esse conhecimento comigo.
Ah, eu nao entendo tanto assim, ainda tem muito chão pela frente, aproveito pra frisar que eu nao tenho nenhuma formação academica na area, tudo que sei foi aprendendo por experiencia e pesquisando por demanda, então as vezes posso estar falando besteira ou confundindo os termos cientificos etc...é bom sempre conferir em outros locais

Esse é o único conhecimento que existe, só quem estuda e experimenta sabe das coisas... eu por exemplo tenho formação na área, mas não sei diferenciar a hifa que quero de um bolor , mas to correndo atras!
À quanto tempo vc brinca com cultivo?

Eu não fiz diluição da solução de esporos, ela estava pouco densa, mas dava para ver que tinha muitos grumos de esporos. Não conferi ainda, mas tenho quase certeza que serão dicariontes.
Hj fiz a replicação da placa, em alguns dias mando notícias.

essa outra foto é do micelio de ODPE que eu postei esses dias, fiz essa imagem pra ver se realmene tinha os clamps.

Eu vi o tópico, bem fera por sinal.
Valeu pela explicação e pelas fotos, tá bem didático como nas ilustrações dos livros.
Não conhecia a coloração por "azul lactofenol" vou procurar mais a respeito.

Sobre material de estudo, eu tenho esse drive onde coloco todos os arquivos que eu encontro ou que passam pra mim. Tem bastante coisa

Por fim, muito obrigado por disponibilizar o Drive, só passei o olho por cima, mas deu para ver que tem MUITO conteúdo.

Valeu
VW

 

[SpiritualMind]

Esse é o único conhecimento que existe, só quem estuda e experimenta sabe das coisas... eu por exemplo tenho formação na área, mas não sei diferenciar a hifa que quero de um bolor , mas to correndo atras!

E qnd a gente encontra algo e se apaixona, fica muito mais fácil! Mais ainda qnd pega pra fazer todos os dias.
Já já tu tá voando no tema!

À quanto tempo vc brinca com cultivo?

Eu cultivo há um pouquinho mais de tempo que essa conta, se não me engano devo ter começado no final de 2021. Eu tinha feito uma conta inicial nessa epoca mas aí eu apaguei depois de alguns erros e frustrações. Mas depois eu voltei, com o pé mais no chão e focado em fazer o básic, aquilo que já foi testado por outro, e parar de inventar moda, dica essa de um membro mais antigo do fórum (de qnd eu ainda inventava na outra conta)

Hj fiz a replicação da placa, em alguns dias mando notícias.

Vou ficar de olho no progresso!

Eu vi o tópico, bem fera por sinal.
Valeu pela explicação e pelas fotos, tá bem didático como nas ilustrações dos livros.
Não conhecia a coloração por "azul lactofenol" vou procurar mais a respeito.

Por fim, muito obrigado por disponibilizar o Drive, só passei o olho por cima, mas deu para ver que tem MUITO conteúdo.

Tem coisa ali que só li as "imagens"

Valeu!!

 

[VIvi Westwood]

Espero, em breve, estar voando no tema e dentro da minha mente também! rs

Eu cultivo há um pouquinho mais de tempo que essa conta, se não me engano devo ter começado no final de 2021. Eu tinha feito uma conta inicial nessa epoca mas aí eu apaguei depois de alguns erros e frustrações. Mas depois eu voltei, com o pé mais no chão e focado em fazer o básic, aquilo que já foi testado por outro, e parar de inventar moda, dica essa de um membro mais antigo do fórum (de qnd eu ainda inventava na outra conta)

Massa cara! Deve ter umas 1000 levas!
Eu recebi esse conselho no primeiro tópico que postei.
Pretendia começar com um monotube, mas segui as dicas o pessoal e fui mais devagar, testando e aprendendo.

Tem coisa ali que só li as "imagens"

Farei o mesmo!!!

VW

 

[VIvi Westwood]

Salve Salve,

Assisti um vídeo interessante sobre colonização em placas, vou deixar aqui caso algum outros membros se interessem pelo tema.
Obs. Acho que esse teste não tem muito "valor científico", aposto que se fosse repetido uma dezena de vezes os resultados seriam discrepantes, mas não deixa de ser algo interessante sobre qual pedaço do micélio propagar.



Sobre

Hj fiz a replicação da placa, em alguns dias mando notícias.

Minhas primeiras transferências tiveram problemas. Nesse caso, por total preguiça da minha parte em fazer os melhores procedimentos
Depois detalho melhor o que houve, mas já corrigi esse erro. Posto atualizações assim que elas se desenvolverem um pouco mais!

VW

 

[VIvi Westwood]

Salve.

Só para manter atualizado, talvez ajude algum membro mais para frente.
Tivemos dias de luta e dias de glória por aqui.

Eu costumo sem bem cuidadoso e preocupado com assepsia, mas estava com muita coisa para fazer esses dias e resolvi replicar só com a chama do fogão.
Na real, em algum lugar aqui dentro eu sabia que daria merda!!! E a preguiça cobrou seu preço!



Eu ainda tinha uma placa reserva, que não tinha sido exposta ao ar, usei ela para replicar novamente.
Dessa vez fazendo tudo direito!
Ontem fez 5 dias, não parece ter contaminações e as bordas estão mais rizomorficas do que a placa original.




O relato até o momento é esse, agora vem as novas dúvidas!

Eu não sei como é a taxa de crescimento dele, não sei se está crescendo bem ou se está lento, ele aumenta mais ou menos 1cm por dia, é isso?
O pedaço que usei para fazer a transferência ficou com um tom ligeiramente azulado, eu creio que seja uma reação de estresse do micélio, mas estou em duvida se não é uma contaminação. O que vcs acham?
Está parecido com esse da foto, só que não tão azulado.



Obrigado!
VW

 

[SpiritualMind]

As imagens não abrem

 

[VIvi Westwood]

Opa!
Obrigado por avisar.
Que vacilo meu! Descobri qual foi o problema, mas agora não dá mais para editar.

Na real, em algum lugar aqui dentro eu sabia que daria merda!!! E a preguiça cobrou seu preço!

Essa é uma das placas contaminadas, já foram descartadas.

Ontem fez 5 dias, não parece ter contaminações e as bordas estão mais rizomorficas do que a placa original.

Essa é a placa que está limpa e crescendo.

Está parecido com esse da foto, só que não tão azulado.

E esse é o exemplo do azulado que falei.


Obrigado, foi mal pelo erro!
VW