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Cultura líquida com soro glicosado - primeira tentativa

Poeiraviva

Hifa
Contribuidor
20/03/2019
401
15
Bom dia amigos do CM. Obrigado a todos pela ajuda desde já.
Então... iniciei no dia 24/03 um pequeno teste com um carimbo de esporos de South American. No início achei que estaria dando um passo maior que a perna mas decidi dar uma chance à sorte. Agradeço ao amigo @Ecuador por ter botado fé na técnica que estou testando. Porém, estou usando carimbo o que é bem desaconselhável. Quero deixar claro que usei o carimbo apenas por querer experimentar o uso do SG5%. Já que isso traria uma grande ajuda nas questões de esterilização e praticidade.

Vamos lá... no dia 24/03 comprei soro glicosado a 5% e águas destiladas (o SG5% é um material hospitalar estéril para aplicação endovenosa que consiste em água destilada e glicose a uma concentração de 5% - bem difícil de achar Mas como sou da área da saúde ficou mais fácil).
Alguns dias antes, construí uma gloverbox com uma caixa organizadora de 68L e fiz a assepsia completa no dia anterior ao uso com álcool 70% e lysoform.
Limpei bem as embalagens das seringas, gase e agulhas antes de colocar na gloverbox junto com as águas destiladas (flaconetes de 10ml cada) e o SG5% (comprei um de 500 ml).

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DILUIÇÃO:
Como já demonstrado em outros tópicos e tutoriais uma quantidade aceitável de açúcar (neste caso a glicose) seria de uma faixa até 4%. Nesse sentido, optei por usar uma concentração de 4% ( valores menores podem obter resultados melhores).
Aspirei 1 ml de água destilada para retirar os esporos do carimbo (usei cerca de 1/4 para fazer 2 seringas) e aspirei eles para dentro da seringa junto com mais 1 ml de água destilada e após isso aspirei 8 ml do soro glicosado. Resultado da diluição: solução a 4% de glicose com esporos dispersos. Sacodi bem as seringas 2 vezes ao dia quando possível e as condicionei dentro de incubadora a 28 C°.

Perguntas: se realizar a mesma técnica em um soro de 500 ml diluído e ir retirando conforme necessário, por exemplo:se eu retirar 10 ml da cultura e adicionar a mesma quantidade de soro diluído o micelio continua crescendo indefinidamente?

Hoje notei os primeiros sinais de micelio desenvolvendo dentro das seringas. Seguem as fotos:

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Vamos ver no que dá... Vou esperar mais uma semana e atualizar. Valeu pela força meus queridos!!
 

Anexos

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Última edição:
Se der certo, vai facilitar muito a produção de uma CL
Exatamente Galadhrim. Acredito que vai facilitar em muitos aspectos como:
- torna desnecessaria a esterilização da solução;
- não necessita de copo estéril para mistura dos esporos;
- utiliza glicose que é o açúcar em sua composição mais simples e de fácil metabolismo;
- dinheiro e tempo gasto com outros processos e produtos como dextrose, mel, karo ou água de coco.
- redução do tempo do processo que reduz ainda mais o risco de contaminantes.
- solução cristalina que ajuda na identificação de contaminações, enfim...

* Novamente quero deixar claro que o melhor não é usar carimbo para fazer a cultura líquida. Espero replicar a técnica usando pedaços de micélio saudaveis isolados.
 
Última edição:
ATUALIZANDO:

Hoje fazem 16 dias que as CL's então na incubadora. Pela manhã fui verificar e olhaa...
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acho que vem bem!
Parece que o crescimento está um pouco lento. Acho que a causa disso foi a concentração que usei.
Gostaria de fazer mais algumas com concentrações menores para comparar. Para isso, comprei 2 strains (ecuador e tksss) em CL pela internet. No entanto, me parecem contaminadas???.
20190409_082619.jpg "ecuador"- o micelio parece bem formado, porém,parece ter uma cor amarelada.
20190409_082545.jpg" TKSSS" - não vejo nem sinal de micélio. Apenas uma água turva.

OOH. E AGORA, QUEM PODERÁ ME AJUDAR?
 

Anexos

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ATUALIZANDO:
Dia 19 realizei 2 testes com as CL's que preparei. Inoculei 2 copos PF com a CL feita com carimbo de South American (concentração de 4%). O micélio estava disperso e crescendo, como nas fotos já postadas, a um ritmo lento. Esses copos, 2 dias após inoculados em glovebox e postos na incubadora a 27 graus, apresentaram sinais de contaminação verde logo abaixo dos pontos de inoculação - nem tirei foto pq não queria nem olhar na cara desse duende maldito kkkk.
Descartei os copos e as CL's pq concluí que o carimbo estava contaminado e recebeu uma ajuda da alta concentração de glicose da solução. Tirei essa conclusão do fato de que, outra CL, que fiz com uma cultura de Equador a uma concentração de cerca de 2%, está indo muito bem a princípio

20190421_112546.jpg copo de Equador
20190416_111506.jpg CL Equador a 2%

Acho que está comprovado que a solução funciona, ainda mais em concentrações mais baixas, mas irei fazer um novo diário de cultivo para acompanhar o crescimento desses meninos. Feliz Páscoa a todos. PAAZZ.
 
Pessoal, só pra deixar uma atualização final, os copos que inoculei com a CL estão crescendo muito rápido e o micélio é predominantemente rizomorfico. Fazem 7 dias desde a inoculação e é difícil acreditar a velocidade de crescimento.
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Anexos

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