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Protocolo de "Clonagem" + Dúvida

MYCOjackson

Hifa
Cadastrado
04/10/2016
7
5
34
Bom dia! =)

Eu comecei com o cultivo de cogus em casa faz uns 2 meses mais ou menos. Mas eu já fiz culturas de fungo em laboratórios.
E bem por isso me ficou uma dúvida:
Porque não é vendida nenhuma cultura líquida/ampola de P. cubensis?

Disso, segue-se o protocolo ue estou pensando em usar:
Materiais:
Dextrose/Mel/Xarope de GLicose/Extrato de Malte à 4%
Nutrientes de leveduras (Fosffato de Amônio Bibásico, Tiamina) à 0.125 g*
H2O2 à 3%
Água pra completar o volume desejado de solução.
(Eu sempre uso esse protocolo pra levedura. Essa solução, sem o peróxido, eu uso pra armazenar minhas leveduras de cerveja. Cada cepa pede uma concentração de caboidratos diferente, elas podem não sair de hibernação dependendo da concentração)

A lógica desse meio é que eu tenha uma receita estável e que permita a troca da fonte de carboidratos sem muito prejuízo (pra evitar senescência). O fosfato de amônio serve pra duas coisas: 1- Dar um start mais veemente na aclimatação do inóculo ao meio, 2- Complementação nutricional, 3- Dar mais condições de competição à cultura, uma vez que inoculada np substrato.

Então, pra 500ml de meio, eu uso 20ml de açúcar, 0.125 de nutrientes e só. Depois de esterilizado, eu inoculo o fermento hidratado e deixo incubar à temp ambiente por uma semana (nem sempre com agitador). Na verdade eu geralmente nem jogo na PP, pq eu pq eu fervo o meio por 15 min e inoculo uma população relativamente grande. Nunca contaminou.

Inóculo: Enxerto de outro bolo.

Agora com P cubensis o terreno é nebuloso pra mim.
Será que esse meio de cultura dá certo? Não tá com muito ou pouco açúcar pra inocular?
Estava pensando em inocular um enxerto de um bolo que tá frutando. Algo como 2mm de superfície. Rola? Pergunto isso pq a maioria da galera inocula esporos.

De todo moo acho que é isso aí. Se ppintar mais coisas eu posto aqui. =) Obrigado pela atenção
Abçs
p.s.:
*: Essa solução me deu um trabalho fodid0. A concentração recomendada é de 15-30g/hl de mosto para vinho. Eu usava pros meus meios de Saccharomyces uma concentração que ficava em torno de 25g/hl. Só que eu fazia 5L de meio por batelada. Agora, como o produto vem em pó e eu não tenho uma balança boa, o que eu fiz foi usar diluição. Eu fiz uma solução com 12.5g em 100ml, depois dilui de 1/10 duas vezes (pega um ml e põe em 100 de água). Inoculei um bolo com 1ml dessa solução pra cada furo de agulha, mas isso é papo pra outro tópico.
O Produto é esse aqui http://www.indupropil.com.br/produtos/0,16684_ativante-de-fermentacao-1kg ! Eu o utilizava muito em hidromel e pra meio de cultura pra armazenamento.
 
Meu caro... Nesse tempo que estou aqui envolvido com o mundo dos cogumelos, já vi muito professor pardal inventando mil e uma técnicas super, mega, hiper sofisticadas. O problema é que no fim, o modo mais simples sempre ganha. A Navalha de Occam aqui ultrapassa os conceitos meramente teóricos...
Então eu costumo sempre dizer, menos é mais!

Já fiz varias CLs com muito material nutritivo, e não foi tão bom. Com menos (cerca de 100ml de agua e 1 grama de Dextrose) obtive um resultado esplendido. Tanto que atualmente tenho uma CL em minha geladeira de 2 anos de idade, e acabei de aniversariar um bulk feito a partir dessa CL.

Sem querer te desanimar, e com todo respeito ao seu conhecimento técnico, mas indico ir pelo mais simples cara... Agua + Dextrose e só!! Não tem mistério.
H2O2 vai virar virar H2O antes mesmo de esterilizar a CL.
 
Olá, @PsychoEvie !

Valeuzão pelo feedback. Então, eu também sou partidário do "não reinvente a roda". Mas pra mim a diversão está também em testar coisas novas, tentar otimizar parâmetros e etc etc etc. Eu sempre faço tudo com uma 'amostra controle', bom saber que teu método simples funciona bem, vou adotá-lo como controle à partir de agora!! =)

Mas aí vai a pergunta... Eu faço muita ciência de garagem (fora do trabalho), e a gente sempre usa ingredientes alternativos. Essa Dextrose a que vc se refere, é a dextrose 'P.A.zona, pra lab' ou pode ser a de maromba? Suplmento alimentar mesmo?

Mudando um pouco de assunto, mas indo pra insumos... Vocês sabem onde arrumo agar bacteriológico por um preço em conta?

Valeu pela iluminação! =)
Abraço
 
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