Problemas com colonização dos bolos...

[xnoob1992]

Boa noite, boa tarde, bom dia.. enfim..
Gostaria da ajuda dos caros colegas do fórum, já confesso que esse é um começo de cultivo já fracassado, e também é a terceira vez que tento e não tenho sucesso no cultivo. me dediquei realmente mas está dificil. até chegou uma hora de tanto eu ler o fórum, houve divergência de informações, mas sempre segui as informações do mais experientes e sábios do fórum...
Fiz o básico.PF Tek. segui todos os passos. Na primeira tentativa faltou água na panela de pressão. reconheci o meu erro e tentei novamente. Agora eu fiz a esterilização tudo certinho na pp .
Porém os meus bolos não aparecem o micélio. Já faz algum tempo que inoculei eles. Foi no dia 18/09. Vejo que quando há sucesso na esterelização aparecem sinais de micélio com menos tempo. Ok. Fiz duas seringas da strain ecuador na total segurança dentro de uma glove box, com alcool 70, lysol, água sanitária.Minha mãe fala que meu quarto parece um laboratório hahaha, todas a precauções recomendadas para o sucesso. mas ai está os bolos e nenhum sinal do micélio. Segui a receita básica de vermicula + arroz integral levemente moído. vi que isso pode acontecer com seringa mal hidratada,que resulta em colonização inexistente, mas esperei 3 dias para ela hidratar antes da inoculação. A minha pergunta é: onde está o possível erro que estou cometendo? A temperatura da incubadora sempre está em 28 a 29 graus, nunca acima. sempre fechada e no escuro. Muita água no substrato?o que será que está acontecendo, acompanho varios diarios de cultivos,posts e a biblioteca, e realmente segui a cartilha, não fiz nada de diferente, e não consigo achar aonde estou errando. Postarei algumas fotos para vocês poderem analisar.
Ficarei eternamente agradecido a quem querer trocar uma ideia nesse post aqui.
Muita paz a vocês todos que leram com atenção e me perdoem pelo enorme texto.

 

[Salaam`aleik]

O substrato parece ok, mas só parar tirar a dúvida, você colocou água na receita, certo? Proporção 2:1:1, vermiculita, arroz e água.

Está 100% certo de que não tem micélio? Quando começa ele é um tanto transparente, quase uma fumaça no copo.

Se em mais 1 semana não aparecer nada, eu suspeitaria dos esporos/seringa... Não é normal não crescer nada nos copos, principalmente em uma seringa de iniciante (que ou vai ter cubensis, ou ). Consegue descrever melhor como foi esse processo de confecção das cujas?

E quanto tempo tem o carimbo? Hidratação só parece ser um problema para carimbos bem velhos (para mais de ano).

 

[xnoob1992]

Saudações Salaam `aleik, muito obrigado por ter interagido.
Usei a receita 2.1.1, usei um copo de confeiteiro com as medidas. e a agua fui colocando até eu ver que escorria uma gota da mistura, o carimbo não é velho, segundo a pessoa que me forneceu. Usei a técnica básica da seringa psilocyber. Comprei duas seringas na farmácia. fiz o procedimento de colocara agua mineral fervendo, e executando os passos de tirar e colocar a água 3 vezes, e na ultima deixar a agua e a seringa esfriar para prosseguir com a raspagem do carimbo em um pote. o pote deixei fervendo na panela e depois coloquei dentro da glove box usei o lysol e alcool 70 nele. acondicionei a seringa em uma papel aluminio desinfetado com alcool 70 e em uma vasilhame de sorvete na geladeira. esperei alguns dias antes de incoular os copos. fiz todos os procedimentos de confecção da seringa dentro da glovebox previamente borrifada com lysol e desinfetada com agua sanitária. os outros copos que nao aparecem da outra vez nao apresentaram micelio e nenhum tipo de contaminação. . muito menos mau cheiro e o arroz em perfeito estado.(foram exatos 35 dias pra eu recomeçar esse agora). Essas fotos foram feitas ontem. eu abro muito pouco a incubadora, deixo eles quetinhos lá. e sempre estou conferindo a temperatura e sempre está na media.

 

[Cantaro]

o pote deixei fervendo na panela e depois coloquei dentro da glove box usei o lysol e alcool 70 nele.

Como assim? Você pode explicar com mais detalhes como foi a esterilização do substrato?

 

[Salaam`aleik]

fiz o procedimento de colocara agua mineral fervendo, e executando os passos de tirar e colocar a água 3 vezes, e na ultima deixar a agua e a seringa esfriar

Esfriou completamente? A água não pode estar a 40 °C ou mais (morna), senão mata os esporos.

o pote deixei fervendo na panela e depois coloquei dentro da glove

Deixou o pote com água esfriar dentro da glove por quanto tempo?

fiz todos os procedimentos de confecção da seringa dentro da glovebox previamente borrifada com lysol e desinfetada com agua sanitária.

Deixou a glove descansar quanto tempo depois de borrifar o lysol? O pote estava lá dentro aberto quanto você borrifou?
O spray forma um aerossol bem fino, que se não dissipado pode desinfetar o carimbo ou se depositar no pote e na água, tornando-os impróprios.
O mesmo vale para o contato com água sanitária - e você usou pura ou diluída? Água sanitária pura é muito forte, normalmente dilui-se 1 parte em 10.

E como foi o processo de inoculação, em relação a limpeza/esterilização dos pontos de inoculação? Os bolos estavam completamente frios quando inoculados? Esfriou por quanto tempo? Potes frios por fora ainda podem estar quentes no miolo.

 

[xnoob1992]

Como assim? Você pode explicar com mais detalhes como foi a esterilização do substrato?

Como vai Cantaro? tudo na paz? então ficou um pouco sem definição em que me referi, no caso foi apenas o potinho de vidro que usei para misturar os esporos e puxar com a seringa. o substrato esterilizei na pp por 1 hora.

 

[xnoob1992]

Esfriou completamente? A água não pode estar a 40 °C ou mais (morna), senão mata os esporos.

Sim, esperei esfriar bastante, vi que a agua quente mata os esporos, esperei esfriar completamente para dar prosseguimento na confecção.

Deixou o pote com água esfriar dentro da glove por quanto tempo?

Não me lembro se deixei esfriar muito, pode ser que tenho colocado pote quente, não vou me recordar, lembro que tentei deixar o minimo de tempo possivel fora da glove box.

Deixou a glove descansar quanto tempo depois de borrifar o lysol? O pote estava lá dentro aberto quanto você borrifou?
O spray forma um aerossol bem fino, que se não dissipado pode desinfetar o carimbo ou se depositar no pote e na água, tornando-os impróprios.
O mesmo vale para o contato com água sanitária - e você usou pura ou diluída? Água sanitária pura é muito forte, normalmente dilui-se 1 parte em 10.

E como foi o processo de inoculação, em relação a limpeza/esterilização dos pontos de inoculação? Os bolos estavam completamente frios quando inoculados? Esfriou por quanto tempo? Potes frios por fora ainda podem estar quentes no miolo.

Estava tão focado no sucesso da "missão" que eu acho que tenho exagerado no lysol e até mesmo na agua sanitária.Devo ter criado uma nuvem de lysol. a agua sanitaria eu dilui bastante em água. usei um vasilhame borrifador. agora eu estou percebendo que eu posso ter tido excesso de cuidado... será isso?
A glove box eu deixei descansando um pouco.. devido ao spray de lysol ser inflamavel, nao poderia acender um insqueiro dentro pra flambar a agulha entre as inoculaçoes, pois causaria uma explosão. eu esterilizei os bolos na parte da noite, e só fui abrir no outro dia a noite, ficou 24 horas esfriando a panela. passei alcool 70 em cima dos pontos de inoculação e nao toquei a seringa em lugar algum, apenas a flambei. já deixei cortado uns pedaços de micropore para tampar logo após a inoculação.

 

[Salaam`aleik]

Pode ser o lysol sim, se você borrifou com o pote + água lá dentro, ou não deixou a nuvem baixar. Lembre que os esporos também são microoganismos, e o lysol é feito para matá-los tão bem quanto aos contaminantes.

Eu só uso lysol na glove (em uma leve borrifada) se colocar o pote com tampa lá dentro, e deixando descansar bastante tempo (enquanto o pote esfria, o desinfetante entra em ação e baixa a poeira). Na prática acabo só limpando a glove com água sanitária mesmo, e os utensílios com álcool.

Seu procedimento de assepsia pelo visto está sendo eficiente, já que também não há contaminação nos bolos. Mas talvez esteja eficiente demais

 

[xnoob1992]

Obrigado Salaam, vou maneirar no lysol, devo ter espirrado um bocado, agora na proxima inoculação vou usar um carimbo novo, e desinfetar os potes e os utensilios só com alcool 70. vou tentar simplificar o uso da gloove e nao abusar da esterilização. vi aqui no forum alguém que sugeriu o uso de um pote de coleta para exames, assim descarto o uso do recipiente de vidro . Nesse final de semana já irei fazer outra substrato. talvez a preocupação de mais em contaminantes acabou atrapalhando mesmo. creio que só pode ser isso. ou algum duende está zikando o inicio do meu cultivo Abraço!!