Opa que bom que ajudou... Eu tenho uma Glove e neste caso não teria problema porque posso fazer o
agar dentro dela e colocar o agar na placa de petri e ate deixar sem tampa ate secar tudo.. Ja coloquei placas de petri abertas na glove durante 12hs e não tive contaminação muito confiavel.. Filtro HEPA H13 e Lampada UVC 11w Mas.... O problema e depois. se eu lacrar ela com parafilm ou filme pvc e mandar pra PP vai estourar por causa da pressão. Se eu deixo aberta eeenche de agua na tampa
Arrisco fechar com micropore?? E depois de esterilizada abro a PP na glove e troco o micropore pelo parafilm? O micropore conseguiria fazer essa troca gasosa na boa sem deixar entrar muita agua? ou no final de historia vai ta tudo cheio de agua do mesmo jeito kkkkk
Oi Milla, vou recolocar as minhas idéias agora que entendi melhor o seu processo e ver se te ajudo um pouco mais. Porém antes vou fazer algumas considerações:
1- Nunca coloque parafilm ou filme PVC em uma PP ou em autoclave. Não são materiais que aguentam o calor e vão acabar derretendo e vaporizando componentes extremamente tóxicos na atmosfera da PP e na sua casa também.
2- Mesmo que você lacrasse uma placa de Petri com um desses materiais ela não estouraria com a pressão por dois motivos: um porque nenhum desses materiais conseguiria vedar totalmente a placa e outro por que a pressão fica igual em toda a PP e dentro da placa de PETRI, de forma que se você colocar um frasco rosqueado dentro de uma autoclave ou PP e esterilizar, ele só vai estourar se você soltar a pressão muito rápido algo que nunca se deve fazer.
3 - Lembre-se que depois que a panela ou autoclave começa a esfriar a ponto da sua pressão voltar ao normal, ela começa a criar um vácuo e puxar contaminantes para dentro ou seja, existe um timing todo correto para fazer o procedimento de forma correta minimizando os riscos de contaminação. Por isso um vasilhame fechado com rosca ajuda muito!
4 - Sobre esse assunto das tampas rosqueadas ou não na esterilização o Stamets é a favor de um aperto quase apertado, e o Dave Sumerlin, seu braço direito e chefe de toda operação deles, prefere rosquear e apertar. Se for usar uma garrafa de vidro recomendo que deixe a tampa com uma leve folga e cubra com papel alumínio apertado em volta da tampa. Ou se tiver acesso aos filtros sintéticos pode cortar uma rodela que caiba na tampa da garrafa e fazer um furinho na tampa. São várias as possibilidades, se tiver dúvidas me pergunte!
5 -Outro problema de esterilizar placas de petri já com agar é que o PDA vai ferver, e a meleca vai vazar na sua PP o que será um problema em vários níveis posteriormente.
Por isso a minha sugestão é que você esterilize a quantidade de PDA que vai usar em uma garrafa de bebida com pescoço longo e tampa rosca ou um frasco de erlenmeyer de polipropileno autoclavável em uma PP ou autoclave por 30 a 40 minutos (dependendo do agar que usa) após a pressurização. (Lembrando de no começo deixar a válvula aberta para todo o ar frio poder sair.) e depois de desligar aguardar até 2 horas dependendo do seu equipamento para que a pressão baixe bastante e o agar não ferva quando vc tirar a pressão e abrir a PP.
Entenda que esse processo sem um manômetro que te mostre a pressão vai ser sempre um tiro no escuro e talvez você tenha que errar algumas vezes para pegar o tempo do seu equipamento.
Tire o resto do vapor com a panela já menos quente, abra a PP e coloque a garrafa com o PDA esterilizado e cozido dentro do seu glovebox. Esterilize a garrafa com álcool isopropílico ou etílico a 50 - 70 %.
Um jeito bom de saber quando colocar o agar nas placas de petri é a partir do momento que você consegue segurar a garrafa sem queimar a mão.
Depois a minha sugestão é que use Placas de Petri descartáveis pré esterilizadas que vem em pacotes de 10 e podem ser abertas dentro da glovebox, coloque 1/3 da sua altura com o agar esterilizado, tampe e enrole com o parafilm.
Deixe elas endurecerem e guarde-as em um zip-lock ou na própria embalagem que elas vem e quando for usar basta limpar com alcool, tirar o parafilm, mais um alquinho só pra garantir e pode inocular ou transferir o que quiser, parafilm e
incubadora!
Acredito que esse processo acabe sendo mais viável, seguro e eficaz e resulte em menos bagunça e contaminações.
Faz tempo que não uso uma glovebox, mas acredito que seja possível seguir esse processo com boa chance de sucesso.
Boa sorte!
Agarikon
