Completo 1º Cultivo - Cambodian - PF TEK

Olá pessoal! Finalmente estou iniciando meu primeiro cultivo. Irei iniciar esta narrativa com o preparo da seringa, perdoem-me, mas pretendo ser o mais detalhista possível:

16/06/2016 - Fiz uma mistura de 2 colheres de chá de água sanitária para 2 copos americanos de água mineral. Após isso borrifei o ambiente da Glovebox e também dentro dela. Passei um lenço para retirar o excesso e a fechei para tomar um banho com um sabonete bactericida. Retornei e fiz o processo novamente e limpei com guardanapos (fiz esse processo umas 4x ao todo). Após isso coloquei uma luva e uma máscara cirúrgica para colocar os materiais necessários na Glovebox. Após um certo momento perdido, abri o pote de coleta esterilizado e acrescentei água destilada. Meio desajeitado, abri pela primeira vez o carimbo de Esporos. Raspei com o maximo de cuidado possível com a ponta de uma tesoura previamente esterilizada com álcool 70 uma pequena parcela dos Esporos, cerca de 1/8 do carimbo. Fechei o carimbo de forma completamente amadora e tapei o pote. Após isso retirei a seringa de 20ml do pacote e coloquei a agulha. Para minha surpresa a agulha não era tão grande quanto o desejado. Retirei a agulha e puxei os Esporos umas 3 vezes para que a mistura ficasse incolor. Puxei a mistura apenas com a seringa e coloquei a agulha novamente com tampa. Após isso abri a Glovebox, retirei a seringa, a enrolei em papel alumínio e coloquei na geladeira (na gaveta abaixo do congelador) para hidratação por 24h. Os carimbos foram protegidos por uma folha de papel A4 e colocados em uma vasilha enrolada com plástico filme. Amanhã, dia 17, pretendo inocular os primeiros copos.

 

[ExPoro]

Legal começar pela seringa, assim podemos observar todo seu procedimento com mais detalhes e evitar erros para aumentar as chances de sucesso do cultivo.

na gaveta abaixo do congelador

Quanto a isso, pode congelar o conteúdo da seringa nessa gaveta de frio extra. Melhor colocar em qualquer outro lugar na geladeira. :coffee:

 

[Spiritualcybe]

Legal começar pela seringa, assim podemos observar todo seu procedimento com mais detalhes e evitar erros para aumentar as chances de sucesso do cultivo.


Quanto a isso, pode congelar o conteúdo da seringa nessa gaveta de frio extra. Melhor colocar em qualquer outro lugar na geladeira. :coffee:

Sim, Exporo! Espero que com a ajuda de vocês tudo dê certo. O que me preocupa um pouco é a questão da assepsia, pois mesmo jogando água sanitária pra todo lado e passando álcool 70 (fazendo uma bagunça danada), sempre fica aquela neura, ainda mais que trabalhar na minha Glovebox é uma luta. A respeito da seringa, foi o que pensei mesmo, mas acabei de conferir e está tudo nos conformes! Abaixei a potência de congelamento para o mínimo justamente para evitar isso! O fato de colocá-la envolta em papel alumínio e dentro de uma sacola parece ajudar também a manter a temperatura. Ela vai ficar por lá cerca de 24h, pois irei preparar os copos de noite. Serão 8 copos no total.

 

[Abzû]

Boa sorte no seu cultivo irmão!
Vamos acompanhar. :coffee:

 

[Zorak]

Boa sorte, pra nós ! cultivadores de primeira viagem.
Acompanharei seu cultivo junto com o meu

 

[Spiritualcybe]

Pessoal, muito obrigado pelo apoio! Acompanhando seu cultivo também, Zorak! Segue uma atualização.
17/06/2016 - Lavei os copos novos de Whisky que comprei. Borrifei água sanitária no ambiente e na superfície do local de trabalho. Após isso, borrifei álcool 70 no vasilhame onde mantive o substrato. Foram 2 copos de água, 1 copo e meio de farinha de arroz (arroz integral triturado no liquidificador) e 4 copos de vermiculita. O copo utilizado como medida foi o de Whisky. Misturei bem o substrato e preenchi os copos cuidadosamente, limpando a base com excesso de vermiculita e após isso colocando a camada de vermiculita seca até próximo à boca do copo (+/- 1 dedo indicador). Após isso lacrei os copos com fita isolante e papel alumínio, após a fita acabar, concluí com durex. Fiz 4 pequenos furos nas 4 extremidades dos copos e coloquei mais uma camada de papel alumínio em cima para que no momento de abertura da PP o substrato não entre em contato com o ar. Coloquei na panela com um pano e água até a metade dos 3 copos que nela couberam. Estou aguardando no momento a conclusão da esterilização e quando ela esfriar irei inocular (hoje ou amanhã). Uma dúvida é se posso inocular os copos msm com a seringa gelada.

Bônus: meu tio chegou aqui puto comigo pg c eu gosto de tomar chá cogumelos e com que objetivo eu tava fazendo isso (minha vó estranhou minha movimentação e falou com ele), ela chegou aqui e eu tava de máscara cirúrgica . Disse que era Shimeji e ele me pediu pra mostrar, enfim, o Shimeji não é muito diferente do Cubensis kkkkk! Ele saiu meio puto, mas acho que acreditou +/- na história.

Ps: se houver algum erro de digitação me perdoem, pois estou no celular! Quando estiver no PC eu conserto.

Atualizando: esterilização concluída -- > panela ficou no fogo alto até tomar presssão e após isso deixei por 40min em fogo médio. Abrirei quando esfriar. Senti um pouco de água borbulhando ainda no final, espero que não tenha queimado ou estragado nada. Em breve trarei notícias!

 

[Malahov]

Uma dúvida é se posso inocular os copos msm com a seringa gelada.

Pode sim!

 

[ExPoro]

concluí com durex

Depois informa como eles ficaram com a autoclavagem... :coffee:

 

[Spiritualcybe]

Atualização - 18/06 -
Abri a panela de pressão, o pano estava levemente queimado, mas os copos estavam intactos. Peguei a seringa na geladeira e preparei a Glovebox para a inoculação. Após esterilizada, coloquei todos os materiais dentro. Para minha surpresa, a caixa que utilizei para fazer a Glovebox era muito pequena e ficaria muito difícil de fazer o processo de inoculação. Desisti da Glovebox e tive que fazer na minha bancada mesmo. Deitei a Glove de lado e borrifei o ambiente com solução de água sanitária. Inoculei cerca de 2 - 1,5ml de água nos 4 buracos da extremidade dos copos (3 copos). Deixei a fita microporosa previamente cortada para que pudesse colar após a inoculação. Após cada vez que utilizava a agulha a banhava em álcool 70 e limpava o excesso com guardanapo. Após os 3 copos inoculados, percebi que a seringa não dará para inocular os 6 copos restantes*. Após os copos inoculados, coloquei-os dentro de uma caixa de isopor para incubação, junto a um termostato com aquecedor dentro de uma garrafa e um termo higrômetro para medir a temperatura, que vou tentar deixar em 28c°.

* Tenho algumas dúvidas e aproveitarei o tópico:
1 - Posso reutilizar a mesma seringa para a nova solução de esporos?

2 - Tenho copos prontos com substrato sem inocular, quanto tempo posso mantê-los? É necessário por na geladeira?

Depois informa como eles ficaram com a autoclavagem... :coffee:

Exporo, ficaram intactas! Ainda bem que não derreteram, mas eu dei umas 4 voltas no copo.

 

[HiagoRocha]

Fiz 4 pequenos furos nas 4 extremidades dos copos e coloquei mais uma camada de papel alumínio em cima para que no momento de abertura da PP o substrato não entre em contato com o ar.

No caso aqui, você poderia ter deixado para realizar os furos diretamente com a seringa no momento da inoculação, da uma garantia maior

* Tenho algumas dúvidas e aproveitarei o tópico:
1 - Posso reutilizar a mesma seringa para a nova solução de esporos?
2 - Tenho copos prontos com substrato sem inocular, quanto tempo posso mantê-los? É necessário por na geladeira?

Pode utilizar a mesma seringa sim, esterilizando em água fervente... Eu pessoalmente prefiro utilizar uma nova..
Se os copos estiverem hermeticamente lacrados para não perderem umidade pode guardar até um mês tranquilamente (tempo máximo que já guardei, mas que isso não sei dizer que danos poderiam haver ao substrato.)


Referente a neura em relação a limpeza, no começo é realmente muito complicado, mas com o tempo você vai entendendo que partes do processo são mais críticas e solicitam um cuidado maior..

Uma dica para que você substitua essa água com cloro, que realmente faz uma meleca danada é utilizar um desinfetante em aerosol.. Você encontra da marca lysol em supermecados, ou ainda o desinfex da organnat, encontro geralmente nas cobasi's...

Outra coisa... Vi que o sensor da temperatura não está perto dos copos, e como você deixou os copos colados com o aquecedor, o ideal seria colocar o sensor ali também, pois a temperatura pode ser maior.. E quando é assim eu costumo virar os copos uma vez por dia, para que o copo inteiro pegue o mesmo calor..



É isso ai meu, esta indo muito bem!!!

Boa sorte

 

[Spiritualcybe]

No caso aqui, você poderia ter deixado para realizar os furos diretamente com a seringa no momento da inoculação, da uma garantia maior



Pode utilizar a mesma seringa sim, esterilizando em água fervente... Eu pessoalmente prefiro utilizar uma nova..
Se os copos estiverem hermeticamente lacrados para não perderem umidade pode guardar até um mês tranquilamente (tempo máximo que já guardei, mas que isso não sei dizer que danos poderiam haver ao substrato.)


Referente a neura em relação a limpeza, no começo é realmente muito complicado, mas com o tempo você vai entendendo que partes do processo são mais críticas e solicitam um cuidado maior..

Uma dica para que você substitua essa água com cloro, que realmente faz uma meleca danada é utilizar um desinfetante em aerosol.. Você encontra da marca lysol em supermecados, ou ainda o desinfex da organnat, encontro geralmente nas cobasi's...

Outra coisa... Vi que o sensor da temperatura não está perto dos copos, e como você deixou os copos colados com o aquecedor, o ideal seria colocar o sensor ali também, pois a temperatura pode ser maior.. E quando é assim eu costumo virar os copos uma vez por dia, para que o copo inteiro pegue o mesmo calor..



É isso ai meu, esta indo muito bem!!!

Boa sorte

@HiagoRocha muito obrigado! Bom, tive que optar pela água sanitária diluída devido ao fato de não encontrar o lysol ou lysoform em nenhum lugar, então essa foi a única alternativa que tive. Coloquei o sensor próximo aos copos, está alcançando próximo aos 28c°, provavelmente durante a madrugada ocorrerá uma diminuição na temperatura já que está bem frio aqui, contudo, não pretendo deixar a incubadora no lugar onde está por muito tempo. Vou deixá-la no meu quarto, onde é mais quente. Havia colocado ele naquela posição para pegar uma média da temperatura dentro da incubadora. Da minha seringa sobraram apenas 10ml, irei inocular 0,5ml em cada copo, acredito que seja o suficiente, ou até menos que isso. Após isso sobrarão 2 copos. Tenho mais um copo, mas o substrato ficou muito no fundo e a agulha não vai alcançá-lo. Espero que dê tudo certo, pois o lugar em que inoculei não havia passagem de ar. Não foi uma inoculação digna de um mestre, mas foi o que consegui fazer . Darei notícias em breve!

 

[HiagoRocha]

É possível que quando inocular, escorra até o substrato... Realmente o ideal é a seringa passar totalmente a camada de vermiculita, ainda mais que você vai injetar pouco por copo..

Aconselharia você comprar uma agulha maior e se possível já fazer mais solução de esporo, porque dividir 0,5 ml nos 4 furos vai ser bem difícil, e se fizer em um furo só, o processo de colonização pode demorar um pouco mais..

 

[SmollckeR]

Com 0,5 em um furo só é possivel você colonizar seus copos sim e rapidamente. Os meus foram inoculados com 0.5 e 0,4 em alguns se quiser pode acompanhar como esta sendo aqui, e em 14 dias ja tive copos 100%

Em relação a seringa é aconselhável você comprar outra pois é um material descartável e é mais interessante pegar uma nova pois o risco de contaminação é 0 e é baratinha.
Eu mesmo não exterelizo seringa nem a agulha quando faço minha inoculação, apenas deixo a solução de esporos dentro de uma ampola que tenho aqui, você pode utilizar os potinhos de exames para deixar e todas vez que utilizar a seringa só tira ele do pacote dentro da glove box inclusive a agulha e não encosta em nada a não ser no momento de furar.

 

[Spiritualcybe]

19/06/2016 - Pessoal, obrigado pelas dicas! Vou inocular + 3 copos com oq tenho e no decorrer da semana irei confeccionar outra seringa! Panela já no fogo para esterilização, em breve atualizarei novamente!

 

[Spiritualcybe]

19/06/2016 - Atualizando: peguei a panela com os copos esterilizados já frios no fogão. Após isso, levei a mesma para a área de trabalho. Borrifei bastante solução de água sanitária no ambiente e deixei por 1 ou 2 minutos. Cortei a fita microporosa e a deixei preparada de antemão. Após isso, retirei o primeiro copo. Desta vez, já havia furado o copo e preenchido com a fita microporosa para a troca de ar e uma esterilização mais eficaz. Sei que me foi aconselhado a não furar o copo na esterilização, mas vi uma postagem do @Ecuador dizendo que seria mais eficiente com alguns furos. Pois bem, com o copo sobre a superfície, borrifei álcool 70 na mão e no alumínio, após isso, troquei a agulha para uma agulha nova. Esterilizei rapidamente os 4 furos com 0,5 ml, vi perfeitamente na minha visão periférica o líquido entrando no substrato e achei a quantidade até boa! Após isso, peguei a fita microporosa que já havia cortado e colei rapidamente nos 4 furos e tapei a seringa com a tampa. Fiz o mesmo processo com os outros 2 copos, com a diferença de banhar a seringa com álcool 70 após cada copo inoculado. Por fim, borrifei álcool 70 nos copos, escrevi a data de inoculação e coloquei na incubadora junto com os outros 3. A temperatura está entre 27 - 28c°. Concluo que ainda sobraram cerca de 2ml na seringa. Decidi que irei inocular +1 copo e guardar os outros 2 para utilizar em breve com uma nova seringa pronta. 7 copos é a quantidade máxima que cabe dentro da minha incubadora sem empilhar, e é um bom número também . É isso por enquanto pessoal, em breve irei esterilizar e inocular o último copo deste cultivo. Olhei os copos de ontem e ainda não há sinal do micélio (claro). Espero em breve trazer umas hifas zangadas nascendo dentro daqueles copinhos!

 

[Spiritualcybe]

Atualizando - 20/06/2016 - Pessoal, como havia dito, acabei de inocular o último copo. O processo seguido foi o mesmo do anterior, com a única diferença que desta vez eu dei uma utilidade pra Glovebox. Enrolei um plástico filme ao redor, deixando um pequeno espaço em baixo e lambuzei de água sanitária lá dentro . Essa forma de Glovebox (que na verdade nem é uma Glovebox, se não me engano é cabine de procedimentos, algo do tipo) peguei de um dos membros aqui do CM, não me lembro o nome da postagem, mas ele dizia algo sobre não detonar uma caixa novinha hehe! Enfim, meus agradecimentos pela contribuição do nosso amigo, eu já deveria ter feito isso antes! Ao todo foram 7 copos inoculados e estão incubados a 27C° com pequenas variações, como havia dito. Agora a única coisa que me resta é esperar e torcer para que o micelio se sobressaia! Provavelmente irei atualizar este tópico novamente dentro de uns 10 dias ou um pouco mais. Por enquanto é isso, pessoal. Vejo vocês em breve e com novas notícias.

 

[HiagoRocha]

Essa forma de realizar os procedimentos já traz uma segurança muito maior do que no ambiente aberto...

É isso ai meu, fazendo tudo certinho... Vai vir bons frutos pra você!!

 

[Spiritualcybe]

Essa forma de realizar os procedimentos já traz uma segurança muito maior do que no ambiente aberto...

É isso ai meu, fazendo tudo certinho... Vai vir bons frutos pra você!!

De fato, Hiago! Obrigado pelo apoio! Uma pena eu só ter feito isso no último copo. O jeito agora é torcer para ocorrer o mínimo de contaminações e, no melhor da hipóteses, não ocorrer nenhuma! Vou tentar adquirir ou montar uma lamparina para dar uma garantia a mais na esterilização da agulha. Outra coisa que terei que fazer na incubação é colocar uma garrafa de água quente lá dentro para passar a madrugada com uma temperatura melhor, já que estava a 25C° hoje pela manhã e também são 7 copos e alguns estão mais distantes da garrafa aquecida.

 

[Malahov]

já que estava a 25C° hoje pela manhã

25° está ótimo

 

[Spiritualcybe]

Bom, ainda não há nenhum sinal do micélio. Será que pode ser troca gasosa que esteja causando lentidão?